蒙医灸疗对失眠模型大鼠行为学及脑组织5-HT 的影响

乎宝力格，苏日古嘎，高玉峰

（内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028007）

引起失眠的原因有很多，主要是大脑正常的兴奋和抑制过程失调。如环境因素、个体因素、躯体因素、精神因素、情绪因素、药物因素等都可以通过影响大脑正常的兴奋和抑制过程从而导致失眠[1-5]。蒙医灸疗法作为蒙医传统疗法之一，在治疗失眠症方面有它独特的优势及发展前景。蒙医学认为引起疾病最根本的原因是三根（赫依、希拉、巴达干）失去平衡。正常情况下，三根互相制约，互相依存保持机体的平衡，任何一方出现偏盛或偏衰必会导致反常变化，引起疾病的发生。蒙医理论认为失眠症的病因有外因和内因，外因系劳逸失调、思虑太过、惊吓、失血等，内因系赫依琪素紊乱累及心脏白脉受累，机体在4个发病条件的作用下，赫依希日紊乱累及心脏、肾脏或赫依琪素紊乱累及白脉从而引起失眠，因此大多属赫依病范畴。而蒙医灸疗法则是镇赫依之邪，抑制赫依病扩散之良方。前期研究已表明[6-9]，施灸赫依三穴可改善睡眠紊乱模型大鼠睡眠，可降低中枢神经系统内重要的神经递质NO与NOS的活性。

研究表示，5-HT的减少是引起失眠的又一主要原因之一，表明5-HT是睡眠发生和维持所必须的，有重要调节睡眠的作用[10-11]。笔者在前期研究基础上观察施灸赫依三穴对失眠大鼠行为学变化及脑干内5-HT的影响，进一步探讨其治疗失眠的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 实验动物选择健康雄性SD大鼠60只，体质量（200±10）g，全部大鼠均由沈阳实验动物中心提供，合格证号：（SXSK（辽）2015-0001）。

1.2 试剂及仪器 ZB-200疲劳转棒仪购自北京智鼠多宝生物科技有限责任公司，AUW120D型岛津电子天平（日本岛津），对氯苯丙氨酸（PCPA）购自北京环亚太克生物医学技术有限公司，5-HT对照品购自美国Sigma公司，艾灸贴购自苏州东方艾绒厂。

1.3 造模方法 本实验采用对氯苯丙氨酸造模法[12]。将PCPA用生理盐水配置成混悬液（45 mg/100 g），腹腔注射PCPA混悬液（1 mg/100 g），1次/d，连续注射2 d。大鼠出现活动明显频繁、对外界的声、光等刺激异常敏感，兴奋性增高，昼伏夜出节律消失等，表明造模成功。

1.4 分组及处理方法 将60只SD雄性大鼠随机分为6组，即正常组、模型组、安定组、顶会穴组、赫依穴组、黑白际穴组，每组10只。正常组：大鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液（1 mL/100 g），1次/d，连续注射2 d；与治疗组相同的抓取、固定，不做任何治疗，连续7 d。 模型组：造模成功后同灸疗组一样抓取，固定。安定组：造模成功后，将安定（地西泮）注射液，0.92 mg/kg，1次/d，连续灌胃7 d。顶会穴组：造模成功后施灸大鼠“顶会穴”，每日施灸1次，连续7 d。赫依穴组：造模成功后施灸大鼠“赫依穴”，每日施灸1次，连续7 d。黑白际穴组：造模成功后施灸大鼠“黑白际穴”，每日施灸1次，连续7 d。

1.5 观察指标及检测方法

1.5.1 转棒平衡实验[13]实验装置为单头固定的水平直棒。先将疲劳转棒仪调整到训练状态，让各组大鼠适应，再将疲劳转棒仪调到20 r/min，当直棒转动时，将大鼠放在转棒上，记录大鼠在转棒上持续不落降的时间，每只大鼠重复测定3次，取平均值。

1.5.2 大鼠脑干中5-HT含量测定 将大鼠快速断头处死，冰上迅速取大脑干称重，- 80 ℃冰箱保存待测。

2 结果

2.1 各组大鼠转棒平衡实验测定结果 见表1。与正常组相比，模型组大鼠在转棒上维持时间缩短（P＜0.05）。与模型组比较，安定组、赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组大鼠在转棒上维持时间延长（P＜0.05）。

2.2 蒙医灸疗对PCPA致失眠模型大鼠脑干组织5-HT的影响 见表1。与正常组相比，模型组脑干5-HT含量降低（P＜0.05）。与模型组比较，安定组、赫依穴组和顶会穴组脑干内5-HT的含量升高（P＜0.05）。

表1 蒙医灸疗法对SD大鼠转棒平衡及脑组织中5-HT的影响（ ，n = 10）

表1 蒙医灸疗法对SD大鼠转棒平衡及脑组织中5-HT的影响（ ，n = 10）

注：与正常组比较，# P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05

组 别 棒上停留（维持）时间/s 5-HT/（g/ng）正常组 212.98±62.90 45.63±6.38模型组 56.17±47.39# 20.14±7.92#安定组 112.13±46.84△ 38.26±8.71△赫依穴组 110.85±66.24△ 30.39±10.17△顶会穴组 111.39±74.41△ 28.6±7.89△黑白际穴组 112.2±57.80△ 23.94±5.45

3 讨论

蒙医理论认为人体体素相搏导致无法正常入睡称失眠，属于赫依病范畴。蒙医灸疗法具有通络、行气、活血，抑制赫依病之功效。蒙医学中赫依三穴指的是顶会穴、赫依穴、黑白际穴。赫依穴：位于第七颈椎棘突与第一胸椎棘突间隙窝中；顶会穴：两耳角直上连线中点，头顶正中心；黑白际穴：位于两乳正中对直的心窝处[14]。《甘露四部》中记载[15]：“赫依偏盛引起的疾病以顶会穴、赫依穴、黑白际穴灸之。”

5-HT作为神经递质，集中分布于脑干的中缝核内，其神经功能十分复杂，涉及睡眠、痛觉、体温、垂体内分泌等多种生理功能活动的调节[16]。PCPA是5-HT合成抑制剂，造成睡眠昼夜节律消失，达到完全失眠[17]。脑内5-HT浓度的升高，会使机体产生疲劳和睡意[18-19]。本试验提示蒙医灸疗赫依穴和顶会穴可通过增加脑干组织5-HT的含量，从而达到促进睡眠作用。与模型组相比，黑白际穴组脑干5-HT含量无显著性差异（P＞0.05），其原因可能与样本量小或不同穴位所分布的5-HT含量与受体有关。