荔枝草化学成分的研究

温建辉，倪付勇，李 明，谢 雪，王永香，吴 云，王振中，肖 伟∗

（1.江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001；2.中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏连云港 222001）

荔枝草为唇形科鼠尾草属植物荔枝草Salvia plebeiaR.Br.的全草，又名雪见草、蛤蟆草、皱皮草等，主要产自江苏、浙江、安徽、河南、山东等地，资源丰富，首载于《本草纲目》，其味苦辛、性凉，归胃、肺、肾经，具有清热解毒、凉血止血、利尿消肿等功效，临床上主要用于治疗扁桃体炎、支气管炎、崩漏、便血、肾炎水肿、痔疮肿痛、阴道炎等。荔枝草的化学成分主要有萜类、黄酮类、苯丙素类及挥发油类，具有抗菌［1-2］、抗炎［3］、抗氧化［4］、抗肿瘤［5］等药理活性，本实验从中分离得到12 个化合物，其中化合物2、4、6～7、12 为首次从该植物中分离得到。

1 材料

Reveleris 中低压制备色谱仪（美国Grace 公司）；AV-400 型核磁共振光谱仪（瑞士Bruker 公司）；AE240 电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo 公司）；Agilent 1290-6538 液质联用仪（美国Agilent公司）；XT-5 显微熔点测定仪（北京科仪电光仪器厂）；ZF-7 型三用紫外分析仪（上海嘉腾科技有限公司）；YMC-C18（粒径50 μm，日本YMC 公司）；Sephadex LH-20（瑞士Pharmacia 公司）；柱色谱硅胶（200～300 目，青岛海洋化工有限公司）；D-101型大孔吸附树脂（天津海光化工有限公司）。95%乙醇（食用级，连云港长和酒业有限公司）；水（三蒸水，自制）；甲醇（色谱纯，瑞典Oceanpak公司）；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇均为分析纯（南京化学试剂有限公司）。

药材于2015 年3 月购自安徽亳州药材市场，经连云港康济大药房连锁有限公司吴舟执业药师鉴定为荔枝草Salvia plebeiaR.Br.全草，标本（20150301）保存于江苏康缘药业股份有限公司标本室。

2 提取与分离

荔枝草干燥全草15 kg 用水加热回流提取2次，分别为2、1 h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.05～1.10（25 ℃），离心，上清液经D101 大孔树脂，以水、15%、45%、75%、95%乙醇梯度洗脱，分别收集各洗脱液浓缩、冻干，分别得到相应洗脱部位312、408、396、213、106 g。取荔枝草75%乙醇洗脱部位100 g，经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脱，TLC 检识合并得7 个部分（Frs.1～7），Frs.1 经Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱纯化，得化 合 物9（11 mg）、10（3.2 g）、11（468 mg）；Frs.3 经Sephadex LH-20柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱纯化，再经制备液相，以60% 乙腈为洗脱剂，得化合物2（14 mg）、3（16 mg）、6（23 mg）、12（19 mg）；Frs.4 经Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱纯化，再经制备液相，以45%乙腈为洗脱剂，得化合物5（15 mg）；Frs.5 经Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱纯化，再经制备液相，以35%乙腈为洗脱剂，得化合物1（13 mg）、4（18 mg）；Frs.6 经Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱纯化，再经制备液相色谱，以5% 乙腈为洗脱剂，得化合物7（16 mg）、8（13 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末（甲醇），ESI-MSm／z：181.0 ［M+H］+。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.46（1H，d，J=15.8 Hz，H-7），7.02（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），6.90（1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H-6），6.76（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），6.23（1H，d，J=15.9 Hz，H-8）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.8（C-9），147.8（C-4），147.6（C-3），147.5（C-8），124.9（C-1），122.8（C-6），117.8（C-7），116.8（C-5），115.3（C-2）。以上数据与文献［6］一致，故鉴定为反式咖啡酸。

化合物2：无色针状结晶（甲醇），ESI-MSm／z：121.0 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：8.00（2H，m，H-3，5），7.57（1H，tt，J=1.4，8.7 Hz，H-4），7.48（2H，t，J=7.5 Hz，H-2，6）；13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.1（-COOH），132.0（C-1），134.0（C-4），130.7（C-2，6），129.4（C-3，5）。以上数据与文献［7］一致，故鉴定为苯甲酸。

化合物3：无色针状晶体（甲醇），mp 235～237 ℃，ESI-MSm／z：169.0 ［M-H］-1。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.07（2H，s，H-2，6）；13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.4（-COOH），146.4（C-3，5），139.6（C-4），122.2（C-1），110.5（C-2，6）。以上数据与文献［8］一致，故鉴定为没食子酸。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm／z：193.0［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.58（1H，d，J=15.9 Hz，H-7），7.16（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），7.08（1H，dd，J=1.9，8.2 Hz，H-6），6.80（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.30（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），3.88（3H，s，3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：171.1（-COOH），146.8（C-7），150.5（C-4），149.4（C-3），127.8（C-1），124.0（C-8），116.5（C-6），116.1（C-5），111.7（C-2），56.4（3-OCH3）。以上数据与文献［8］一致，故鉴定为阿魏酸。

化合物5：白色粉末；ESI-MSm／z：455.4［M-H］-1。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ：0.88（3H，s，H-26），0.94（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.99（3H，d，J=6.5 Hz，H-30），1.02（3H，s，H-23），1.05（3H，s，H-24），1.22（3H，s，H-25），1.24（3H，s，H-27），3.45（1H，dd，J=10.0，6.0 Hz，H-3），5.49（1H，t，J=2.5 Hz，H-12）；13CNMR（100 MHz，C5d5N）δ：39.1（C-1），28.2（C-2），78.2（C-3），39.4（C-4），55.9（C-5），18.8（C-6），33.6（C-7），40.0（C-8），48.1（C-9），37.3（C-10），23.7（C-11），125.7（C-12），139.3（C-13），42.5（C-14），28.7（C-15），24.9（C-16），48.1（C-17），53.6（C-18），39.4（C-19），39.5（C-20），31.1（C-21），37.5（C-22），28.9（C-23），16.6（C-24），15.7（C-25），17.5（C-26），24.0（C-27），180.0（C-28），17.6（C-29），21.5（C-30）。以上数据与文献［9］一致，故鉴定为乌苏酸。

化合物6：浅黄色粉末，ESI-MSm／z：179.2［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD），δ：6.18（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），6.76（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.92（1H，dd，J=2.1，8.4 Hz，H-6），7.01（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），7.52（1H，d，J=16.0 Hz，H-7）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：127.9（C-1），115.6（C-2），146.8（C-3），149.3（C-4），116.6（C-5），122.8（C-6），147.0（C-7），115.0（C-8），171.2（C-9）。以 上 数 据 与 文 献［10］报道一致，故鉴定为咖啡酸。

化合物7：白色粉末，ESI-MSm／z：125.1［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.58（1H，brs，-NH），11.00（1H，brs，-NH），7.25（1H，J=5.0 Hz，H-6），1.72（3H，s，H-7）；13CNMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：165.4（C-4），152.0（C-2），138.2（C-6），108.1（C-5），12.3（C-7）。以上数据与文献［11］一致，故鉴定为胸腺嘧啶。

化合物8：白色粉末，mp 240～243 ℃，ESIMSm／z：282.2 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.67（1H，s，NH-1），7.93（1H，s，H-8），6.48（2H，s，-NH2），5.69（1H，d，J=5.9 Hz，H-1′），4.39（1H，t，J=5.3 Hz，H-2′），4.08（1H，brs，H-3′），3.87（1H，d，J=3.4 Hz，H-4′），3.61（1H，dd，J=11.8，3.4 Hz，H-5′a），3.52（1H，dd，J=11.8，3.4 Hz，H-5′b）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：157.3（C-6），154.2（C-2），151.8（C-4），136.0（C-8），117.1（C-5），86.8（C-1′），85.6（C-4′），74.2（C-3′），70.8（C-2′），61.9（C-5′）。以上数据与文献［12］一致，故鉴定为鸟嘌呤核苷。

化合物9：黄色粉末。ESI-MSm／z：269.2［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：6.78（1H，s，H-3），12.96（1H，s，5-OH），6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.47（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.91（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：164.4（C-2），103.0（C-3），182.0（C-4），161.6（C-5），99.0（C-6），163.9（C-7），94.7（C-8），157.5（C-9），103.9（C-10），121.4（C-1′），128.7（C-2′，6′），116.2（C-3′，5′），161.4（C-4′）。以上数据与文献［13］一致，故鉴定为芹菜素。

化合物10：黄色簇状结晶（甲醇），mp 238～240 ℃，ESI-MSm／z：425.4 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：3.75（3H，s，-OCH3），7.01（1H，s，H-8），6.86（1H，s，H-3），6.93（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，H-5′），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，H-6′），12.95（1H，s，OH-5），10.42（1H，s，OH-4′），5.11（1H，d，J=5.2 Hz，H-1″），3.29～3.75（6H，m，H-2″～6″）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：60.3（-OCH3），164.3（C-2），102.7（C-3），182.2（C-4），152.1（C-5），132.5（C-6），156.5（C-7），94.3（C-8），152.4（C-9），105.7（C-10），121.1（C-1′），128.6（C-2′，6′），116.0（C-3′，5′），161.4C-4′），100.2（C-1″），73.2（C-2″），77.3（C-3″），69.5（C-4″），76.7（C-5″），60.6（C-6″）。以上数据与文献［14］一致，故鉴定为高车前苷。

化合物11：黄色粉末，ESI-MSm／z：315.3［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：13.05（1H，s，5-OH），7.40（1H，dd，J=2.0，8.1 Hz，H-6′），7.35（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.85（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.63（1H，s，H-8），6.52（1H，s，H-3），3.70（3H，s，6-OCH3）；13CNMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：163.9（C-2），102.4（C-3），182.0（C-4），152.2（C-5），131.2（C-6），157.2（C-7），94.0（C-8），152.8（C-9），104.0（C-10），121.5（C-1′），113.2（C-2′），149.6（C-3′），145.7（C-4′），116.0（C-5′），118.9（C-6′），59.9（-OCH3）。以上数据与文献［15］一致，故鉴定为泽兰黄酮。

化合物12：无色针晶（氯仿），mp 170～172 ℃，ESI-MSm／z：151.2 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：9.84（1H，m，1-CHO），7.44（1H，m，H-2，6），7.06（1H，m，H-5），6.39（1H，dd，J=16.0，11.0 Hz，4-OH），3.97（2H，m，3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：190.9（1-CHO），151.7（C-4），147.2（C-3），129.9（C-1），127.5（C-6），114.4（C-5），108.8（C-2），56.1（3-OCH3）。以上数据与文献［16］一致，故鉴定为香草醛。

4 讨论

荔枝草作为民间常用药材主要用于治疗咽炎、扁桃体炎、气管炎等疾病且效果显著；据《四川中药志》记载，荔枝草具有清肺热、除风湿、治咳嗽、痢疾、牙痛、痒疹及疮毒等功效。近年来随着对荔枝草的深入研究，发现其具有广泛的药理活性，极具临床应用价值，师梅梅等［17］通过荔枝草提取物对大鼠肝线粒体损伤保护作用研究表明，其可有效抑制线粒体的脂质过氧化反应和线粒体膨胀，降低蛋白质羰基量，恢复ATP 酶的活性，清除线粒体中产生的，且呈量效关系；杨泽华等［1］研究表明，荔枝草乙酸乙酯、正丁醇萃取部位在体外对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌具有良好的抑制作用；郭秋言等［18］发现，荔枝草醇提物质量浓度为675 μg／mL时能明显抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）所致的CPE 产生，具有良好的药理活性；孔庆新等［19］利用氨水刺激建立慢性咽炎大鼠模型后用不同浓度的荔枝草乙酸乙酯提取物灌胃治疗一段时间后，通过行为观察、咽部病理学观察及酶联免疫吸附法（ELISA）检测，发现其可显著改善咽部的病理形态学表现。

荔枝草资源丰富，分布广泛，除甘肃、新疆、青海、西藏外在全国各省均有分布［20］，许多中医名著如《江西民间草药验方》《集效方》等有荔枝草治疗咽喉痛、痔疮、犬伤及破伤风的记载，现代临床上用于治疗带状疱疹［21-22］、小儿急性肾炎［23］、支气管炎［24］等，其作为保健茶开发也有报道［25-26］。然而，作为一种传统药材，2015 年版《中国药典》并未将荔枝草收录其中，其质量标准、药物代谢动力学、药效学及安全性评价均有待于完善，因此，课题组通过对荔枝草化学成分的研究，制备含有量高于98%的单体化合物，为下一步药理药效的开展及指纹图谱的建立提供物质基础。