黑木耳液体菌种配方优化试验

王庆武 李秀梅 兰玉菲 安秀荣

（泰安市农业科学研究院，山东泰安271000）

黑木耳（Auricularia auricular）是我国传统食用菌[1]，目前栽培所用菌种大部分为固体菌种，液体菌种尚未广泛使用[2]。固体菌种生产周期长，菌龄不整齐[3]，接种用工多，成本高。与固体菌种相比，液体菌种菌丝生长快，生产周期短[4-5]，菌龄一致，接种快，成本低，解决了固体菌种扩大生产中难以同步性发育的问题[6]。因此，黑木耳液体菌种代替传统固体菌种愈来愈受到人们的关注。为培养出优质黑木耳液体菌种，笔者研究以同一培养时间菌丝体生物量为衡量指标，对黑木耳液体菌种培养所需的碳源、氮源、无机盐及维生素进行优化研究，以筛选出最佳配比，为黑木耳液体菌种的培养提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试黑木耳菌株：泰安市农科院保藏菌株TH02。

斜面培养基：马铃薯20%（去皮煮汁），麸皮4%（煮汁），葡萄糖2%，KH2PO40.2%，MgSO40.1%，琼脂2%，加水1 L。

碳源优化液体基础培养基：蛋白胨0.2%，KH2PO40.2%，MgSO40.1%，花生油0.05%。

氮源优化液体基础培养基：葡萄糖2%，KH2PO40.2%，MgSO40.1%，花生油0.05%。

1.2 试验方法

1.2.1 母种制备

无菌条件下挑取冰箱内保藏的边长4 mm的菌种块接种于新鲜斜面培养基上，25～28℃培养至菌丝长满斜面，待用。

1.2.2 碳源试验

在碳源基础液体培养基中，分别加入2%的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、淀粉、玉米粉7种碳源，组成供试培养基。250 mL三角烧瓶中分别装入150 mL供试培养基，121℃、0.11 MPa高压蒸汽灭菌30 min，压力降至0 MPa时开锅取瓶，冷却至室温。无菌条件下分别接入6块菌龄一致的边长2 mm经活化的母种块，于25～28℃、160 r∕min恒温摇床培养10 d，每处理3次重复。

1.2.3 氮源试验

在氮源基础液体培养基中，分别加入0.2%的蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、（NH4）2SO4、NH4NO3、麸皮6种氮源，组成供试培养基。试验方法同1.2.2。

1.2.4 碳、氮源配比试验

选定最佳碳氮源后，采用L9（34）法进行正交试验。试验方法同1.2.2。

1.2.5 无机盐试验

以最佳碳氮源组合为基础培养基，分别加入无机盐KH2PO4、MgSO4、CaSO4，采用L9（34）法进行正交试验。试验方法同1.2.2。

1.2.6 维生素试验

以上述试验结果为基础培养基，分别添加0.001%、0.005%、0.01%、0.015%、0.02%浓度的维生素B1组成供试培养基，上述基础培养基作为对照。试验方法同1.2.2。

1.2.7 菌丝生物量测定

各处理培养液移入离心管，离心机10 000 r∕min离心5 min，60℃条件下菌丝烘至恒重，计算各处理菌丝体干重。

2 结果与分析

2.1 碳源对黑木耳菌丝体生物量的影响

由表1可以看出，以玉米粉为碳源的培养基中，菌丝体生物量最高，平均达到255.33 mg∕100 mL，其次是淀粉，平均达到184.33 mg∕100 mL，乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖培养效果较差，但均优于无碳源培养基。

表1 碳源对黑木耳菌丝体生物量的影响

2.2 氮源对黑木耳菌丝体生物量的影响

由表2可以看出，在酵母膏为氮源的培养基中，黑木耳菌丝体生物量最高，平均达到202 mg∕100 mL，其次是麸皮，平均达到180 mg∕100 mL，牛肉膏、蛋白胨、（NH4）2SO4、NH4NO3培养效果较差，但均优于无氮源培养基。

表2 氮源对黑木耳菌丝体生物量的影响

2.3 碳、氮源配比对菌丝体生物量的影响

由表4可以看出，4个单因子对菌丝体生物量的影响顺序为A＞B＞C＞D，玉米粉影响最大，其次是淀粉、酵母膏，麸皮影响最小。极差分析结果表明，最佳碳氮源配比为A3B3C1D1。

表3 正交试验因素水平 %%

表4 L9（34）正交试验结果

2.4 无机盐对菌丝体生物量的影响

由表6可以看出，3个无机盐单因子对菌丝体生物量的影响顺序为A＞C＞B，KH2PO4对菌丝体生物量影响最大，其次是CaSO4，MgSO4对菌丝体生物量影响最小。极差分析结果表明，最佳无机盐配比为A3B3C2。

表5 正交试验因素水平表 %%

表6 L9（34）正交试验结果

2.5 维生素对菌丝体生物量的影响

由图1可以看出，维生素B1对菌丝体生物量有影响，在添加维生素培养基上菌丝体生物量均高于无维生素培养基，维生素添加量在0.015%时菌丝体生物量达到最大，为1360 mg∕100 mL，此后随添加量的增加菌丝体生物量反而降低。

图1 维生素添加量对菌丝生物量的影响

3 小 结

试验表明，碳源对黑木耳菌丝生长影响较大，但不同碳源之间差异较明显，适宜的碳源为玉米粉和淀粉。不同氮源对菌丝生长有一定的促进作用[6]，有机氮对菌丝生长影响较大，而无机氮对菌丝生长影响较小，表明有机氮优于无机氮，试验适宜的氮源为酵母膏和麸皮。菌丝生长需要适宜的碳氮源配比[7]，适宜的碳氮比利于菌丝生长，通过复合碳氮源正交试验，适宜的碳氮配比为玉米粉3%、淀粉4%，酵母膏0.1%，麸皮0.2%。菌丝生长对无机盐需要量很少，但它们是微生物活动中不可缺少的物质[8]，一般在低浓度时对菌丝生长有促进作用，三种无机盐相比，KH2PO4用量最大，CaSO4用量最少，适宜的配比为KH2PO40.3%、MgSO40.15%、CaSO40.05%。一定量的维生素对菌丝生长有明显促进作用，但需求量不是越多越好，试验得出适宜的维生素B1添加量为0.015%，效果较好。