虫草胃舒康对小鼠急性乙醇性胃损伤的保护作用

马东晓，马一涵，何广宏，李 艳

2.商丘市第四人民医院，河南商丘 476000

3.河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院)，河南洛阳 471002

急性胃炎胃损伤和消化性溃疡是临床常见疾病，发病原因多，发病机制复杂。在胃损伤的治疗过程中，中医药治疗应用广泛。中医认为，急性胃损伤应加强胃肠黏膜屏障功能，改善血液循环，发挥活血化瘀的作用，能够促进溃疡及早愈合，增强预防复发的效果。虫草胃舒康(Chongcao Weishukang,CCWSK)由砂仁、田三七、乌贼骨、乌药、白芨、川贝、蛹虫草等16味传统中药组成，具有活血化瘀、理气止痛、收敛系统的作用。临床上主要用于治疗消化性溃疡、药物等引起的急慢性胃黏膜损伤及消化功能紊乱等症状。

本研究通过小鼠急性乙醇性胃损伤模型[1-3]探讨虫草胃舒康对急性胃损伤的保护作用，为其临床开发提供实验依据。现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1动物健康清洁级昆明小鼠50只，雌雄兼用，体质量(33±3) g，由河南科技大学动物实验中心提供，动物许可证号：SCXK(豫)2015-0004。

1.1.2试剂无水乙醇(上海市西陇化工有限公司，批号：20130609)；4%甲醛溶液(市场自购)；虫草胃舒康各味中药(购于洛阳市百家药店)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)测定试剂盒(南京市建成生物科技有限公司，批号:20151030)；丙二醛(malondialdehyde,MDA)测定试剂盒(南京市建成生物科技有限公司，批号:20151003)；乐天胃舒宁颗粒(甘肃省西峰制药有限责任公司，批号：20150827)。

1.1.3仪器Epoch全波长酶标仪，美国BioTek公司。

1.2实验方法

1.2.1溶液及其配制无水乙醇蒸馏水配制成70%乙醇溶液。虫草胃舒康：取适量1.0 g·mL-1虫草胃舒康蒸馏水分别配制成6.25%和12.5%的虫草胃舒康溶液，备用。

1.2.2分组与给药健康小鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性对照药(25%胃舒宁颗粒组)、6.25% CCWSK组(低剂量组)和12.5% CCWSK组(高剂量组)，均采用灌胃给药，每天1次，共5 d。实验组小鼠70%乙醇(0.1 mL·10 g-1)灌胃诱导小鼠急性胃损伤。

1.2.3标本采集与测定酒精灌胃4 h后对小鼠进行眼球取血，检测各组小鼠血清MDA和SOD，然后颈椎脱臼处死老鼠并分离组织，记录胃损伤积分，积分方法采用Hou等、刘世艳等报道的方法[4-5]。

1.2.4检测方法MDA测定：吸取0.3 mL MDA检测工作液于0.5 mL离心管中，再加入0.1 mL的血浆。混合液在100 ℃水浴中保温30 min后，立即置于冰浴中冷却，10 000 r·min-1离心10 min，吸取300 μL血浆于96孔板中，测定样品在532 nm处的吸光度。SOD测定：测定前将试剂一、二、四室温放置，使试剂的温度不低于室温后再测定。试剂一、二、三，样品，试剂四，双蒸水按比例加入后充分混匀，室温静置30 min后，560 nm处测定各管吸光度。

2 结果

2.1虫草胃舒康的保护作用乙醇灌胃后，模型组的小鼠胃黏膜凹凸不平，黏膜受到损害，胃黏膜会充血、水肿以及毛细血管的扩张，黏膜表面可见出血点甚至大片瘀斑，与正常组比较小鼠胃黏膜损伤积分和抑制率差异有统计学意义(P<0.05)，说明造模成功。CCWSK低、高剂量组小鼠胃黏膜损伤积分别为(18.2±2.3)分和(13.3±2.1)分，与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)；低剂量组小鼠胃黏膜损伤抑制率为14.95%，与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)，高剂量组小鼠胃黏膜损伤抑制率为37.85%，与模型组相比差异有统计学意义 (P<0.05)，如图1。说明虫草胃舒康对小鼠急性乙醇性胃损伤有保护作用，并且高剂量组保护作用更强，见表1。

A:正常对照组；B:模型组；C:阳性对照组；D:CCWSK低剂量组；E:CCWSK高剂量组。图1 虫草胃舒康对小鼠急性乙醇性胃损伤模型胃组织的影响

2.2虫草胃舒康对小鼠SOD、MDA的影响乙醇灌胃后，模型组小鼠血浆SOD和MDA与正常组相比出现显著的升高，差异有统计学意义(P<0.05)；低剂量组小鼠血浆SOD和MDA分别为(383±65) U·mL-1和(9.69±1.69) nmol·mL-1，与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)；高剂量组小鼠血浆SOD和MDA分别为(481±50) U·mL-1和(8.21±1.25) nmol·mL-1，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，说明虫草胃舒康可以增强小鼠在乙醇性胃损伤过程中氧自由基的清除能力，具有降低氧化应激损伤的作用，见表2。

表1 虫草胃舒康乙醇小鼠急性胃损伤模型的保护作用

表2 虫草胃舒康对小鼠急性乙醇胃损伤模型血清SOD、MDA的影响

3 讨论

过量饮酒甚至酗酒可引发非常严重的社会问题，我国每年大约11万多人死于酒精毒性作用，急性乙醇摄取影响黏蛋白寡聚糖结构的合成，诱发氧自由基导致黏膜脂质过氧化，可引起胃黏膜糜烂、出血甚至溃疡形成。急性乙醇摄取可引起炎症因子和细胞因子的释放，对胃黏膜造成二次伤害，乙醇对胃黏膜的损伤是一个多途径的复杂过程，目前临床上治疗的方案仍较局限。研究乙醇性急性的胃黏膜损害具有重要的临床意义和社会意义[6-7]。

SOD为自由基清除剂，是黏膜的保护因子之一，其活力高低反映机体清除自由基的能力[8]。它广泛存在于生物体的各种组织中，能清除自由基O2.-(超氧阴离子自由基)，而O2.-具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损伤细胞膜，引起炎症等疾病。MDA为氧自由基攻击生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的终产物，可反映胃黏膜受自由基攻击所致损伤的程度[8]。CCWSK的病理学实验研究发现，其有减少局部炎症水肿的作用，为CCWSK保护急性乙醇性胃损伤提供了理论依据。本实验应用小鼠乙醇灌胃建立急性乙醇性胃损伤模型，研究CCWSK对其改善作用及其机制。在正常情况下，胃黏膜表面有一层动态的黏液-HCO3-屏障，起着物理隔离与中和胃腔内向黏膜表面渗透的H+的作用，以保护上皮细胞，避免直接受损[9]。乙醇属于脂溶性，大量高浓度的乙醇会直接破坏细胞的结构，引起组织缺血缺氧而导致黏膜组织的损伤[10]。吴灵飞等的实验研究表明，给大鼠灌胃乙醇后胃黏膜出现糜烂或出血，显示了这种损伤效应[11]。本实验的研究表明：模型组小鼠胃黏膜损伤明显，血清中MDA含量升高、SOD活力下降，表明脂质过氧化反应、炎症反应参与了乙醇致小鼠胃黏膜损伤的病理过程；CCWSK低、中剂量给药组病理损伤积分均比模型组低而损伤抑制率均比模型组要高，而且CCWSK低剂量组损伤抑制率低于高剂量组，说明CCWSK可以提高小鼠的损伤抑制能力，并且有剂量相关性。CCWSK对胃损伤动物血清SOD、MDA水平的影响结果显示，血清中MDA含量下降、SOD活力升高，说明血清中SOD含量增加、MDA含量下降，可能与CCWSK清除自由基而抗脂质过氧化、炎症反应并对胃黏膜的保护作用相关。对CCWSK抗炎作用的实验研究显示，该药具有抗炎作用[12-13]，说明CCWSK对胃黏膜的保护作用可能与降低血浆MDA含量、增加血浆SOD的含量有关[14-15]。但其对炎症因子的影响等机制尚需进一步研究。