铜绿假单胞菌多重耐药情况分析

叶秋英，许春，付名丰，丁岚

1.江西医学高等专科学校，江西 上饶 334000；2.江西医专第一附属医院，江西 上饶 334000

铜绿假单胞菌，即绿脓杆菌，广泛分布于自然界，存在于人体皮肤、肠道、呼吸道等连通外界的腔道中，铜绿假单胞菌为非发酵革兰阴性杆菌，有鞭毛，运动活泼，属于条件致病菌，为医院感染的一种主要病原菌[1]。对于恶性肿瘤患者、血液疾病患者、基础性疾病患者，以及长期应用抗生素治疗者，极易发生铜绿假单胞菌感染，进一步引发菌血症、败血症等，严重者出现死亡。本文将对铜绿假单胞菌多重耐药情况进行分析，为临床实践提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究涉及100株多重耐药铜绿假单胞菌，研究时间为2017年2月-2019年1月。标本类型包含痰液、血液、腹腔积水、伤口分泌物、腹水等。

1.2 方法 使用设备：全自动细菌生化鉴定和药敏分析仪（系统：vitek2compact系统；生产厂家：法国梅里埃）；PCR扩增试剂盒、DNA marker扩增试剂盒，生产厂家均为：上海生工公司。

所有患者均行微生物病原菌检验：以临床操作规范为指导，对患者标本进行收集，并立即送检，确保检验环境无菌，采用微生物检验方法分离与检查。以有关标准为依据，进一步试验，以纸片扩散原理性药敏试验检验，检查病原菌耐药性，测量结果的判读严格执行临床与实验室标准化协会规定（2014年）。耐药基因检测：其目的基因为：膜孔蛋白oprD2等基因。应用煮沸法进行多重耐药菌株的DNA提取，选取单个菌落置Ep管内，使用100 ℃煮沸约10 min，离心操作取上清液，作为PCR扩增模板使用。PCR反应体系由以下组成：50 uL的VIM-2基因检验体积，0.25 uL的Tap酶、5 uL的10＊PCR buffere、5 uL的dNTP、5 uL的模板、1 uL的上游引物，1 uL的下游引物F，32.75 uL的超纯水；反应条件为：5 min的95 ℃预变性，1 min的95 ℃预变性，40 s的55 ℃退火，40 s的72 ℃延伸，10 min的72 ℃延伸，循环30个，中止保存环境为4 ℃。PCR扩增产物5 uL与琼脂糖凝胶电泳（含12%的溴化乙锭）混合，对其结果详细记录。

1.3 观察指标 分析科室分布、标本来源、耐药模式分析。

2 结果

2.1 科室分布分析 100株多重耐药铜绿假单胞菌中，科室分布重症医学科18例（18%），烧伤整形科15例（15%），呼吸科30例（30%），急诊科7例（7%），心胸外科5例（5%），介入病房7例（7%），胃肠外科8例（8%）。

2.2 标本来源分析 所有患者的标本来源痰35例（35%），全血14例（14%），伤口分泌物23例（23%），胸腔积液或者腹水9例（9%），咽拭子10例（10%），其他9例（9%）。

2.3 耐药模式分析 100株多重耐药铜绿假单胞菌中，对头孢菌素类、青霉素类具有耐药性，另外，对于碳青霉烯类具有较高的耐药率，多重耐药铜绿假单胞菌耐药率为13.2%，其中亚胺培南耐药率最高为30.2%，其次为氨曲南20.1%，多黏菌素B未出现耐药菌株。

3 讨论

本次研究结果显示：100株多重耐药铜绿假单胞菌中，高发于呼吸科、重症监护室，主要由于该部分患者呼吸道伴随基础性疾病，以及伤口愈合不佳、长期用药者[2]。研究结果，标本以痰液、伤口分泌物为主，这主要由于部分慢性疾病患者或者血液系统疾病患者，特别是老年患者易引发肺部感染，存在肺炎可能，用药效果不佳，可采用痰液标本进行培养。临床在治疗感染性疾病时主要采用抗菌药物，而长期应用抗菌药物治疗极易出现耐药性[3]，或者引起肠道内菌群失调，引发感染。在铜绿假单胞菌菌株的分离检验中，存在产粘液性，对检验结果产生影响，同时还不利于治疗，这主要由于粘液形成为铜绿假单胞菌出现耐药性的一个机制。因此应用铜绿假单胞菌治疗成为临床关注的重点[4]。研究结果中，碳青霉烯类具有较高的耐药率，多重耐药铜绿假单胞菌耐药率为13.2%，其中亚胺培南耐药率最高为30.2%，其次为氨曲南20.1%，多黏菌素B未出现耐药菌株。

综上，铜绿假单胞菌感染建议少用碳青霉烯类药物，同时在治疗上需制定感染控制措施，持续耐药监测铜绿假单胞菌，避免多重耐药性铜绿假单胞菌扩散与流行。