抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb及抗链球菌溶血素O检测在类风湿关节炎急性阶段的诊断价值*

高 明，杨晓英，毛晓莉△

(1.上海交通大学附属第六人民医院南院输血科，上海 201499；2.上海市奉贤区中心医院输血科，上海 201499)

类风湿关节炎急性阶段(ASRA)是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病，ASRA的发病可能与遗传、感染、性激素等有关。一旦发病，随着病情的发展进程而逐渐影响患者的生活质量，所以早期诊断、无创诊断，有利于缩短病程，大大改善患者预后[1-5]。抗β2糖蛋白Ⅰ抗体是抗磷脂抗体的主要组成部分，是沟通免疫与凝血两大系统的重要桥梁，在ASRA患者中会出现一定程度的升高[6]。膜糖蛋白GPⅠb是血小板发生病变的敏感指标，研究发现在ASRA患者中具有一定的诊断价值[7]。抗链球菌溶血素O是A组链球菌的代谢产物之一，可以溶解人红细胞，具有很强的抗原性，在ASRA患者的血清中通常检测到抗链球菌溶血素O值的升高[8]。以上指标在临床检测中广泛开展，但对ASRA的诊断价值未知，本研究采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析相关指标的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年1月至2018年1月上海交通大学附属第六人民医院南院收治的67例ASRA患者为病例组，其中男25例，女42例，平均(33.84±9.50)岁。选取院内体检健康者50例为对照组，其中男23例，女27例，平均(34.60±5.70)岁，ASRA患者按照《类风湿关节炎急性阶段诊断标准》筛选入组。本研究获上海交通大学附属第六人民医院南院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1膜糖蛋白GPⅠb检测 病例组和对照组均收集乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)7.2 mg抗凝血4.0 mL,1 500 r/min离心5 min，分离上层的富血小板血浆，加1%甲醛(PMA)室温固定，使用磷酸盐缓冲液(PBS)将血小板的浓度调整至(2.5～3.5)×107/L。50 μL CD42b-FITC (Becton Dickinson公司)与100 μL血小板溶液振荡混匀，避光常温孵育30 min，加2 mL 1×溶血素,室温反应15 min,1 500 r/min离心5 min。弃上清,以2 mL PBS洗涤2遍,最后以1%的甲醛固定30 min,上机获取细胞10 000个检测。上机测试分析,Beckman EPICSX型流式细胞仪上测定荧光平均荧光强度(Sample FL1 Median)的阳性百分标记率,记录结果。

1.2.2抗β2糖蛋白Ⅰ抗体检测 病例组和对照组均收集无添加剂全血5.0 mL,采用酶联免疫吸附试验间接法检测待测样本血清中抗β2糖蛋白Ⅰ抗体水平，3 000 r/min离心15 min。取血清100 μL加入至特异度抗原包被的微孔反应板中，37 ℃孵育60 min，洗板、拍板，加入50 μL(1滴左右)酶结合物，充分混匀，封板，37 ℃孵育30 min，再次洗板、拍板，加入显色液A、B各50 μL(1滴左右)，充分混匀，封板，37 ℃孵育15 min，加入50 μL(1滴左右)终止液，混匀。用酶标仪读数(波长450 nm)，空白对照孔校零，读取各孔吸光度(A)值。

1.3抗链球菌溶血素O检测 病例组和对照组均收集无添加剂全血5.0 mL,采用免疫比浊法检测待测样本血清中抗链球菌溶血素O水平，样本离心后，在全自动生化分析仪上进行检测，测定波长为540 nm，读取A值，对照标准曲线得出结果。

2 结 果

2.1病例组与对照组抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O的表达水平分析 两组抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O水平差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.000)，见图1、2和表1。

图1 膜糖蛋白GPⅠb低表达流式荧光图

2.2病例组各项指标与疾病的相关性分析 Pearson相关性分析显示，抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O与ASRA呈正相关。见表2。

图2 膜糖蛋白GPⅠb高表达流式荧光图

表1 病例组和对照组抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖、蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O水平的比较

组别n抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(RU/mL)膜糖蛋白GPⅠb(%)抗链球菌溶血素O(IU/mL)病例组6723.97±7.11∗14.19±6.81∗76.78±32.04∗对照组5015.98±6.015.12±3.7922.68±17.29

注：与对照组比较，*P<0.01

表2 抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O与ASRA的相关性分析

2.3抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O对ASRA的诊断价值 ROC曲线分析显示，抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O判断ASRA的灵敏度和特异度较好(均P=0.00)。β2糖蛋白Ⅰ抗体对ASRA的最佳诊断界值为21.84 RU/mL，此时的灵敏度为0.746,特异度为0.920，约登指数为0.666，kappa值为0.645。膜糖蛋白GPⅠb对ASRA的最佳诊断界值为14.79%，此时的灵敏度为0.672，特异度为0.940，约登指数为0.612，kappa值为0.584。抗链球菌溶血素O对ASRA的最佳诊断界值为51.32 IU/mL，此时的灵敏度为0.836,特异度为0.940，约登指数为0.776，kappa值为0.761。见表3、图3。

表3 抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O与ASRA的ROC曲线下面积分析

图3 抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O单项检测诊断ASRA的ROC曲线

3 讨 论

抗β2糖蛋白Ⅰ抗体是病理状态下抗磷脂抗体分布到细胞膜外，当抗磷脂抗体与血清中的β2糖蛋白Ⅰ型结合后即暴露出抗原位点，从而诱导产生的一类自身抗体[9]。对抗磷脂抗体综合征(其灵敏度30%～60%，特异度98%)和系统性红斑狼疮具有一定的诊断价值，在ASRA患者中可见升高，但具体诊断价值笔者查阅文献未见详细报道[6,10]。已有研究表明,ASRA发病机制可能是由于凝血系统与免疫系统共同作用导致的，前期筛查发现血小板膜糖蛋白GPⅠb在ASRA患者中有一定程度的升高[7,11-12]。同时，研究表明,类风湿关节炎的发病可能与某些微生物的感染有关，感染后引起异常免疫反应，链球菌也可能混杂在其间，部分参与了感染，因而出现了抗链球菌溶血素O， 类风湿关节炎患者抵抗力较差，容易受到链球菌的侵袭，在临床上常见到类风湿关节炎患者伴随有链球菌感染[13-17]。目前主要应用于临床的抗链球菌溶血素O诊断效能并不能完全满足临床需求，存在一定的诊断盲区，故本研究尝试将抗β2糖蛋白1抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O联合研究，以探讨其在ASRA中的诊断价值，提高其诊断效能。

本研究结果显示，ASRA病例组的抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O与对照组相比差异有统计学意义，认为抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O可以作为诊断ASRA的潜在指标。进一步相关性分析显示，抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O与ASRA呈正相关，故抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O具有诊断ASRA的效能。采用ROC曲线分析得出抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O各检测指标的详细诊断性能，其中抗链球菌溶血素O的诊断效能最为突出。

4 结 论

综上所述，抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O是ASRA诊断的良好指标，有助于ASRA的早期诊断，为临床及早对病情进行干预、监测提供有价值的信息。但是已有研究报道抗链球菌溶血素O并不能像红细胞沉降率、C-反应蛋白一样作为判断病情严重程度和衡量治疗效果的指标[16-17]。因此，在类风湿关节炎的检查中不宜单独使用抗链球菌溶血素O判断类风湿关节炎病情的发展，抗链球菌溶血素O仅限于在ASRA中或与其他检测指标联合诊断评估病情。