取卵术中卵泡冲洗次数与体外受精胚胎移植结局关系的回顾性研究

席 玉 王环震

河南省南阳市第一人民医院生殖医学科 473000

体外受精胚胎移植是目前解决不孕不育的重要治疗方法，其基本方法是通过控制性促排卵，使女性卵巢内多个卵子生长成熟，通过经阴道穿刺抽洗法取出卵子，送入人类辅助生殖实验室内与丈夫精子结合，形成胚胎后再植入女性子宫内。在取卵手术中，部分患者卵子取出困难，需要采用注入卵泡冲液的方法辅助取卵，此过程可促进卵子的取出，但过量的冲洗也可能对卵子造成损伤[1]，目前关于卵泡冲洗的研究报道主要集中于卵泡冲洗是否对卵子质量以及受精情况造成影响[2]，对于整个取卵术中卵泡冲洗次数的多少与助孕结局的关系，未见相关报道。因此，本研究通过回顾性分析在我科行体外受精胚胎移植助孕病例中不同卵泡冲洗次数组MII卵率、受精率及妊娠率的不同，来探索卵泡冲洗次数与助孕结局的关系。

1 资料和方法

1.1 一般资料 回顾性分析2013年1月—2017年12月在我院生殖医学科行常规体外受精胚胎移植助孕的病历资料共637份。纳入标准：(1)女方年龄25～34岁；(2)月经规律；(3)促卵方案为标准长方案；(4)实验室受精方式为常规体外受精。

1.2 分组 根据取卵开始至结束整个操作过程中卵泡冲洗次数的多少分成四组。A组：冲洗0次，即未行卵泡冲洗，共201例；B组：冲洗1～5次，共178例；C组：冲洗6～10次，共155例；D组：冲洗11～15次，共103例。

1.3 促排卵方案[3]所选病例促排卵方案均为标准长方案。从月经第21天(黄体期)开始皮下注射醋酸曲普瑞林(商品名：达必佳，德国辉凌制药)，用量0.05mg/d, 14～18d后，监测血清激素水平和双侧卵巢窦卵泡情况，达到垂体降调节标准后加用促性腺激素(果纳芬，瑞士雪兰诺公司)，当卵泡最大直径达18mm以上，直径14mm以上卵泡中16mm以上卵泡比例超过60%时，停用达必佳和果纳芬，当晚注射人绒毛膜促性腺激素(荷兰欧加农公司)10 000 IU，36h后穿刺取卵。

1.4 取卵及卵泡冲洗 术前30min肌注盐酸哌替啶(东北制药集团公司沈阳第一制药厂)75mg，取截石位，无菌生理盐水冲洗外阴和阴道，铺无菌巾，用卵子培养液冲洗穿刺针，超声监视下取卵针自阴道穹窿进针刺入卵泡中心，负压吸引，直至目标卵泡完全塌陷，抽出的卵泡液快速送入实验室显微镜下寻找卵子，如未查及卵子，从冲洗腔注入2～3ml卵泡冲洗液行卵泡冲洗，冲洗液再次送实验室寻找卵子。记录整个取卵过程中卵泡冲洗次数为该病例的卵泡冲洗次数。

1.5 卵子的实验室处理[4]取卵后2～3h将对应精子标本加入卵子培养皿中，4～5h后用机械法去除卵子周围颗粒细胞，观察卵子成熟情况，出现明显极体为成熟MII卵子，记录MII卵子数；出现第二极体初步判定为受精。第2天再次观察，出现明显原核可确定为受精，记录受精卵子数。胚胎继续在恒温恒湿CO2培养箱中培养2d后，选择优质胚胎备用。

1.6 胚胎移植 选择优质胚胎在彩超监视下植入女方子宫内，常规口服地屈孕酮行黄体支持，14d后检测血HCG水平，超过正常值水平为妊娠。

1.7 数据处理 记录各组获卵数、MII卵子数、受精卵子数和妊娠情况。MII卵率=MII卵子总数/获卵总数，受精率=受精卵子总数/获卵总数，妊娠率=妊娠病例数/总病例数。

1.8 统计学方法 采用SPSS16.0软件进行统计学分析，两样本间率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同卵泡冲洗次数与卵子成熟情况 A组和B组MII卵率差异无统计学意义(P>0.05)，C组和D组MII卵率差异无统计学意义(P>0.05)，A组和B组MII卵率大于C组和D组(P<0.05)，冲洗次数少者卵子成熟度较好，反之则相反。见表1。

表1 各组获卵总数、MII卵子数及MII卵率

2.2 不同卵泡冲洗次数与卵子受精情况 A组和B组受精率差异无统计学意义(P>0.05)，C组和D组受精率均低于A组和B组(P<0.05)，D组受精率最低(P<0.05)，冲洗次数越多者，卵子的受精率越低。见表2。

表2 各组获卵总数、受精卵子数及受精率

2.3 不同卵泡冲洗次数与妊娠情况 A组和B组妊娠率差异无统计学意义(P>0.05)，C组和D组的妊娠率均小于A组和B组(P<0.05)，D组妊娠率最低(P<0.05)。见表3。

表3 各组病例数、妊娠数及妊娠率

3 讨论

体外受精胚胎胚胎移植是解决不孕不育的重要技术[5]，很多不孕患者通过保守治疗不能妊娠的患均需要采用此项技术获得后代。然而，该技术的成功率并非百分之百，国内生殖中心普遍报道的妊娠率在60%以上。影响成功率的因素比较多，包括患者年龄、卵巢功能、子宫内膜情况、精子浓度、精子形态、精子DNA损伤、卵子质量、胚胎质量等。而这些指标的好坏经常预示人工助孕成功率的高低，作为预测人工助孕结局的因素被记录。

卵泡冲洗作为取卵术的重要辅助手段，经常在卵子取出困难时采用，有研究报道适度卵泡冲洗可以提高获卵率[6]，然而也有人研究得出相反的结论，认为卵泡冲洗并不提高获卵率、MII卵率和受精率[7-8]。且同时可能增加卵母细胞形态异常的发生率[1]。周怡雯等研究发现，卵泡冲洗次数增加可以显著提高获卵率，并且所获卵母细胞在受精及胚胎发育方面无显著性差异[9]。我中心在工作中发现，取卵手术过程中卵子取出困难者经常需要反复卵泡冲洗才能将卵泡取出，且这些情况取出的卵子质量经常不好，表现为成熟卵子比率低、受精率低等，因此推测，取卵手术中需要冲洗次越多，卵子的成熟率可能越低，妊结局可能越不好，卵泡冲洗次数可能和妊娠结局有一定的相关性。为了印证这种假设，本课题组进行了以上回顾性研究，结果发现，A组(未行卵泡冲洗)和B组(卵泡冲洗1～5次)MII卵率、卵子受精率和妊娠率均无统计学差异，说明冲洗次数在5次以下者预示有比较好的妊娠结局。C组(冲洗6～10次)和D组(冲洗11～15次组)患者的MII卵率、受精率和妊娠率均较A组和B组低，且D组的受精率和妊娠率最低，说明卵泡冲洗次数>6次以上时，冲洗次数越多，预示妊娠结局越不好。然而对于MII卵子率，C组和D组差异并无统计学意义，这可能是因为本研究对于卵子成熟度的评判仅仅是根据极体出现与否，即只要看到极体，就评判为MII卵子，而部分卵子虽然可以看到极体，但可能发育还不是完全成熟或者质量较差，比如透明带较厚、卵周间隙较大、胞浆内有空泡等，这些都是影响卵子下一步受精情况和妊娠结局的因素，这些指标在本次研究中并没有被统计在内，但并不代表这些指标不重要，包括胚胎质量、妊娠后胎儿发育情况等，这在课题的后续研究中将作为指标进一步分析。