消化道内镜活检标本石蜡切片制作分析

刘婷婷 杨宁江

我国消化道肿瘤有极高的发病率，早发现、早诊断、早治疗是降低死亡率的关键，随着医学技术的不断发展，消化内镜技术是当前诊断和筛查消化道肿瘤的最主要检查手段，消化道内镜活检组织便成为了病理科最为常见的标本[1-3]。由于这种标本一般体积小、组织碎、数量少，又存在代表性差和因灼烧、挤压导致细胞变形的可能，相对大标本增加了诊断难度，因此，更需要一张制作优良的组织切片。本文收集500 例消化道内镜活检标本石蜡切片，对切片存在的质量缺陷进行回顾性分析，总结归纳制片经验，旨在提高消化道内镜活检标本石蜡切片制作的质量，从而保证病理诊断的准确性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

我院病理科2017 年10 月—2018 年10 月期间接收的消化道内镜活检组织标本为1 495 例，随机选取500 例标本作为研究对象，其中包括胃镜238 例和肠镜262 例，病理诊断结果有黏膜慢性炎、息肉、腺瘤、间质瘤、腺癌以及类癌等。

1.2 方法

病理常规石蜡切片质量优质标准：切面完整；薄厚均匀；无刀痕、裂隙；平坦无褶皱；无污染物；透明度良好；细胞核、质染色对比清晰；裱贴适当；标签牢固编号清晰。根据此评分标准，对选取标本的石蜡切片在显微镜下进行观察，记录切片存在的质量缺陷，并分析其产生的相关原因，总结相应制片经验。

2 结果

在本文选取的500 例石蜡切片中，存在质量缺陷的切片为93例，其中出现问题较多的是组织切片裂隙、切片有褶皱，分别为32 例、27 例；其次是组织切面不完整、细胞核呈灰蓝色、组织切片有污染物，分别为13 例、9 例、7 例；其他综合问题5 例。组织切片裂隙有的呈不规则状、有的出现波纹状、有的为起纵裂纹；在切片褶皱中，横向褶皱居多，组织边缘易于卷曲折叠；组织切面不完整表现为组织缺损、有空洞形成。

3 讨论

笔者认真分析了本文结果中主要质量缺陷出现的原因，有以下几个方面：（1）裂隙原因：消化道内镜活检标本体积一般较小，容易处理过度，质地变硬变脆；冷冻温度太低、冷冻时间太长，蜡块变得过硬；刀片不锋利，切片动作力度过大；摊片水温太高，造成人为裂隙。（2）褶皱原因：由于组织脆小，取材时镊子若夹取太紧，组织易受到机械压迫；制备过程中蜡块温度过高或切片刀变钝[4]；摊片水温过高或过低。（3）不完整原因：切片时用力过快过猛，组织中的小斑块会从蜡块中脱落，留下小空洞，尤其在过度处理的组织中容易发生；蜡块粗修时，没有暴露组织最大面，便急于切片、贴片。（4）细胞核灰蓝原因：组织处理温度过高、过热，在石蜡的停留时间过长；或者固定时间太短，直接进行了高浓度的脱水处理[5]。（5）污染原因：取材台面不干净或取材器械没及时冲洗，将污染物或上例标本碎小组织带入；包埋时，把别的组织残渣混入；切片刀有蜡屑、载玻片有污染、摊片水面不干净，导致污染物粘附在切片上。

鉴于上述原因，提示消化道内镜活检标本石蜡切片质量缺陷的产生主要和固定取材、脱水浸蜡、石蜡包埋、组织切片和HE 染色这几个制片环节密切相关，根据日常工作操作及查阅文献复习，本文对其制作过程进行了相关经验的总结，介绍如下：

3.1 固定取材

组织固定是石蜡切片技术的重要环节，固定不及时或不彻底会影响以后的各个制片过程。组织离体后，内镜医师应及时将标本投入10%中性缓冲福尔马林溶液固定，固定液的量应超过标本体积的10 倍以上，根据标本大小，固定时间6～24 h 为宜，固定温度为正常室温[6]。选择广口、有盖及平底的固定容器，以利于夹取组织并保持其原形。由于消化道内镜活检标本一般体积较小或者带有黏液，取材时要小心夹取，以防标本滑落丢失。微小组织（长径小于0.3 cm）全部取材，并放在擦镜纸上按四折叠法进行折叠[7]，可滴加伊红上色以便于包埋和切片；较大组织（如直径大于0.5 cm 的胃息肉、肠息肉等）可视其厚度剖开切面尽量全部取材，以防影响后面脱水质量。每取完一次标本，镊子要冲洗干净，以免之前标本的混入造成污染。当取材标本量多时，可先将取完的标本投入生理盐水中，既能保持组织的结构，又能防止组织干涸[8-9]。

3.2 脱水浸蜡

有条件的单位尽量选择消化道内镜活检组织这类小标本与大标本分开处理的方式，以免造成小标本过度处理。脱水剂乙醇要保证从低浓度到高浓度的顺序，低浓度乙醇对组织的处理很重要，如果前面先用到高浓度乙醇进行脱水，使组织表面先硬化形成屏障，难以使组织内部充分脱水，从而影响脱水质量[10]。为了节省成本，可以将脱水机前一个缸的乙醇倒掉，依次将后面乙醇梯度前移使用，但第一缸的乙醇应该保证80%的浓度。浸蜡温度不应过高，一般设置为比熔点高2℃，使固体石蜡全部液化即可，浸蜡时间也不宜过长，以免组织过度处理变硬变脆或者影响后期细胞核着色[11]。要定期检查乙醇、透明剂的浓度和石蜡的纯度，注意及时更换。

3.3 石蜡包埋

消化道内镜活检标本一般体积小、块数多，包埋的关键是多块组织能否包在同一个平面上，包埋的方向是否正确，包埋时可以注意以下几个方面：（1）夹取组织的镊尖部位应预热，以防温度过低造成碎小组织粘附在镊子上不利于包埋。（2）包埋模具先注入一部分蜡液后移至冷冻台上，待包埋模具底部形成一层蜡膜后，将组织移至模具再注入剩余蜡液，以利于多块组织聚集在同一个平面。（3）多块小组织包埋时，不要杂乱无章，应呈线状排列为佳。（4）条索状组织，平放包埋；片状组织，竖起来包埋；小块组织，以窄面朝下包埋。（5）当组织块大小相差很大时，按照从大到小的顺序包埋，使所有组织的最大切面在同一个平面上。另外，夹取组织时动作要轻柔，防止其弹出包埋盒，而且每包埋完一个标本，用软布擦拭镊子或者更换一把镊子，以防碎小组织残留造成污染。

3.4 组织切片

切片前应该仔细检查切片机上有关的螺旋是否拧紧，切片刀的切片角度是否合适。组织冷冻台的温度以-5℃为佳，冷冻数分钟，不要冷冻时间过长，否则组织较硬，切片时易破碎[12]。摊片机的水温以40℃～46℃为宜，以免水温过高造成人为裂隙，并及时清理水面，以免残留的碎屑污染下一例切片。切片刀的角度在5°左右为合适，切片时动作轻柔，速度均匀一致，切片厚度为3～4 μm。切片刀应一直保持锋利，可以在旧刀锋位置上粗切蜡块，暴露组织最大切面后，再换到新刀锋位置上正式切片，以减少切片褶皱和刀痕。若切片的褶皱难于展平，可以先放入5%～10%的乙醇内在放入恒温水中。每个蜡块要求选取6～8 个切面。此外，及时清扫切片机刀座上周围的蜡屑，以防切片时造成污染和损伤刀片。

3.5 HE 染色

烤片时，温度60℃～65℃为宜，时间20～30 min；对石蜡切片脱蜡要彻底并且及时更换脱蜡液，以免影响后期染色效果；注意观察苏木精染液的染色情况，若因其过氧化染色力明显下降，应立即更换染液；控制好1%盐酸酒精的分化时间，若处理时间过长，细胞核着色过淡。

由于消化道内镜活检标本体积一般较小、石蜡制片步骤繁多，需要病理技术人员在固定、取材、脱水、包埋、切片以及染色等各个环节中认真对待小标本的特殊性，并在日常工作中发现问题、分析问题、总结相关经验以及不断规范制片过程，才能不断提高消化道内镜活检标本石蜡切片的质量。