部分猪场哺乳仔猪腹泻流行病学调查

李涛 屈平平 孙霞 王志远

（山东畜牧兽医职业学院 261061）

1 试验材料

1.1 检测样品来源

110 份病料样品均来自30 个猪场不同批次的发病哺乳仔猪。

1.2 试剂与仪器

普通营养琼脂、伊红美蓝琼脂、麦康凯琼脂、LB 肉汤培养基，北京陆桥技术有限责任公司生产；革兰氏染色液，杭州滨和微生物试剂有限公司生产；微量生化发酵管及配套试剂，青岛海博生物技术有限公司生产；SK-1 快速涡匀器，中外合资深圳天南海北有限公司生产；PCR 仪、电泳仪、Gel Doc XR 凝胶成像系统，BIO-RAD 公司生产；BS-210S 型电子分析天平，北京赛多利斯天平有限公司生产；BHC-1300ⅡA/B3 型生物洁净安全柜，苏州洁净设备有限公司生产；PYX-DHS-X 型隔水式电热恒温培养箱，上海市跃进医疗器械厂生产；可调微量移液器，德国Eppendorf 公司生产；高压蒸汽灭菌器，日本Panasonic 公司生产。

2 试验方法

2.1 病料中细菌的分离培养鉴定

2.1.1 细菌分离培养

取采集的病料样品，在鲜血琼脂、伊红美蓝或麦康凯平板上进行分区划线，倒置于37℃恒温箱培养18～24h 后，挑取疑似单个菌落，于普通琼脂平板上分区划线进行纯培养，倒置放于37℃恒温箱，培养18～24h 后，将平板放置于4℃中保存，待用[1-2]。

2.1.2 革兰氏染色镜检

取洁净的玻片在火焰上反复通过几次，用接种环挑取1～2环生理盐水，用接种环挑取纯培养的菌落边缘少许细菌，与玻片上的生理盐水混匀，涂抹均匀，自然干燥，火焰固定。按常规步骤进行染色，油镜观察待检菌的形态、大小、颜色、排列方式[3-4]。

2.1.3 生化鉴定

对分离的细菌进行生化实验，用青岛海博革兰氏阴性细菌鉴定系统进行21 项生化实验，并把生化反应的结果转换为一个8 进制数，通过提供的标准数据库查询系统可得到实验菌株归属的相对概率、T 值和R 值，对菌株的归属进行鉴定[5-6]。

将细菌各项生化反应结果填入附赠的记录卡中，依次每3项为一组，若这3 项反应均为阳性，则分别记为1、2、4，若为阴性，则相应项记为0。将每组3 项的数值相加，共7 组，组成一个7 位数。将所得7 位数输入数据库系统中即可进行查询。使用前，所有试剂（21±3） ℃放置直至达到此温度。打开包装，取出微孔板。

2.2 病料中病毒的PCR 检测

取病死猪的脾、肺、淋巴结、扁桃体、肠及内容物等用生理盐水按照1∶5 比例匀浆，反复冻融3 次以便于病原释放，提取核酸及PCR 检测[7]。

2.3 寄生虫的检测

将发病的哺乳仔猪剖检，取其肠道及内容物，置于干净的载玻片上，滴加适量生理盐水，盖上盖玻片，分别用显微镜的低倍镜、高倍镜和油镜观察是否有寄生虫的存在[8]。

3 试验结果

3.1 病料中细菌的检测结果

细菌引起的哺乳仔猪腹泻检出率为11.82%，其中主要是大肠杆菌感染引起的仔猪黄白痢，魏氏梭菌感染引起的仔猪红痢也有发生，见图1～2，表1。猪黄痢是新生仔猪的一种急性致死性较高的传染病，常发生于出生后7d 之内，又名早发性大肠杆菌病。仔猪白痢，常发生于10～30 日龄，又称迟发性大肠杆菌病，病程较短，长的1 周左右，有的仔猪能自行康复，病死率低。仔猪红痢又名仔猪传染性坏死性肠炎，仔猪肠毒血症，主要发生于1 周龄以内的新生仔猪，以排出红色带血的稀便为特征。本病发生快，病程短，病死率高。

图1 大肠杆菌

图2 魏氏梭菌

表1 病料中细菌的检测结果

3.2 病料中病毒PCR 检测结果

病毒引起的哺乳仔猪腹泻检出率为88.18%，主要有猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒，其中猪流行性腹泻病毒感染率最高，猪传染性胃肠炎病毒感染率较低，参见图3，表2。

图3 部分病料病毒的PCR 扩增结果

表2 病料中病毒PCR 检测结果

3.3 病料中寄生虫的检测结果

寄生虫引起的哺乳仔猪腹泻检出率为15.45%，主要有球虫、小袋纤毛虫和滴虫。猪小袋纤毛虫病是由结肠小袋虫寄生于猪大肠，导致患猪出现腹泻症状的一种人畜共患原虫病，一般呈阴性感染。当仔猪感染传染性胃肠炎、猪瘟、沙门氏菌病时，肠黏膜发生炎症反应，虫体随即侵袭到黏膜内大量繁殖，导致溃疡性结肠炎，而发生腹泻，参见图4～5，表3。

图4 猪等孢球虫

图5 经瑞氏-吉姆萨染色的小袋纤毛虫

表3 病料中寄生虫的检测结果

4 综合防控措施的制定

4.1 细菌性腹泻

进行药敏试验，选择最敏感的抗菌素。大肠杆菌性腹泻，从药敏试验中筛选氯霉素类、氨基糖苷类、头孢类等抗生素药物进行治疗，梭菌性肠炎选择青霉素类、头孢类抗生素进行治疗[9]。

4.2 病毒性腹泻

综合防控，防止继发感染，降低死亡率。哺乳仔猪的病毒性腹泻没有特效药物可以治疗，主要通过加强饲养管理和疫苗预防来防控。对症疗法、口服微生态制剂，通过药敏试验选用敏感抗菌素等防止继发感染，可以降低哺乳仔猪病毒性腹泻的死亡率。对猪轮状病毒病，在尽早喂给足量初乳后，用母乳喂养，使用口服补液盐可防止脱水，补充养分；对传染性胃肠炎和流行性腹泻，给予口服补液盐[10]。

4.3 寄生虫性腹泻

驱虫是重点，球虫性肠炎可内服氨丙啉或磺胺二甲基嘧啶治疗[11]。

5 结论

根据对哺乳仔猪腹泻原因的传染性因素调查结果可以发现，传染性因素方面主要集中在猪瘟、流行性腹泻、伪狂犬、传染性胃肠炎、仔猪黄白痢等几种疾病，阳性率分别达到25.45%、33.64%、20.91%、8.18%、10.91%，这几种疾病仍然是引起哺乳仔猪腹泻的主要疾病。

但不可忽视的是，一些以前发生较少的寄生虫病在这次检测过程中有所上升，如小袋纤毛虫的检出率达到了8.18%，猪毛滴虫也检出了2 例，而且这些寄生虫很多情况下是继发于病毒性传染病，加重了仔猪腹泻的程度，造成更高的死亡率和更大的损失。

上述调查和检测结果提示，养殖场的技术人员要关注疾病发生和流行的动态，抓好饲养管理，预防老病新发与新流行疾病对养殖场造成的危害。