微波法提取丹参中脂溶性成分丹参酮ⅡA的工艺研究

林大专 张义英 惠 春 孙全乐

（长春医学高等专科学校，吉林 长春 130031）

丹参为唇形科植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根茎，具有活血祛瘀、通经止痛、凉血消痈、清心除烦等功效[1]。丹参的主要成分可分为脂溶性成分和水溶性成分两大类，其中脂溶性成分主要为丹参酮类[2]，丹参酮是丹参中的主要活性成分，包括丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、二氢丹参酮Ⅰ等，具有较明显的心脑血管保护活性、体内外抗肿瘤活性等[3]，本文利用单因素试验和正交试验，对微波法提取丹参酮ⅡA的工艺进行系统研究，为丹参中脂溶性成分的开发利用提供参考帮助。

1 仪器与材料

Agilent 1200高效液相色谱仪（Agilent 1200可变波长检测器（VWD），Agilent 1200数据站，P/N-7725i手动进样器，G1354A四元梯度泵及G1316A柱温箱（美国Agilent公司产品）； XH-200A型祥鹄电脑微波萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司）；丹参饮片（购于安国市昌达中药材饮片有限公司，经生药教研室王月珍鉴定为真品），丹参酮ⅡA标准品（Chengdu PUSH Bio-Technology Co.Ltd.，批号Q0070291，规格：50 mg，含量≥99%）；甲醇（美国Fisher公司，批号：A452-4，色谱纯）；无水乙醇（北京化工厂，批号2015130，分析纯）。

2 方 法

2.1 丹参样品液的制备：称取丹参饮片10 g于250 mL锥形瓶中，根据单因素和正交试验设计在不同温度、提前功率、料液比下用不同浓度乙醇用微波萃取仪提取丹参中脂溶性成分，提取液合并后浓缩，定容至100 mL量瓶中，摇匀，待用。

2.2 丹参酮ⅡA的含量测定

2.2.1 色谱条件：Agilent TC-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（80∶20）；流速1.0 mL/min；柱温30 ℃；检测波长270 nm；进样量20 μL。

2.2.2 标准品溶液的配制：精密取丹参酮ⅡA标准品0.0052 g，加甲醇溶解，定容至50 mL，制成104 μg/mL的标准品储备液。

2.2.3 线性试验：分别精密吸取上述标准品储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密量取上述溶液20 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积。以峰面积对标准品浓度作图，绘制标准曲线。回归方程为y=164.4x+33.76，r=0.9993，即浓度在5.2～31.2 μg/mL的范围内线性良好。

2.3 单因素实验：每个单因素实验重复3次，以丹参酮ⅡA含量作为指标，分别考察提取功率、提取时间、提取溶剂、料液比等因素对丹参中丹参酮ⅡA提取率的影响。

2.4 正交试验：在单因素考察的基础上，以溶剂浓度、提取时间、提取功率和料液比为因素，优化丹参酮ⅡA的提取工艺，因素-水平设计见表1。

表1 因素水平表

3 结 果

3.1 单因素试验结果

3.1.1 提取功率的影响：当功率在300～600 W时，丹参酮ⅡA含量随功率的增加而增加，此后功率增加，丹参酮ⅡA结构遭到破坏，含量下降，因此最佳的提取功率是600 W。

3.1.2 提取时间的影响：时间在1.5～5.5 min 区间内丹参酮ⅡA含量呈上升趋势，且在5.5 min时达到最大，此后提取时间延长，丹参酮ⅡA受热分解，含量开始下降，因此最佳的提取时间为5.5 min。

3.1.3 提取溶剂的影响：乙醇浓度为70%时，丹参酮ⅡA的提取率最高。

3.1.4 料液比的影响：采用6倍量的乙醇提取时，丹参酮ⅡA的提取率最高。

表2 正交试验结果

3.2 正交试验结果：以丹参酮ⅡA得率为考核指标，用L9（34）正交表设计使用，分别考察了提取溶剂、提取时间、提取功率和料液比等因素对提取效果的影响，结果见表2、表3。

表3 正交试验方差分析表

4 小结与讨论

4.1 由表2可知，RA＞RD＞RC＞RB，影响因素次序为A、D、C、B，即乙醇浓度、料液比、功率、时间。

4.2 表2中，由K3A＞K2A＞ K1A知，因素A的水平3比其他2个水平好，同样由最佳工艺条件是A3B3C2D2，即提取溶剂为95%、提取时间6.5 min、料液比1∶6、功率为600 W。

4.3 从表3正交实验方差分析可知，提取溶剂、提取时间、功率、料液比对丹参中丹参酮ⅡA提取率影响都显著，其中提取溶剂的影响最显著。

4.4 微波辅助提取所需的时间少、能耗低，能够有效保留活性成分，是一种提取丹参酮ⅡA较好的方法。由实验结果可知，该工艺合理、简单、可行，可作为提取丹参中脂溶性成分的优选工艺。