单纯疱疹病毒在不典型皮损及无皮损的生殖道分泌物检测情况的临床分析

方天英，李铁英

（1.海盐县人民医院，浙江嘉兴314300；2.海宁康华医院，浙江 海宁314300）

生殖器疱疹（Genital herpes，GH）为临床感染率最高的性传播疾病（Sexually transmitted disease，STD）。GH主要由单纯疱疹病毒Ⅱ型（Herpes simplex virus typeⅡ，HSV-2）侵犯生殖器皮肤黏膜引起，少数由单纯疱疹病毒Ⅰ型（Herpes simplex virus typeⅠ，HSV-1）感染所致，临床表现呈现多样性，典型病变常见脓疱、溃疡、水泡及结痂，病情迁延难愈，对患者生理及心理健康造成严重的影响。国外流行病学调查资料显示[1]：在性高危人群中HSV病毒亚临床感染率高达21.6%，患者无自觉症状或皮疹处于隐蔽部位。部分非典型症状及亚临床感染患者因疾病的隐匿性成为GH重要传染源[2]。本研究回顾性分析2016年1月—2017年12月我院STD门诊379例疑似生殖器单纯疱疹感染患者的HSV检测情况，旨在研究不典型皮损疑似患者生殖道分泌物HSV的检出情况，为GH的防治提供临床研究资料。

1 资料与方法

1.1 资料来源 379例疑似生殖器单纯疱疹感染患者均来源于2016年1月—2017年12月我院STD门诊病人，其中典型病变258例（水疱76例、结痂74例、脓疱59例、溃疡49例）设为典型组，男126 例，女 132例，年龄 18～49岁，平均（33.5±7.2）岁；121例非典型症状（尿道红肿39例、红斑36例、裂隙26例、宫颈糜烂20例）设为非典型组，男56例，女 65例，年龄 21～42岁，平均（32.3±6.8）岁；2组在性别构成上差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性，本研究经医院伦理会批准通过，患者享有知情权。

1.2 纳入标准 研究对象均有配偶感染史或婚外性生活史等高危因素，受检前2周内无抗生素、抗病毒类药物及激素使用史。

1.3 样本采集 对于典型病变受试者生理盐水清洗患处，用无菌棉拭子适当力度擦拭患处基底部取疱疹液、渗出液、水泡液及痂皮送检，非典型症状受试者男性取尿道拭子伸入尿道口2～4 cm旋转2周送检，女性取无菌棉拭子于宫颈口旋转2周送检。

1.4 实验室检查 采用荧光PCR检测HSV-2型DNA及HSV-1型DNA，试剂及质控品使用中山大学达安基因有限公司产品，全自动基因扩增仪为ABI7500，取棉拭子置于800 mL蒸馏水清洗，13 000转/min离心去上清，加50μL提取液于沉淀振荡2min，100℃煮沸10 min，13 000转/min离心待检，取2 μL上清作为扩增模板扩增，扩增条件：第一阶段95℃2 min，第二阶段93℃5 sec～55℃45 sec循环40次。结果判读严格遵循实际说明书，并设立阴性、阳性对照及质控品保证结果的有效性。HSV-2引物序列：5’-CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC-3’HSV-1引物序列：5’-CCTCGCGTTCGTCCTCGTCCTCC-3’。

1.5 统计学处理 数据分析采用统计学软件SPSS19.0，组间构成比率的比较采用卡方检验分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同皮损疑似HSV感染患者检查情况比较典型组HSV型检出86例，检出率33.33%，非典型组HSV检出17例（HSV-2型13例、HSV-1型4例），检出率14.05%，2组HSV检出率经卡方检验差异有统计学意义（P＜0.05），典型组HSV检出率较高；典型组不同皮损HSV-2型检出率经卡方检验比较，差异均无统计学意义（χ2=1.369，P=0.713，P＞0.05）；非典型组不同皮损HSV-2型检出率经卡方检验比较，差异均无统计学意义（χ2=0.779，P=0.855，P＞0.05），见表1。

表1 不同皮损疑似HSV感染患者检查情况比较例（%）

2.2 不同性别疑似HSV感染患者HSV检出率比较 男性疑似HSV感染患者HSV检出率24.73%，女性疑似HSV感染患者HSV检出率32.49%，经卡方检验分析比较，差异有统计学意义（P＜0.05），女性检出率较高。见表2。

表2 不同性别疑似HSV感染患者HSV检出率比较例（%）

3 讨论

生殖器疱疹在欧美等发达国家发病率居性传播疾病的第3位，仅次于非淋性尿道炎及淋病[3-4]，在我国近两年的生殖器疱疹年增长率高达70%，尤其在部分南方沿海发达地区，其发病率甚至超过了梅毒[5]。有研究资料显示[6-7]：90%的生殖器疱疹均由HSV-2型病毒感染所致，HSV-1型病毒及混合感染仅占10%。HSV-1型病毒主要引起口腔黏膜感染，HSV-2型病毒主要引起腰部以下及生殖器的感染，HSV病毒为嗜神经性病毒，人类为其唯一自然宿主，此类病毒感染难以彻底清除，大部分可发生潜伏感染尤其在神经节及角膜组织，此类组织不具活跃的新陈代谢易发生免疫逃逸[8]，在机体免疫力低下时潜伏病毒易造成病情的迁延反复，给患者的身心健康造成严重的伤害。

HSV病毒临床常见的检测方法包括细胞培养、血清学试验、免疫荧光及荧光PCR等方法，其中有较高灵敏性、特异性的荧光PCR检测近年在临床得到了广泛的应用。该方法结合分子标记、荧光共振能量转移对于潜伏期病毒检测有较大优势。本研究采用荧光PCR检测HSV病毒核酸并比较了不同皮损疑似HSV感染患者病毒的检出情况，研究数据显示：HSV病毒检出率典型皮损为33.33%，非典型皮损为14.05%。典型皮损HSV病毒检出率高于非典型组，差异有统计学意义。典型皮损多为活动期病毒含量高、毒性大。但数据中非典型组HSV并不低的检出率更应值得引起临床的高度关注。生殖器疱疹典型的皮损常易引起患者重视，而部分非典型皮损诸如裂隙、单个溃疡、红肿渗液性、硬结等也可能为HSV病毒感染所致，这部分患者常因无自觉症状易发生疾病漏诊而成为重要的传染源，多研究报道[9-11]：大多数HSV病毒亚临床感染患者均存在间歇性病毒排放，症状典型的患者60%病毒排放时间也发生在间歇期，而反复复发患者病毒排放率也更高。Pennington等[12]认为：所有生殖器溃疡和裂隙均应考虑生殖器疱疹的可能性，并行相应的HSV检测。对非典型皮损或无皮损的生殖道分泌物检测的临床意义在于HSV病毒亚临床感染人群的筛检[13]，这对于HSV感染及时诊断、治疗及传播的防范均有重要的临床意义。在本组研究中发生的4例HSV-1型病毒感染均为非典型皮损，仅表现为黏膜红斑及尿道红肿，是否基于HSV病毒致病的组织选择性及不同型别病毒致病毒力强弱，因样本量少仍需进一步深入研究。

HSV感染性别比较显示：女性HSV检出率为32.49%高于男性21.43%，差异有统计学意义。在女性中尤其妊娠女性HSV感染仍是生殖器疱疹、流产、早产、死产及新生儿感染等的主要原因[14]。有学者认为：女性HSV感染的风险性远高于男性[15]。这主要与女性的生理构造相对男性病毒的接触面更广，病毒的清除更难有关。本研究中部分疱疹性宫颈炎表现为弥漫性宫颈充血、宫颈糜烂。HSV病毒常累及宫颈口的鳞状上皮，与沙眼衣原体、淋球菌感染引起的黏液脓性宫颈炎有别，但于临床难以区别。

综上所述，HSV病毒导致的部分生殖器疱疹临床症状并不明显，对不典型皮损及无皮损的生殖道分泌物行HSV病毒检测有其合理性及必要性，亚临床生殖器疱疹的及时诊断、治疗对于生殖器疱疹的传播阻断有重要的临床意义。