IL-12RB2 rs3790567A/G位点单核苷酸多态性与原发性胆汁性肝硬化易感性的Meta分析

顾俊霞， 李小珍， 张盈盈， 龚玉婷， 金建军

河南科技大学临床医学院 河南科技大学第一附属医院消化内科，河南 洛阳 471003

原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)，原名原发性胆汁性胆管炎[1]，其病因和发病机制至今尚不明确，研究相关基因对探索PBC发生的遗传机制具有重要的意义。PBC的特征是肝内中小胆管的损伤，导致慢性胆汁淤积，最终导致肝硬化。PBC目前被认为是一种复杂的免疫和遗传相关的系统性疾病，遗传易感性的存在又促进了免疫反应的产生[2-3]。PBC患病率为每年20～40/100 000，且有逐年升高的趋势。PBC的血清学标志是抗线粒体抗体(AMA-M2),但疾病早期检出率及特异性均较低[4-5]，典型的治疗方案是免疫抑制剂和熊去氧胆酸(UDCA)的联合应用。但UDCA治疗并不能阻断疾病进展，PBC发展到肝硬化失代偿期只能通过肝移植来解决[6]。所以研究基因易感性与PBC疾病发病关系对其早期诊断和治疗有非常重要的意义。

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目前，全基因组关联研究表明，基因多态性在PBC易感性中的重要作用[7-8 ]，与IL12A、IL-12RB2、HLA基因多态性密切相关，并成为PBC候选基因的研究热点之一[9-11]。IL-12是抗原提呈细胞(APC)产生，由小型的异源二聚体IL-12p35(由IL12A编码)和IL-12p40(由IL12B基因编码)组成，IL-12受体主要表达于活化的T细胞和NK细胞，而IL-12受体B2(IL-12RB2)主要在胆管上皮细胞的表达会导致胆管炎性反应的产生，进而造成胆管慢性损伤及胆汁淤积[12-15]。为了更好地了解IL-12在PBC中的作用和机制，大量的流行病学研究已进行了PBC与IL-12RB2 rs3790567A/G多态性的关系[16]。以G为等位基因的研究表明，有A次要等位基因突变的PBC患者发病率较对照组明显升高。然而，既往研究[17]表明，不同种族的结果并不一致，欧洲人群中的基因位点与日本、中国的易感性基因位点并不相同，因此，我们对6项符合要求的病例对照研究[18-23]进行了Meta分析，综合评价两者之间的关联，为PBC的早期诊断和治疗提供循证医学数据，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1检索策略按照PRISMA流程对检索到的文献进行处理[24]。文献筛选由2名研究者进行中英文检索。英文数据库：PubMed、The Cochrane Library、Embase、Web of Science；中文数据库：CNKI、万方数据库、中国生物医学文献数据 (CBM)。检索时限从建库至2017年5月，语言限定为中文和英文。同时检索相关文献的参考文献，采用自由词与主题词相结合的方式，英文检索词：(“primary biliary cirrhosis” or “PBC”) and (“interleukin-12” or “IL-12”) and (“single nucleotide polymorphism” or “SNP” or “genetic variation” or “genetic polymorphism” )；中文检索词：“原发性胆汁性肝硬化、原发性胆汁性胆管炎、基因多态性、IL-12RB2基因”,以题名、摘要和关键词进行检索。

分别在固定周期传输和变周期数据传输网络中发送3000个数据包,并重复20次试验。统计两种数据传输模式下监测软件接收数据情况。网络稳定性测试结果如图12所示。

1.4质量评估采用NOS评分系统进行文献质量评分[26]，用0～15分进行等级评分，>9分为高质量文献。

2.1文献检索及筛选结果通过检索共获得相关文献163篇文献，排除重复文献77篇，符合纳入标准的文献6篇[18-23]，剔除会议文献及数据不全的文献，最终纳入来自3个国家的6篇文献。纳入文献均为病例-对照研究，包括1 584例PBC患者，2 648名由健康人群组成的对照组。3篇为英文文献，3篇中文文献；样本量最小的为300例，最大为985例，按照PRISMA流程对检索到的文献进行处理[24](图1为文献筛选流程图，表1为纳入文献基本特征，表2为亚组分析结果)。6篇文献中，1篇评分为9分，其余评分为6～8分。

1.5统计学分析采用Cochrane协作网推荐的RevMan 5.3软件进行统计分析，按Meta分析的要求进行数据整理，建立数据库，完善表格。采用χ2检验对纳入的文献进行检验(P<0.05为检验水准)，若研究结果的效应量无明显统计学异质性，采用固定效应模型进行Meta分析，否则采用随机效应模型[27]。同时，结合I2对异质性进行定量分析。I2<25%，表明异质性较小；25%≤I2<50%为中度异质性，I2≥50%为高度异质性。异质性大者进行回归分析，按照样本量大小、研究人群、实验方法不同查找异质性来源。并绘制漏斗图，通过观察图形是否对称，评估发表偏倚。

1.2纳入及排除标准纳入标准：(1)PBC的诊断基于AASLD(美国肝病学会)或EASL(欧洲肝病研究协会)标准[16，25]；(2)研究IL-12基因多态性与PBC风险之间的关系；(3)病例对照研究；(4)能提供或计算各基因型频率或MAF(次要等位基因频率)、OR值和95%CI。排除标准：(1)不符合排除病例-对照研究；(2)重复发表的文献；(3)无可提取的基因型数据的研究；(4)评论文章、荟萃分析、会议摘要等。

1.3数据提取2名研究人员根据上述入选标准，独立提取了所有纳入研究中的相关数据。若有分歧，通过与第3名调查员讨论解决。从每一项研究中提取以下信息：第一作者、发表年份、种族、检测方法、诊断标准、研究类型以及不同基因型的病例数和对照组人数。

2 结果

(1)通风管道。口部的进风、排风管道穿过临空墙、密闭墙时应预埋通风穿墙短管，该处墙体开孔处的钢筋须进行加固处理；穿墙管与混凝土接触部分不得刷油漆。穿墙短管中间应设置密闭肋，密闭肋的厚度为5 mm、宽度为50 mm，该密闭肋与管材外侧应双面满焊，焊缝应严密。管道内部、外部除与混凝土接触部位外，均应刷两道防锈漆。密闭短管穿墙时，两端伸出墙面的长度应>100 mm。

图1 按PRISMA流程进行纳入文献筛选流程Fig 1 Flow chart of study selection of Meta by PRISMA

2.2Meta分析结果

2.2.2 以研究地理位置及种族不同进行亚组分析：主要从三个基因模型得出结论，表明种族间有差异性：亚洲人显性基因模型：AA+AGvsGG，OR=1.17，95%CI：0.89～1.55，差异无统计学意义(P=0.26)。高加索人显性基因模型：AA+AGvsGG，OR=1.30，95%CI：1.17～1.44，差异有统计学意义(P<0.05)；亚洲人隐性基因模型AAvsAG+GG，OR=1.39，95%CI：1.01～1.91，差异有统计学意义(P=0.05)。高加索人隐性基因模型：AAvsAG+GG，OR=1.94，95%CI：1.34～2.81，差异有统计学意义(P<0.05)；亚洲人等位基因模型 AvsG：OR=1.26，95%CI：0.70～2.26，P=0.44，高加索人AvsG，OR=1.02，95%CI：0.72～1.45，P=0.90(见表3)。

此Meta分析结果表明，在高加索人和亚洲人种之间，IL-12RB2 rs3790567的隐性基因AA模型和显性基因模型AA+AG 多态性会总体增加PBC的发病风险，与对照组相比，风险分别会增加1.23倍和1.61倍，模型的风险度为AA>GG>AG。可以说明AA基因的携带者与对照组相比发病风险高。在共显性模型: AGvsAA和等位基因模型AvsG中具有保护性作用。在基因型水平，我们综合分析表明，在不同模式的基因遗传模型中表现出对PBC不同的易感性，这就为临床中检测基因多态性提供必要性，在此Meta分析中，我们系统评价了 IL-12RB2 rs3790567多态性与PBC之间的易感性。国内外研究表明PBC在高加索人群和亚洲人群中存在差异，而此Meta是对IL-12RB2基因因子的首次研究，我们发现基因的突变在显性和隐性基因模型中显著增加了PBC疾病的发病风险，在此Meta分析的基础上可以说明AA基因的携带者与对照组相比发病风险高，并且IL-12RB2 rs3790567 AA基因易感性PBC患者在亚洲人和高加索人中并无明显差异，所以其可成为PBC的易感因子，这也可以为检验学提供循证医学依据。

2.2.1 分别从5个基因模型进行分析：显性模型：AA+

温度对主梁挠度有重要影响，必须予以足够重视。相比之下日温度实际变化复杂，特别是骤变温度与日照作用，易使主梁顶板和底板产生一定温度差，导致主梁挠曲；与此同时，还有可能造成桥梁墩身位移。季节性温度差异造成的挠度影响相对简单，因为它属于均匀变化，在采集到所有节段在不同施工环节中的温度后，将数据输入到计算机即可采用相应的软件对挠度进行计算。因此，为了解箱梁内部和外部温度差，以及温度在箱梁上的实际分布状况，需在梁上布置测点予以实时观测，进而通过分析找出温度变化特点与规律[4]。

表1 纳入文献特征表Tab 1 The characteristics of included studies

注: AASLD: America Association for the Study of Liver Diseases, EASL: European Association for the Study of Liver Diseases。

表2 纳入文献基因型分布情况Tab 2 The genotype distribution of included studies

图2 显性基因模型与PBC发生的风险性森林图Fig 2 The forest figure of risk analysis between dominant model and PBC

图3 隐性基因模型与PBC发生的风险性分析森林图Fig 3 The forest figure of risk analysis between recessive model and PBC

图4 等位基因模型与PBC发生的风险性分析森林图Fig 4 The forest figure of risk analysis between model of single gene and PBC

图5 共显性基因模型与PBC发生的风险性分析森林图Fig 5 The forest figure of risk analysis between model of codominant gene and PBC

图6 共显性基因模型与PBC发生的风险性分析森林图Fig 6 The forest figure of risk analysis between model of codominant gene and PBC

基因型 高加索人OR (95% CI)P值I2/%亚洲人OR (95% CI)P值I2/%AA+AG vs GG1.30(1.17～1.44)0.000101.17(0.89～1.55)0.2682AA vs AG+GG1.94(1.34～2.81)0.000401.39(1.01～1.91)0.058A vs G1.02(0.72～1.45)0.90861.26(0.70～2.26)0.4494

2.3发表偏倚与敏感性分析漏斗图结果显示，图形大致对称，所有点都在95%CI内，P>0.05，认为没有显著的发表偏倚(见图7)。1篇[21]为影响显著异质性较大因素，可能与该文献纳入的样本量较小有关。本文将每个研究按所占权重逐一剔除进行敏感性分析，并没有影响Meta分析结果，不能认为有显著偏倚发生。说明纳入文献的稳定性良好，本研究结果真实可靠。

图7 漏斗图结果Fig 7 Funnel graph results

3 讨论

AGvsGG，OR=1.20，95%CI：1.11～1.29，差异有统计学意义(P<0.05)；隐性模型：AAvsAG+GG，OR=1.59，95%CI：1.25～2.02，差异有统计学意义(P<0.05)；共显性模型：AGvsAA，OR=0.83，95%CI：0.53～1.32，差异有统计学意义(P<0.05)；GGvsAA，OR=0.03，95%CI：0～0.07，差异有统计学意义(P<0.05)；等位基因模型 AvsG，OR=1.02，95%CI：0.72～1.45，差异无统计学意义(P>0.05)(见图2～6)。

目前PBC的病因机制尚未完全阐明，诊断和治疗方法仍需进一步提高，很多患者就诊过程中已被发现进展为严重的肝硬化阶段，新的遗传学和分子生物学标志物已逐渐成为PBC早期预防和诊治的重要监测指标。目前的研究[24]表明，IL-12基因多态性可能与多数自身免疫性疾病的遗传易感性有关，已有研究揭示特定的等位基因与强直性脊柱炎(AS)之间的关联，贝切赫特病(BD)、银屑病、多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、炎症性肠病(IBD)、类风湿性关节炎(RA)等有密切联系[28-29]。IL-12B基因多态性已被证明与1型糖尿病、RA相关与毒性弥漫性甲状腺肿(GD)和BD无关[30]。因为在PBC中并无相关的Meta分析表明与PBC相关研究，所以本次课题研究很有必要性。

全基因关联性基因分析表明，IL-12RB2基因位点是对PBC影响最大的因子，IL-12信号通路是导致胆汁破坏和随后肝硬化的效应机制的关键因素，IL-12RB2是由IFN-γ上调和IL-12所诱导[31]，这个过程是一个IL-12依赖的自我保护的自身免疫机制，从而导致对胆管细胞的破坏[32-34]。所以，我们认为具有IL-12RB2特定基因携带者，会导致PBC较快进展，这将是对病因学的一大贡献。

手术治疗的效果取决于患者的一般情况和免疫力。老年患者，营养不良和酗酒是预后不良的因素。手术切除的死亡率大约为11～28%[7]。经皮肺脓肿外引流相对于开胸手术来说是较为安全的方法，并且具有保留肺功能的优点，是脓肿邻近壁层胸膜患者的首选治疗方法，特别是对于有较高手术死亡风险的患者[8,9]。由于手术通常伴有较高的并发症发生率及死亡率，而CT引导下肺脓肿穿刺引流的成功率为90%，因此，CT引导下肺脓肿穿刺引流被推荐为药物治疗失败后的首选治疗[10]。

本系统评价仍有很多局限性，首先，我们可以进一步观察其他变量，如年龄、性别、种族、体质量指数、饮酒状况和其他生活方式等因素进行更精确的评估。其次，只纳入英文和中文的文献，这可能是存在偏倚的因素。第三，汇总分析显著的异质性，我们采用随机效应模型，并进行敏感性分析，并未影响Meta分析的结果。第四,亚组分析中研究的数量比较小，还需要大样本、多中心的研究进一步证实。此外，环境因素对基因型的潜在影响也应该引起重视。

该Meta分析证实了IL-12RB2多态性与PBC易感性有显著的关系。结果表明，IL-12RB2 rs3790567多态性隐性模型AA和显性基因模型AA+AG中会增加亚洲人和白种人的PBC的发病风险。还需更大的、多中心的研究来论证我们的结论，更全面评价PBC的诊断及对治疗的意义。