肺癌组织中细胞角蛋白7和细胞角蛋白20的表达及其与预后的关系

，，，

(1.南方医科大学附属南海医院、佛山市南海区人民医院肿瘤科二区， 广东 佛山 528200；2.南方医科大学附属南海医院、佛山市南海区人民医院呼吸内科，广东 佛山 528200)

肺癌是一种临床常见的恶性肿瘤，发病率呈逐年上升趋势，已成为恶性肿瘤死亡的主要原因之一。肺癌组织存在细胞角蛋白(cytokeratin，CK)不同程度的表达，CK主要分布于上皮细胞，是角质细胞中的主要骨架蛋白，这种结构蛋白的主要功能是维持上皮组织的完整性及连续性。目前，有超过20种亚型已经确认分布在不同器官的上皮细胞上。其中，CK7产生于器官的腺癌成分，包括肺部组织，主要表达部位是细胞的细胞质[1-2]。CK20是一种Ⅰ型低相对分子质量CK，具有严格的上皮组织特异性，只有在上皮组织和上皮来源的肿瘤组织中表达[3]。多数研究[2，4]表明CK7、CK20已用于原发性肺腺癌的鉴别诊断和转移癌原发部位起源的检测，以及起源于上皮组织恶性肿瘤的研究。我们分析探讨CK7和CK20的表达与肺癌预后临床指标的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2013年1月至2014年1月在南方医科大学附属南海医院住院的肺癌患者80例，其中男55例，女25例；年龄25～85(46.15±5.6)岁。入选标准：1)年龄18～70 岁；2)PS评分0～1分；3)经组织病理和免疫组化明确诊断；4)至少有1个可测量的病灶；5)无主要器官的功能障碍，血常规、肝功能、肾功能及心脏功能基本正常。白细胞计数≥4.0×109·L-1、中性粒细胞计数≥1.5×109·L-1、血小板计数≥80×109·L-1、血红蛋白≥90 g·L-1，血清胆红素≤1.5倍正常值的上限、谷丙转氨酶和谷草转氨酶≤2.5倍正常值的上限、血肌酐≤133μmol·L-1；6)预计生存时间超过3个月；7)能理解本治疗情况并已签署知情同意书者；8)进行血清及尿妊娠实验检查，排除怀孕可能。所有患者行规范的手术、化疗、放疗、靶向等综合性治疗。

1.2吸烟情况按吸烟指数0、<400和≥400年支分为3个级别[5]。

1.3随访所有患者组织病理学诊断明确为观察起点，按照2013年美国NCCN指南进行规范性治疗，采用微信群、QQ群等新时代自媒体方式进行追踪观察，观察期暂为2 a。

1.4检测方法所有组织标本在手术过程或进行肺部肿物穿刺活检中获得，固定于质量分数10%中性多聚甲醛溶液中，并进行常规脱水、石蜡包埋、备用于免疫组化。免疫组化染色：所有组织标本均做HE染色及免疫组化染色。严格采用免疫组化EliVision两步法对组织标本进行染色。标本24 h固定于质量分数10%中性多聚甲醛溶液中，然后嵌入在常规石蜡用于归档。标本常规石蜡包埋，连续切取4～5 片厚度为5 μm 的切片，与磷酸盐缓冲液作为阴性对照。免疫组化染色方法按照试剂盒说明书操作，在染色过程中，用已知CK7、CK20阳性组织芯片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.5判定标准用病理图像分析仪进行检测。由经验丰富且不知情的同一病理科医生在光学显微镜下进行观察判定。阳性表达标准是CK7和CK20均位于细胞质内，并发现细胞质或细胞核呈棕黄色或黄色。随机选择10个用400倍率显微镜下观察切片。每个视野观察50～100个细胞，计算所有观察细胞中阳性细胞百分数，评分系统参考阳性细胞百分率：<1%为0分，1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。0分定义为阴性(-)，1～2分为阳性(+)，>2分为强阳性(++)，后两者均计为阳性。评分后在双盲模式下对结果进行计算。

1.6统计学处理采用SPSS18.0进行数据分析，计数资料比较用χ2检验，生存分析用Kaplan-Meier 法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1肺癌组织中CK7和CK20的表达与患者临床病理特征的关系肺癌组织中CK7和CK20表达阳性率分别为70.00%、18.75%。肺癌组织中CK7表达阳性率与患者病理类型和远处转移与否有关(P均<0.05)。见表1。

表1 肺癌组织中CK7和CK20的表达与患者临床病理特征的关系

2.2CK7和CK20的表达与肺癌患者预后情况的关系CK7阳性肺癌患者2 a生存率与远处转移、TNM分期有关(P均<0.05)。CK20阳性肺癌患者2 a生存率与分化程度、远处转移、TNM分期有关(P均<0.05)。见表2。

表2 肺癌患者2 a生存率影响因素的单因素Kaplan-Meier分析结果

3 讨论

CK具有极高的保守性和组织分化特异性，与上皮细胞的类型、增殖、分化密切相关，因而被用作肿瘤标志[6]。我们的免疫组化检查结果显示，CK20和CK7均位于细胞质，肺癌组织中CK7和CK20的表达具有一定的阳性率，CK7和CK20高表达于异常增生的上皮组织，这些异常增生的上皮组织细胞其功能有所增强，提示CK7和CK20阳性表达可能与肺癌的发生、发展等密切相关。我们还观察到在肺癌组织中CK7表达阳性率高于CK20，且主要表达于腺癌，两者在Ⅲ～Ⅳ期的表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期，与文献[7]统计基本相同。本研究结果也显示，肺癌组织中CK7表达阳性率与患者病理类型和远处转移与否有关(P均<0.05)；CK7阳性肺癌患者2 a生存率与远处转移、TNM分期有关(P均<0.05)。CK20阳性肺癌患者2 a生存率与分化程度、远处转移、TNM分期有关(P均<0.05)。这些结果证实，CK7和CK20不但可以作为辅助诊断的标志物，同时还可以成为了解病情预后情况、复查评估的标志物。我们的跟踪研究表明，CK7和CK20表达阳性患者其生存时间明显短于表达阴性的患者。

经过研究发现，CK20的表达也可以预测肿瘤早期转移和亚临床转移情况，在肺癌中的过度表达作为微转移的指标具有较高的敏感性[8-9]。我们探讨CK20的表达在恶性肿瘤相关的临床病理特征与预测临床预后价值。CK20阳性表达可作为转移性肺癌的一个重要标志，是肺癌预后不良的预测因素之一。Tsouma等[10]研究报道CK20在外周血的检出率高达78.4%，目前在国内外对CK7和CK20的研究只见有对食管、胃、结直肠癌的研究报道，和只是针对黏液性肺癌单一病种的分析，以及单纯CK7在肺癌、肺转移癌中的临床意义的研究[2]。国内尚未发现全面评价CK7和CK20两者在肺癌组织中的表达关系及治疗反应情况的报道。

总之，肺癌组织中CK7的表达阳性率高于CK20，且主要表达于腺癌，CK7和CK20两者表达与患者的生存预后关系密切，表达阳性者预后较表达阴性者预后差。而且本研究有助于本地区临床工作者更加全面了解治疗情况，为患者制定更加优化的个体化治疗方案。