葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）试剂盒性能验证

张炎胜 陈婷婷 甘月滨 张福辉

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate Dehydrogenase，G6PD）缺乏常见于我国长江流域及其以南各省[1]，福建省也属于高发区域，其是红细胞磷酸戊糖代谢途径中的一个关键酶，其催化反应生成的还原型辅酶Ⅱ（NADPH）是谷胱甘肽还原酶的辅酶，还原型谷胱甘肽（GSH）的含量对于保护红细胞膜、防止溶血具有重要意义[2]。G6PD的缺乏或者减少主要见于G6PD缺乏症，故G6PD定量检测试剂盒的性能验证有着重要意义。本实验室以中国合格评定国家认可委员会发布的2018医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明CNAS-CL02-A003为依据，制定了G6PD定量检测试剂盒性能验证方案，包括正确度、灵敏度、参考区间和抗干扰能力验证。

1 材料和方法

1.1 标本来源

用于精密度验证的质控物购自北京利德曼生化股份有限公司（批号612241G、622241D），用于灵敏度验证，线性范围验证，抗干扰能力验证的二级标准物质和参考品购自利德曼。用于正确度验证的样本来源于厦门市第一医院。用于参考区间验证的样本来源于我院体检中心的正常体检人群。

1.2 仪器和试剂

仪器使用美国贝克曼DXC800生化分析仪，试剂为利德曼萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）试剂盒，批号612231L，按实际说明书进行操作。

1.3 方法

1.3.1 正确度 取20份不同浓度的样本并与参加过原卫生部室间质评的实验室进行比对，计算出20份标本的相对偏差。根据CNAS-CL02-A003要求，至少80%的标本相对偏倚应小于1/2 TEa，因此正确度通过判断标准为：相对偏倚≤15%的个数所占比例应大于80%。

1.3.2 灵敏度 取低值标本进行稀释，每个稀释梯度检测10次，直至10次重复性变异系数（coefficient of variation，CV）大于20%时，取CV＜20%的最大稀释度检测均值为灵敏度。

1.3.3 参考区间 参考CNAS-CL02-A003文件搜集男女各20例体检健康人标本，上机检测每份标本测定2次取均值，若90%的检测值在厂家所提供的参考区间内（＞1 300 U/L），则认为参考区间为可接受。

1.3.4 抗干扰能力验证 配制不同浓度的干扰物溶液，将混合标本（不含脂浊、溶血、黄疸）与不同浓度的干扰物溶液以4 ∶ 1比例混匀进行测定；将混合标本与去离子水以4 ∶ 1比例混匀，作为对照进行测定。连续检测3次，计算加入干扰物的混合标本测值均值与对照样品的偏差，偏差值应小于10%。

1.4 统计学处理

使用SPSS19.0统计软件处理数据，计数资料用%表示。

2 结果

2.1 正确度评估结果

我院与参加原卫生部室间质评的厦门市第一医院比对结果见表1。比对的20份标本平均相对偏倚为2.33%，其最小相对偏倚到最大相对偏倚范围为1.01%～3.63%，相对偏倚≤15%的个数所占比例为100%。

2.2 灵敏度评估结果

如表2所示，当将低值样本稀释到1 ∶ 30时CV＞20%，取稀释度1 ∶ 25时的检测均值为灵敏度，因此灵敏度为1.03，符合试剂说明书要求。

2.3 参考区间评估结果

G6PD在健康人群中为右偏态分布，因此统计方法采用百分位数，用40例健康人标本数据验证结果的中位数为1 994 U/L，其最小值至最大值范围为1 530～2 448 U/L，所选标本的检测值100%落在大于1 300 U/L参考区间范围内。

2.4 抗干扰能力评估结果

如表3所示，胆红素＜400 μmol/L，VC＜3 g/L，HB＜3 g/L对检测结果无影响。符合试剂说明书要求。

3 讨论

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症是由基因突变引起的遗传性疾病，由于该基因为X连锁不完全显性遗传，G6PD基因位于X染色体长臂2区8带（Xq28）[3-4]，男性发病率高于女性[5-6]。全球约有4亿多人受到影响[7]。G6PD缺乏是诱发伯氨奎啉类药物性溶血、蚕豆病、新生儿病理性黄疸[8-9]、某些感染性溶血的主要原因。该病无法根治，但可以积极预防，对高发人群进行该指标的筛查，可以有效预防溶血症的发生。进行婚前体检、优生优育[10]和有效预防新生儿黄疸有重要意义[11-12]。近年来又有研究显示当患者输注G6PD缺乏的红细胞时会引起不良反应，可见G6PD检测的重要性。

目前，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症检测方法主要包括分光光度计比色法、酶活性定量分析和基于DNA聚合酶链式反应的分子筛查方法，其中酶活性定量分析可采用全自动直接定量法检测，样本为经过离心后的压积红细胞，直接检测红细胞膜上的G6PD，排除了定量比值法采用全血因红细胞量少而导致G6PD活性结果降低的可能，也有效地减少了白细胞膜G6PD及血浆中游离还原性酶对检测结果的干扰。该方法优点是基本实现了自动化分析，最大可能地减小了人为因素造成的误差，标本用量少、快捷，可快速进行大批量标本的检测。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试剂盒精密度＜5%，灵敏度高，可用于日立、奥林帕斯、贝克曼、西门子等市面上大部分常见的仪器，可广泛应用于临床。

综上所述，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试剂盒主要分析性能验证结果符合质量目标，能够满足临床的质量要求。对检测系统的性能进行有效的评估，有助于提高检测结果的准确性和可靠性。

表1 G6PD正确度评估

表2 G6PD灵敏度评估

表3 G6PD抗干扰能力评估