七叶通脉胶囊对大鼠脑缺血再灌注模型的影响

郑晓娇，丁 涛，刘 博，王 鑫，温富春，宋俐霏，徐惠波*

（1.吉林省中医药科学院，长春 130012；2.吉林大学，长春 130012）

七叶通脉胶囊是用于治疗缺血性脑中风瘀血阻络证的原中药五类新药，已获得临床研究批号。研究表明，七叶通脉胶囊能显著地预防大鼠局灶性中动脉脑缺血的发生，减小缺血面积，降低缺血程度；降低不完全性脑缺血大鼠脑指数、脑水肿程度及脑血管通透性，保护脑组织；同时对血瘀大鼠具有明显的活血化瘀作用，改善血液粘度，延长出凝血时间等。为了更好的指导临床用药，本文考察七叶通脉胶囊对大鼠脑缺血再灌注模型体外血栓、血小板聚集、血液流变性的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及饲养环境 SD大鼠，体质量约300～320 g，雄性；动物来源：北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号SCXK（京）2012-0001；饲养环境：屏障系统，室温（22±2）℃，湿度（55±5）%。

1.1.2 试验药物 七叶通脉胶囊，批号：20150625，吉林省中医药科学院提供。血塞通片，批号：150328，由云南维和药业股份有限公司提供。

1.1.3 试剂 水合氯醛（批号：13622），天津市光复精细化工研究所提供；枸橼酸钠（批号：20121116），北京化工厂提供；二磷酸腺苷（ADP）（批号：091M70002V），大连美仑生物技术有限公司；肝素注射液（批号：150625），常州千红生化制药股份有限公司生产。

1.1.4 仪器及备品 MCAO栓线（型号：2838-A5），北京西浓科技有限公司生产；全自动血流变快测仪）型号：FASCO-3010），重庆大学维多生物工程研究所生产；血液凝聚仪（型号：LBY-NJ2），北京普利生仪器有限公司生产；体外血栓形成仪（型号：GX-964），北京医疗设备厂生产。

1.2 方法

1.2.1 分组给药 实验前取240只大鼠置于动物室中适应2 d，按体重随机分为6组，分别为：假手术组，脑缺血再灌注（MCAO）模型组（简称模型组），血塞通（42 mg/kg）组（简称血塞通组），七叶通脉胶囊高剂量（42 mg/kg）组（简称高剂量组），中剂量（21 mg/kg）组（简称中剂量组），低剂量（10.5 mg/kg）组（简称低剂量组）。动物按上述剂量分别灌胃给药，1次/d，连续7 d，假手术组和模型组同时给予同体积蒸馏水（10 mg/kg）。

1.2.2 大鼠脑缺血再灌注模型制备 末次给药30 min后，动物按体重（10 mg/kg）腹腔注射3%水合氯醛麻醉，将麻醉后的大鼠仰卧位固定，颈部备皮，皮肤消毒。在大鼠颈部正中切开皮肤，分离皮下组织，暴露出右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。用微动脉夹暂时夹闭右侧颈总动脉和颈内动脉，在右颈外动脉距离分叉处2～3 mm处结扎。用眼科剪将右侧颈外动脉近心端剪一小口，轻轻拉动右侧颈外动脉，使其与右侧颈内动脉成一直线，调整栓线角度，插入栓线，移去右侧颈内动脉的微动脉夹，缓慢推动栓线，将栓线送入右侧颈内动脉有阻力处（约18～20 mm），阻断大脑中动脉（MCA）的岔口处，在右侧颈外动脉剪口处结扎，移去右侧颈总动脉夹闭的微动脉夹，并开始计时[1]。术后消毒，缝合皮肤，于计时开始后2 h缓慢抽出栓线进行再灌注22 h。假手术组只进行剥离右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），不进行栓塞。大鼠术后均正常饲养。

1.3 测定指标

1.3.1 对脑缺血再灌注损伤大鼠体外血栓形成的测定 在缺血2 h再灌注22 h后，每组随机取10只大鼠，腹主动脉取血1.8 mL，注入硅化塑胶管中，将塑胶管两端接紧密闭，置于体外血栓形成仪中，37℃恒温匀速旋转15 min，取出，倾出塑胶管中血液，置于滤纸上，吸净血栓表面血迹，测量血栓长度，称量湿重；然后将血栓置于坩埚内，于 80℃的烤箱中干燥至恒重后，称干重。

1.3.2 对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板聚集率的测定 在缺血2 h再灌注22 h后，每组随机取10只大鼠，腹主动脉取血3.6 mL，用3.8%枸橼酸钠抗凝，1 000 r/min离心5 min，分离出富血小板血浆，再以3 000 r/min离心10 min，取上清液得到贫血小板血浆。取富血小板血浆0.2 mL于比浊管内，以贫血小板血浆调透光度，二磷酸腺苷（ADP）作诱导剂，用血液凝聚仪检测富血小板血浆中血小板在1 min、3 min、5 min的聚集率及5 min内最大聚集程度。

1.3.3 对脑缺血再灌注损伤大鼠血液流变性的测定 在缺血2 h再灌注22 h后，每组随机取10只大鼠，将大鼠腹主动脉取血4.5 mL，加肝素 0.5 mL抗凝，采用全自动血液流变仪进行全血黏度（高、中、低切），测试完毕后的血样，置于离心机中3 000 r/min离心10 min，抽取血浆，再在全自动血液流变仪上测定血浆黏度。

2 结果

2.1 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠体外血栓形成的影响 见表1。

2.2 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板聚集率的影响 见表2。

2.3 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠血液流变性的影响 见表3。

表1 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠血栓形成的影响（± s ，n = 10）

表1 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠血栓形成的影响（± s ，n = 10）

注：与模型组比较，# P＜0.05，## P＜0.01

组 别 剂量/（mg/kg） 血栓湿重/g 血栓干重/g 血栓长度/cm假手术组 - 0.10±0.011## 0.011±0.014## 1.23±0.33##模型组 - 0.14±0.032 0.045±0.020 1.73±0.29高剂量组 42 0.10±0.031# 0.011±0.011## 1.24±0.31##中剂量组 21 0.11±0.022# 0.022±0.016# 1.36±0.29#低剂量组 10.5 0.12±0.030 0.018±0.014## 1.40±0.27#血塞通组 42 0.11±0.012# 0.011±0.006## 1.23±0.22##

表2 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板聚集率的影响（± s ，n = 10） %

表2 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板聚集率的影响（± s ，n = 10） %

注：与模型组比较：# P＜0.05，## P＜0.01

组 别 剂量/（mg/kg） PAG1 PAG3 PAG5 MPAG假手术组 - 21.83±7.24## 22.28±10.27## 19.93±14.39## 30.48±12.17##模型组 - 54.56±2.31 74.30±19.37 77.31±22.91 75.67±15.53高剂量组 42 35.00±7.43## 42.86±10.85## 38.67±13.23## 48.23±14.22##中剂量组 21 33.03±7.38## 40.38±14.42## 39.19±20.20## 45.73±12.03##低剂量组 10.5 37.80±9.77# 52.04±16.80# 49.94±19.16## 55.09±17.95##血塞通组 42 30.79±6.20## 40.45±9.55## 36.77±16.66## 40.60±12.77##

表3 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠血液流变性的影响（± s ，n = 10） mPa.s

表3 七叶通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠血液流变性的影响（± s ，n = 10） mPa.s

注：与模型组比较：# P＜0.05，## P＜0.01

组 别 剂量/（mg/kg） 高切全血粘度 中切全血粘度 低切全血粘度 血浆粘度假手术组 - 4.72±0.74## 5.45±0.82## 10.81±1.66## 1.44±0.13##模型组 - 5.72±0.57 6.80±0.71 13.69±1.37 1.58±0.10高剂量组 42 5.27±0.29# 6.23±0.36# 12.53±0.72# 1.55±0.12中剂量组 21 5.23±0.66 6.18±0.82 12.40±1.59 1.46±0.14#低剂量组 10.5 5.25±0.47# 6.20±0.59# 12.40±1.21# 1.48±0.11#血塞通组 42 5.20±0.46# 6.15±0.58# 12.37±1.25# 1.60±0.11

3 讨论

七叶通脉胶囊生产工艺独特（获得1项发明专利），由大孔吸附树脂技术集成创新提取有效部位，该有效部位既保留了总皂苷，同时还含有黄酮类化合物。

缺血性脑中风又称脑梗死，主要是由于血液粘滞阻塞等多种原因引起的脑组织局部动脉的血流灌注减少或中断、导致脑组织缺血、缺氧而软化、坏死。依据局部脑组织发生缺血坏死的机制可将脑梗死分为3种主要病理生理学类型，脑血栓形成，脑梗塞和血流动力学机制所致的脑梗死，其临床表现及病机多样性，使得其治法复杂多样，多年来，普遍认为活血化瘀是中医学的治疗大法之一，清代血瘀证理论和活血化瘀法应用也得到了广泛的认识，并将其应用到了中风症的治疗[2-4]。局灶性脑缺血模型比较接近人类脑梗塞发病或脑缺血以及缺血再灌注过程的病理生理变化、发病机制，线栓法制备MCAO模型以不开颅、损伤小、效果肯定，被广泛引用。本次试验则是制备大鼠脑中动脉缺血再灌注模型，通过体外血栓、血小板聚集和血液流变性来考察七叶通脉胶囊对缺血再灌注损伤模型的治疗作用。结果可见，七叶通脉胶囊三给剂量组均使脑缺血再灌注模型大鼠的血栓湿重、干重、血栓长度显著减小；降低1 min、3 min、5 min时血小板聚集率和最大聚集率；也能不同程度地降低高、中、低切的全血粘度和血浆粘度。

前期结果表明，七叶通脉胶囊能改善血瘀模型大鼠模型血液流变性、抑制血栓形成、抑制正常大鼠血小板聚集，起到一定地活血化瘀作用。结合本文的研究可见，活血化瘀作用可能也是七叶通脉胶囊治疗脑缺血的作用机制之一。