细胞蜡块对恶性胸腹水的诊断价值

王声耀

福建医科大学附属第二医院 (福建泉州 362000)

恶性胸腹水指的是发生于全身或胸腹腔的恶性肿瘤或癌性病变引起的腹腔、胸腔壁层出现弥漫性病变，以体腔液体异常增多为典型特征的病理表现。其中恶性的含义指的是恶性肿瘤、癌性病变，由此导致的胸腹水属于癌症患者晚期主要并发症类型，若存在胸腹水表现则进一步提示病灶易存在远处转移倾向[1]。关于晚期肿瘤合并恶性胸腹水的诊断传统以常规细胞学涂片检查为主，可获得一定效果，但尚存在较大进展空间。制作细胞蜡块并进行免疫组化染色可以检查多种肿瘤标志物，现有研究认为将该方式应用于晚期肿瘤合并恶性胸腹水的诊断具有较好效果。本研究旨在探讨细胞蜡块对恶性胸腹水的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2018年1月我院收治的晚期肿瘤合并恶性胸腹水患者60例，男35例，女25例；年龄45～73岁，平均(55.13±2.45)岁；确诊为肺癌20例，胃癌15例，结直肠癌15例，卵巢癌10例。患者均接受胸、腹腔穿刺置管术引流，或手术中进行腹腔冲洗，并将引流的胸腹水作脱落细胞检查，随后制成细胞蜡块并展开病理组织检查与免疫组化检查。纳入标准：经病理学检查确诊；符合恶性肿瘤的诊断标准；伴有胸腹水症状[2]。排除标准：合并两种或以上肿瘤疾病患者；伴有严重精神类疾病或认知障碍患者；依从性较差患者。本研究已经获得医院医学伦理委员会批准，患者及其家属均知情并自愿签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1常规细胞学检查

将引流的胸腹水经离心涂片处理后，进行细胞学检查。

1.2.2胸腹水细胞蜡块检查

采用福州迈新生物试剂有限公司提供的S-P试剂盒、DAB显示剂、CEA、Cal、CK、P53。首先取患者胸腹水标本，于4 ℃冰箱内静置20 min；待标本自然沉淀后，收集底部沉淀物质，离心处理10 min；离心完成后去除上清液，收集有核细胞与沉淀物，剂量以50～100 ml为宜；将其吸取至离心管内，离心处理5 min；待离心结束后再次去除上清液；加入AF液(500 ml甲醛原液+800 ml水+2包PBS缓冲盐+3 700 ml的95%乙醇混合液)固定，摇匀后静置10 min；3 000 r/min离心5～10 min后去除AF液；沉渣制成细胞块并放入10%中性甲醛固定液中4～6 h，然后常规自动脱水、石蜡包埋、切片处理。在胸腹水腊块制作完成后，进行免疫组化染色：首先对切片作脱蜡处理，采用PBS缓冲液冲洗2次，3 min/次；随后加入氯化氢(3%)封闭储存8 min，之后取出采用PBS缓冲液冲洗；并利用柠檬酸缓冲液高压修复90 s；待其自然冷却后冲洗3 min，冲洗2次；加入一抗，置于37 ℃环境内孵育1 h；待其孵育完成后采用缓冲液冲洗2次，5 min/次，并加入二抗，随后孵育30 min；采用缓冲液冲洗，滴加DAB显色液；最后采用自来水作充分冲洗后，行苏木精复染处理，待染色完成后进行脱水、封片。

1.3 临床评价

通过与组织病理学结果比较，统计两种检查方法的检出率；观察上皮细胞表面糖蛋白(moc-31)、癌胚抗原(CEA)在恶性胸腹水中的表达。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 细胞蜡块检查与常规细胞学检查的检出率比较

细胞蜡块检查检出37例，检出率为61.67%；常规细胞学检查检出21例，检出率为35.00%；细胞学蜡块检查检出率明显高于常规细胞学检查，差异有统计学意义(χ2=13.194，P<0.05)。

2.2 恶性胸腹水中上皮肿瘤标志物的表达

细胞蜡块HE染色背景干净，肿瘤细胞异型性明显，并表现为乳头状、腺管状排列；moc-31在转移性恶性胸腹水中表现敏感，且定位明确，染色背景干净(图1)；CEA在绝大部分腺癌中表达水平偏高，但染色背景稍重(图2)。

图1 moc-31在恶性胸腹水中的表达

3 讨论

胸腹水的产生机制较复杂，与体内外液体交换失衡及血管内外液体交换失衡有关。异常胸腹水是临床常见的一种疾病。由于胸腹腔恶性肿瘤或全身性癌变引起的胸腹腔壁层弥散性病变，可引起体腔液体急剧增加，产生大量胸腹水，即为恶性胸腹水。这种异常剧烈增长会抑制患者呼吸及循环系统的运行，从而导致患者死亡。恶性胸腹水是晚期恶性肿瘤疾病的常见并发症，在确诊出现癌性胸腹水的同时，基本证实了肿瘤病灶出现远处转移倾向，严重威胁患者生命安全[3]。对于晚期肿瘤合并恶性胸腹水患者，临床一般采取胸腔、腹腔引流术将胸腹水抽出，进行常规病理涂片检查。常规的细胞学涂片常会出现细胞核重叠、涂片太厚等情况，极其影响诊断结果。且由于取材的局限性，涂片往往需要多次送检才能检查出异常细胞，而异常细胞尚无法完全判断是否为恶性肿瘤细胞，也可能为涂片过程中的烦琐造成的细胞核挤压变形等情况，且涂片无法进行免疫组化鉴别。

恶性胸腹水的诊断一直是临床面临的难点。目前，细胞学检查仍是诊断恶性胸腹水特异性较好的方法，其原理在于恶性肿瘤细胞比正常细胞容易从原位脱落，故可用各种方法取得瘤细胞或组织颗粒，鉴定其性质。如采用浓集法收集痰、胸水、腹水或腹腔冲洗液等的细胞，用拉网法收集食管和胃的脱落细胞，用印片法取得表浅的瘤体表面细胞，用穿刺法取得比较深在的瘤细胞等[4]。但此方式若存在脱落到浆膜腔肿瘤细胞较少，或因各因素导致恶性肿瘤细胞出现破坏、分化良好腺癌细胞与增生细胞形态混淆等情况，细胞学检查灵敏度较低，不利于恶性胸腹水的鉴别诊断。近年来，有研究致力于联合多种生化指标对胸腹水性质进行鉴别，并提出联合检查患者胸腹水中多种生化因子，有助于提升恶性胸腹水诊断灵敏度、特异度、准确度，然而此优势仅存在于肿瘤细胞侵犯胸腹腔或脱落于浆膜腔积液内效果最佳[5]。

细胞病理学作为一种常见病理学检查方法，相较于组织病理学检查，采用传统细针吸取涂片存在不可忽视的缺陷，如样本量少、难以还原组织学结构、无法重复切片、难以进行特殊染色等。因此细胞学检查在晚期肿瘤合并恶性胸腹水的诊断中多用于筛查，或仅能给出倾向性诊断结果。细胞蜡块检查技术的引进弥补了传统细胞学的不足，具有操作简便、微创、快捷、可重复切片等优势。恶性胸腹水病理细胞学制作蜡块技术也就是将送检的胸腹水，利用病理技术流程处理，将其做成细胞学常规蜡块，并将其细胞成分储存于蜡块内，以便切片后采用常规显微镜诊断，完成细胞性质、类型的鉴别，达到诊断的作用。其临床意义包括以下几点：(1)增加了细胞涂片数量与密度，同时利于细胞的保存，既可重复多切片，又可辅助肿瘤免疫组化检查，有效提升了恶性胸腹水的诊断阳性率；(2)在检查到肿瘤细胞时，细胞蜡块可进行更好地分型，为肿瘤患者的后续治疗规范提供了重要参考依据；(3)细胞蜡块技术相较于脱落细胞学普通涂片准确性更高，储存更方便，因此其诊断更明确；(4)常规检查，往往由于患者免疫细胞出现过氧化氢酶较多，可迅速产生泡沫，导致检查中出现脱片情况，而细胞蜡块切片检查可抑制过氧化氢酶引起的泡沫；(5)细胞蜡块肿瘤标志物检查中由于肿瘤病灶细胞集中，可节省大量检查试剂，并可较好地避免检查边缘现象，提升了检查准确性[6]。本研究结果显示，细胞蜡块检查检出率明显高于常规细胞学检查，提示细胞蜡块检查在诊断晚期肿瘤合并恶性胸腹水中的效果更明显，表现更突出。

综上所述，胸腹水细胞蜡块的制备及进一步免疫组化染色更利于晚期肿瘤合并恶性胸腹水患者的检出，通过明确肿瘤病灶来源，对后续治疗提供参考依据，尤其对于留取标本困难的患者意义重大。