胃癌组织中CD151、c-Met、Integrin α3表达及其与临床病理特征的关系

贾长河，谢毅，张昊，宋晓霞，任颖，任秀华

(1郑州大学人民医院 河南省人民医院，郑州450000；2郑州大学)

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，虽然部分患者通过手术治疗可以达到根治目的，但术后复发转移严重影响患者生存。癌细胞与细胞外基质(ECM)黏附是恶性肿瘤侵袭和转移的首要步骤，胃癌细胞与ECM黏附受细胞膜表面特异受体介导，其中CD151、c-Met、整合素(Integrin)家族为重要的细胞膜表面分子。c-Met信号转导参与肿瘤转移的多个过程，包括减弱细胞与细胞之间的黏附作用、增加肿瘤细胞表达基质金属蛋白酶2、诱导尿激酶型纤溶酶原激活剂表达升高、促进细胞的运动能力、参与肿瘤新生血管生成等[1，2]。与c-Met类似，Integrin介导的细胞黏附与信号转导也在肿瘤侵袭和转移的多个过程中发挥作用，其介导的信号转导与肿瘤细胞侵袭与运动、ECM降解、肿瘤新生血管的生成、抑制肿瘤细胞凋亡等有关[3]。CD151是一种细胞表面分子，它可以与Integrin、c-Met或其他受体结合形成功能复合物，介导下游信号传导途径，调控肿瘤的侵袭和转移[4,5]。探讨CD151、c-Met、Integrin在胃癌中的表达情况以及它们之间的相互关系，有助于胃癌侵袭转移机制的研究，为将来开发胃癌靶向单克隆抗体药物提供依据。本研究观察了胃癌组织中CD151、c-Met、Integrin α3的表达变化，分析三者与胃癌临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2015年4～10月在河南省人民医院行胃癌根治术的48例胃癌患者，男28例、女20例，年龄(56.0±8.5)岁。高、中分化腺癌25例，低分化腺癌23例(包括5例印戒细胞癌)；有淋巴结转移25例，无淋巴结转移23例；病变穿透浆膜26例，未穿透浆膜22例；脉管侵犯28例，无脉管侵犯20例。患者术前均未接受化疗或放疗。取手术切除的胃癌原发灶组织作为观察组，距肿瘤边界5 cm以上的正常胃黏膜组织为对照组。本研究经河南省人民医院伦理委员会审批通过，并征得患者知情同意。

1.2 胃癌及癌旁组织中CD151、c-Met、Integrin α3表达检测 采用免疫组化SP法。将胃癌及癌旁组织标本用4%甲醛溶液固定后，石蜡包埋，连续切4 μm厚切片；常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水；柠檬酸抗原修复 10 min，自然冷却，PBS冲洗；3% H2O2封闭内源性过氧化物酶，PBS冲洗；滴加山羊血清封闭后，加入一抗(CD151、c-Met抗体工作液浓度为1∶100，Integrin α3抗体工作液浓度为1∶200)，4 ℃过夜；加入二抗(兔多克隆抗体)，37 ℃孵育30 min；滴加辣根酶标记卵霉链白素，37 ℃孵育30 min，PBS冲洗；DAB显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知阳性胃癌标本作为阳性对照。由两位病理科医师双盲阅片。CD151、c-Met、Integrin α3蛋白阳性表现为细胞膜呈棕黄色，胞质内或胞核内偶可出现着色。每个标本随机观察10个高倍视野，每个视野计数100个细胞，根据着色细胞百分率判断结果。着色细胞≥10%为阳性，<10%或无着色为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组CD151、c-Met、Integrin α3表达比较 观察组CD151、c-Met、Integrin α3阳性表达率分别为79.17%、66.67%、43.75%，对照组分别为12.5%、8.33%、6.25%，观察组CD151、c-Met、Integrin α3阳性表达率均高于对照组(P均<0.05)。

2.2 胃癌组织中CD151、c-Met、Integrin α3表达与患者临床病理特征的关系 胃癌患者中，有淋巴结转移者、侵及浆膜者、有脉管侵犯者的CD151、c-Met、Integrin α3阳性表达率分别高于无淋巴结转移者、未侵及浆膜者、无脉管侵犯者(P均<0.05)。CD151、c-Met、Integrin α3阳性表达率在不同性别、年龄、分化程度间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 胃癌组织中CD151、c-Met、Integrin α3阳性表达与胃癌临床病理特征的关系(%)

2.3 胃癌组织中CD151、c-Met、Integrin α3表达的关系 胃癌组织中CD151与c-Met、Integrin α3表达呈正相关(r分别为0.56、0.38，P均<0.05)，c-Met与Integrin α3表达呈正相关(r=0.43，P<0.05)。

3 讨论

胃癌是严重威胁人类健康的常见恶性肿瘤之一。目前针对胃癌的治疗措施主要包括D2根治性手术、全身化疗、局部放疗等传统的综合治疗手段。然而进展期胃癌的综合治疗疗效仍欠理想。靶向治疗是以肿瘤细胞过度表达的某些特定的标志性分子为靶点，选择针对的阻断剂干预与肿瘤发生发展密切相关的信号转导通路，从而达到抑制肿瘤增殖生长、侵袭及转移效果的新兴治疗方式。其具有特异性杀伤肿瘤细胞、不良反应小的优势，现已成为胃癌个体化精准治疗研究的重点。目前应用于临床的主要有针对HER家族信号通路的靶向药物(如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗等)和针对VEGF信号通路的靶向药物(如贝伐珠单抗、阿帕替尼等)，但疗效尚不满意，因此迫切需要开发更多新的特异性强的靶向药物。CD151、c-Met、Integrin α3为重要的细胞膜表面分子，研究三者在胃癌中的表达情况以及它们之间的关系不但有助于胃癌侵袭转移机制的研究，更有利于胃癌靶向单克隆抗体药物的开发研究。

CD151是重要的细胞表面分子，通过与其他细胞表面分子相结合，介导细胞内信号传导，参与细胞增殖、黏附、运动、血管生成、半桥粒形成和转移等病理生理过程[6]。Yue等[7]证实，CD151抗体能阻止肿瘤细胞从原发灶脱离；Kim等[8]证实，CD151单抗抑制癌细胞体内转移，将CD151 cDNA转染肿瘤细胞可增加细胞的迁移。临床研究表明，CD151的表达与淋巴结转移相关[9，10]。本研究结果显示，胃癌组CD151阳性表达率高于对照组，且淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者，侵及浆膜者高于未侵及浆膜者，脉管侵犯者高于无脉管侵犯者。提示CD151的高表达与胃癌细胞的浸润、转移有关。

c-Met是间质上皮细胞转化因子，也是肝细胞生长因子的受体，和后者结合后激活该受体的酪氨酸激酶活性，促进多种类型细胞的生长、迁移和形态学改变。c-Met广泛表达于人体各种正常组织，但在多种肿瘤组织中呈现出异常的高表达、突变或活性改变。c-Met基因的异常活化参与多种实体癌的发生、发展过程，促进肿瘤的侵袭、转移和血管生成，与肿瘤的浸润深度、Duke分期、淋巴转移及远处转移密切相关[11,12]。研究表明，c-Met单克隆抑制剂可以抑制肿瘤细胞的生长和转移[13]。本研究结果显示，胃癌组c-Met阳性表达率高于对照组，且淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者，侵及浆膜者高于未侵及浆膜者，脉管侵犯者高于无脉管侵犯者。提示c-Met的高表达与胃癌细胞的浸润、转移有关。

Integrin是一种介导细胞和ECM之间连接的跨膜受体。Integrin在体内表达广泛，大多数细胞表面都可表达一种以上的Integrin，在多种生命活动中发挥关键作用。Integrin α3属于Integrin家族之一，其可通过促进肿瘤细胞与ECM间的黏附，使肿瘤细胞脱离原发灶进入周围组织或血管。本研究结果显示，胃癌组Integrin α3阳性表达率高于对照组，且淋巴结转移者高于无淋巴结转移者，侵及浆膜者高于未侵及浆膜者，脉管侵犯者高于无脉管侵犯者。提示Integrin α3的高表达与胃癌细胞的浸润、转移有关。

CD151、c-Met与Integrin都属于肿瘤细胞表面重要的跨膜受体，可相互协作介导与肿瘤侵袭和转移有关的信号转导。CD151可与多种Integrin相结合，是将Integrin接受到的各种生物信号转导到细胞内的重要结构基础，从而将Integrin与胞内磷酸化-去磷酸化过程连接起来[14]。c-Met与Integrin信号系统在肿瘤细胞表面，下游信号以及两者表达水平上存在精密的相互调控[15]。CD151通过与各种跨膜蛋白相互作用形成复合物发挥生物学功能[16]。Wang等[4]报道，CD151-Integrin复合物与HGF配体c-Met形成复合物，在敲除CD151后HGF诱导的细胞增殖与转移几乎完全抑制。本研究结果显示，胃癌组织中CD151与c-Met、Integrin α3表达呈正相关，c-Met与Integrin α3表达呈正相关。提示三者可能相互作用，共同参与了胃癌的侵袭及转移。由于随访时间尚短，三者与胃癌生存预后的关系需要以后进一步研究。

综上所述，胃癌组织中CD151、c-Met、Integrin α3表达升高，三者可能共同参与了胃癌的侵袭和转移，有可能成为评估胃癌侵袭、转移能力的新指标及胃癌靶向治疗的新型分子靶点，联合检测CD151、c-Met和Integrin α3表达可能为胃癌的诊断、预后判断及治疗提供参考依据。