Gli1和VEGF在前列腺增生组织中的表达及相关性

熊永高 彭丽红 解绪红 李林株 刘伟 张栋武

【摘要】 目的：探討Gli1和VEGF在前列腺增生组织中的表达及相关性。方法：选择2013年1月-2017年1月本院术后病理确诊为前列腺增生患者的病理腊块标本为观察组，同期确诊为前列腺癌患者病理蜡块为阳性对照组。比较Gli1和VEGF在前列腺增生和前列腺癌的表达差异，以及Gli1和VEGF在各分度前列腺增生组织的表达差异，分析Gli1和VEGF在各分度前列腺增生组织的相关性。结果：Gli1和VEGF在前列腺增生组织中呈阴性或弱阳性，在前列腺癌中表达呈阳性或强阳性，观察组Gli1和VEGF阳性率均明显低于阳性对照组（P<0.05）;Gli1和VEGF阳性率在前列腺增生组织各分度中呈上升趋势，即Ⅳ度增大>Ⅲ度增大>Ⅱ度增大>Ⅰ度增大，但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;Gli1和VEGF阳性率与前列腺组织Ⅰ～Ⅳ度增大无相关性（P>0.05）。结论：前列腺增生虽属良性病变，Gli1和VEGF表达阴性或弱阳性，且阳性率不高，显著低于前列腺癌，但由于Gli1可能异常激活，以及VEGF的新生血管供养，其有发展成为前列腺癌的风险，需引起重视，及早治疗。

【关键词】 Gli1 VEGF 前列腺增生 前列腺癌

[Abstract] Objective： To investigate the expression and correlation of Gli1 and VEGF in progtatic hyperplasis. Method： Pathological wax specimens of patients with postoperative pathological diagnosis of prostate hyperplasia in our hospital from January 2013 to January 2017 were selected as the observation group.The pathological wax specimens of the patients diagnosed with prostatic cancer at the same time were selected as the positive control group. The expression differences of Gli1 and VEGF in prostatic hyperplasia and prostatic cancer， as well as the expression differences of Gli1 and VEGF in prostatic hyperplasia tissues of different grades were compared， and the correlation between Gli1 and VEGF in prostatic hyperplasia tissues of different grades was analyzed. Result： Gli1 and VEGF were negative or weakly positive in prostatic hyperplasia tissues， and positive or strongly positive in prostatic cancer. The positive rates of Gli1 and VEGF in the prostatic hyperplasia group were significantly lower than those in the positive control group （P<0.05）. The positive rates of Gli1 and VEGF showed an upward trend in prostatic hyperplasia tissues， Ⅳ degree increased >Ⅲ degree increased > Ⅱ degree increased > Ⅰ degree increased， but there was no statistical difference between two groups（P>0.05）. There was no correlation between the positive rate and prostate tissue enlargement （P>0.05）. Conclusion： Although prostatic hyperplasia is a benign lesion， the expression of Gli1 and VEGF are negative or weakly positive， and the positive rate is not high， which is significantly lower than that of Progtatic cancer. However， because Gli1 may be abnormally activated and VEGF can provide new blood vessels， it has the risk of developing into progtatic cancer， which requires attention and early treatment.

[Key words] Gli1 VEGF Progtatic hyperplasis Prostatic cancer

First-authors address： Foshan Gaoming Hospital Affiliated to Guangdong Medical University， Foshan 528500， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.31.036

随着社会老龄化，前列腺增生（benign progtatic hyperplasis，BPH）发病人群逐年增加而备受关注[1]。BPH严重者可导致肾脏损害，甚至危及生命。有报道称，前列腺增生是国人前列腺癌发病的危险因素[2]。因而，对前列腺增生疾病的研究尤为重视。研究发现Hh（Hedgehog）信号通路不仅与细胞增殖分化和各胚层组织发育有关，还与多种肿瘤的发生发展密切相关，其中包括前列腺癌[3-4]。Hh信号通路包括分泌型糖蛋白配体Hedgehog，跨膜蛋白受体复合物（Ptched和Smo），核转录因子（Gli1、Gli2、Gli3）蛋白以及下游靶基因[5-6]。有研究证实Hh信号通路在前列腺癌等多种肿瘤的侵袭及血管重建中发挥重要作用[7]。Gli1是Hh信号通道的关键因子[8]。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），是一种高度特异性的内皮细胞促分裂因子，在前列腺新生血管的生成和维持方面有重要作用[9-10]。研究表明Gli1和VEGF在癌旁正常组织、前列腺增生组织和前列腺癌中均有表达，且具有显著性差异[5，11-13]。目前，对Gli1和VEGF在各分度前列腺增生组织的表达情况及相关性鲜有报道。本研究比较Gli1和VEGF在前列腺增生和前列腺癌的表达差异，以及Gli1和VEGF在各分度前列腺增生组织的表达差异，分析Gli1和VEGF在各分度前列腺增生组织的相关性，探索其可能的临床意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2013年1月-2017年1月本院术后病理确诊为前列腺增生患者病理存档腊块标本67例为观察组，同期确诊为前列腺癌患者病理存档蜡块25例为阳性对照组。纳入标准：术前均未经过治疗，术后病理诊断为前列腺增生或前列腺癌的患者[14-15]。排除标准：年龄<50岁或≥100岁;合并尿路结石;有盆腔手术或损伤病史;合并急性前列腺炎或性传播性疾病;前列腺癌发生转移;肝功能检测ALT、AST超过正常值1.5倍或有肾功能受损;有心脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病，控制不良的糖尿病和/或糖尿病神经病变;精神疾病。本研究已通过本院伦理委员会批准。

1.2 试剂与仪器 Gli1单克隆抗体和VEGF单克隆抗体（均购自美国Santa Cruz公司）。免疫组化试剂盒、浓缩型胰蛋白酶消化液、DAB底物显色剂、多聚赖氨酸（POLY-L-LYSINE）粘片剂均购自广州市天骐生物科技有限公司;光学显微镜（奥林巴斯）;隔水式电热恒温培养箱（润华）;TN-100型托盘扭力天平（無锡建仪）;微量可调移液器（艾本德）;石蜡切片机（国产）。

1.3 方法 所有患者术前均未实施治疗，且切除后经福尔马林固定，石蜡包埋的组织块。制成5 μm厚的石蜡切片，行组织病理学HE染色及Gli1和VEGF免疫组织化学染色。免疫组织化学法严格按照说明书操作。

1.4 免疫组织化学结果评定 每次实验均以前列腺癌为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。染色结果阳性判断方法：在光学显微镜下对每张切片随机选择5个低倍镜（×20）视野，按切片中细胞着色强度情况评分：0分，细胞无显色;1分，为浅黄色;2分，为棕黄色;3分，为棕褐色[16]。按显色细胞比例评分：1分，显色细胞占切片中细胞总数<25%;2分，26%～50%细胞显色;3分，50%以上细胞显色。两者积分的乘积作为染色结果的判定标准，0分为阴性，1～2分为弱阳性，3～4分为阳性，>4分为强阳性。Gli1以胞浆胞核内有棕黄色颗粒为阳性，VEGF以细胞质出现棕黄色至棕褐色颗粒为阳性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验，组内比较采用配对t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验或Fisher精确概率法，采用字2检验（列联系数C）进行相关性检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 观察组67例患者，年龄61～95岁，平均（71.4±10.7）岁;体重54～77 kg，平均（66.3±6.3）kg。其中Ⅰ度增大13例，年龄61～80岁，平均（67.6±9.8）岁;体重60～77 kg，平均（67.5±6.2）kg。Ⅱ度增大21例，年龄63～87岁，平均（69.4±10.1）岁;体重58～72 kg，平均（66.6±5.9）kg。Ⅲ度增大18例，年龄65～90岁，平均（71.4±10.3）岁;体重56～70 kg，平均（65.1±5.8）kg。Ⅳ度增大15例，年龄6795岁，平均（76.3±10.4）岁;体重54～68 kg，平均（64.5±6.1）kg。阳性对照组25例患者，年龄65～96岁，平均（74.4±10.2）岁;体重54～67 kg，平均（64.1±5.8）kg。两组年龄和体重比较，差异均无统计学意义（t=-0.121、0.325，P=1.561、0.988），具有可比性。

2.2 Gli1和VEGF在前列腺增生和前列腺癌中的阳性率比较 Gli1和VEGF在前列腺增生组织中呈阴性或弱阳性，在前列腺癌中表达呈阳性或强阳性。观察组Gli1和VEGF阳性率均明显低于阳性对照组（P<0.05），见表1。

2.3 Gli1和VEGF在各分度前列腺增生组织的阳性率比较 Gli1和VEGF在前列腺增生组织中的阳性率呈上升趋势，即Ⅳ度>Ⅲ度>Ⅱ度>Ⅰ度，但组间比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.4 Gli1和VEGF与各分度前列腺增生组织的相关性分析 Gli1和VEGF阳性率与前列腺组织Ⅰ～Ⅳ度增大均无相关性（列联系数C=0.063，P=0.966;列联系数C=0.114，P=0.828）。

3 讨论

Gli1具有很强的转录激活功能，能灵敏地反映Hh信号通路的活性[5]。Chen等[17]研究了前列腺癌前、前列腺癌及前列腺良性病变中的Hh信号通路相关蛋白的表达，发现前列腺癌中Shh、Ptch1、Gli-1均存在表达。孙皓[5]研究表明Gli1在前列腺癌中呈中至高强度表达，在癌旁正常组织中无表达或弱阳性表达。本研究结果发现，Gli1在前列腺增生组织中呈阴性或弱阳性，在前列腺癌中表达呈阳性或强阳性;前列腺增生组织中Gli1阳性率显著低于前列腺癌，同孙皓[5]和唐亚司[11]研究结果一致，提示Hh信号通路参与了基底细胞增生的形成并向癌症方向发展，推测可能是通过将正常的基底细胞转化为肿瘤干细胞，在肿瘤形成过程中，Gli1的异常激活可能是必需的。张远东等[18]亦证实Gli1基因在前列腺癌细胞PC-3细胞中确有表达。VEGF是血管生长因子大家族的一员，其与受体结合后发挥可增加血管通透性，是目前已知最强的血管通透剂，亦可刺激内皮细胞增殖、迁移和体内血管生成。李伟等[19]研究发现VEGF在前列腺癌组织中的阳性表达率显著高于前列腺增生和前列腺上皮内瘤变组织。本研究结果发现，前列腺增生和前列腺癌均有VEGF表达，且前者表达阴性或弱阳性，后者表达阳性和强阳性，且阳性率显著低于前列腺癌，与前面研究结果一致，提示前列腺增生的发生依赖新生血管的生成，前列腺的增大依靠新生血管提高营养，同前列腺癌等大多数实体肿瘤生长相似，VEGF高表达使肿瘤血管生成增多，使肿瘤细胞得到更多营养而迅速增殖，从而促进癌细胞的浸润和转移[20]。因此，血管生成与前列腺增生和前列腺癌的发生均密切相关。倪新初等[21]研究亦证实前列腺癌的VEGF和微血管密度（MVD）的测定水平显著高于BPH，前列腺癌和BPH的VEGF与MVD的测定水平呈正相关。

唐司亚[11]研究发现Gli1在前列腺增生和低级别PIN（前列腺上皮内瘤变）中的阳性率无显著性差异，前列腺癌>高级别PIN>低级别PIN，且组间两两比较均有统计学差异。本研究结果发现，Gli1在前列腺Ⅰ～Ⅳ度增生组织组间比较差异无统计学意义（P>0.05），与前面的研究结果相似，提示前列腺增生与正常前列腺细胞和低级别PIN细胞形态学区别不大，此时Gli1未被异常激活。高级别的PIN被认为具有演变为前列腺癌的风险，与前列腺癌合并存在。唐亚司[11]研究发现相较于前列腺增生和低级别PIN，高PIN和前列腺癌组的Gli1表达显著增加且无明显差异，意味着高PIN患者很可能已经具备癌变的趋势或者已经癌变。故而，临床上需重视前列腺增生患者，尽早治疗，防止进展至低级别PIN再到高级别PIN。李伟等[19]研究发现在同种病变中（前列腺增生）VEGF阳性率比较无统计学差异。本研究结果亦发现，VEGF在前列腺Ⅳ度增生组织的组间比较，差异无统计学意义（P>0.05），提示前列腺各分度的细胞与正常前列腺细胞相似，属于良性增生。但本研究结果还发现，Gli1和VEGF阳性率在前列腺增生组织中的阳性率呈上升趋势，即Ⅳ度>Ⅲ度>Ⅱ度>Ⅰ度，虽组间比较差异无统计学意义（P>0.05），但均提示在前列腺Ⅰ～Ⅳ度增生演变过程中，Gli1和VEGF表达阳性率逐渐增高，其两者高表达可能对前列腺上皮内瘤变及前列腺癌的演变过程有一定推动作用。因此，前列腺增生虽是良性，Gli1和VEGF表达阳性率不高且弱阳性，但也可能有发展成为前列腺癌的风险，需引起重视，及早治疗。

目前，关于Gli1和VEGF在前列腺增生组织中的相关性鲜有报道。Stecca等[22]研究发现Gli1表达程度与前列腺癌临床分期和病理分级（Gleason分级）之间有显著相关性。唐司亚[11]发现前列腺癌分化程度越低，临床分期越晚，Gli1的表达越强。本研究结果显示，Gli1和VEGF阳性表达率均与前列腺组织Ⅰ～Ⅳ度增大无相关性，再次验证了前列腺Ⅰ～Ⅳ度增大的组织細胞差异不大，其Gli1和VEGF阳性表达率均不存在明显差异。

综上所述，前列腺增生虽属良性病变，Gli1和VEGF表达阴性或弱阳性，且阳性率不高，显著低于前列腺癌，但由于Gli1可能异常激活，以及VEGF的新生血管供养，其有发展成为前列腺癌的风险，需引起重视，及早治疗。

参考文献

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