人附睾蛋白4、CA125和卵巢恶性肿瘤风险模式在卵巢癌诊断中的应用

陶绍能，王莹莹，戴云海，程光华，阮 昊

(皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 核医学科，安徽 芜湖 241001)

卵巢癌是女性生殖系统病死率较高的恶性肿瘤。在我国，卵巢癌的发病率为7.91/10万，经年龄调整后发病率5.35/10万[1]，严重威胁到女性的生命和健康。随着我国人口老年化，卵巢癌将成为我国医疗的一个沉重负担。CA125是临床常用的血清学辅助诊断指标，但其诊断敏感性低，特异性差，限制了其在临床的应用。近年来人附睾分泌蛋白4(human epididymissecretory protein 4,HE4)作为生物标志物用于对卵巢癌的诊断和监测成为研究热点，结合患者的绝经状态，利用HE4和CA125浓度可计算出卵巢恶性肿瘤风险模式(risk of ovarian malignancy algorithm，ROMA)值并评价其危险性。本研究回顾性分析了卵巢良恶性患者的HE4、CA125和ROMA的水平变化及临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集在我院住院的卵巢癌患者56例，年龄29～75岁，平均年龄(51.9±10.1)岁。绝经前患者34例，年龄29～55岁，平均年龄(45.6±5.8)岁，其中浆液性癌24例，黏液性癌2例，透明细胞癌3例，其他类型恶性卵巢癌5例。绝经后患者22例，年龄51～75岁，平均年龄(61.7±7.1)岁，其中浆液性癌15例，黏液腺癌2例，透明细胞癌2例，其他类型恶性卵巢癌3例。良性肿瘤患者113例，绝经前患者70例，年龄26～59岁，平均年龄(42.5±6.6)岁，其中黏液性囊腺瘤4例，浆液性囊腺瘤4例，成熟性畸胎瘤30例，卵巢子宫内膜异位囊肿30例，混合性上皮性囊腺瘤1例，卵巢卵泡膜细胞瘤1例；绝经后患者43例，年龄44～81岁，平均年龄(60.2±9.6)岁，其中卵巢卵泡膜纤维瘤1例，卵巢卵泡膜细胞瘤1例，混合性囊腺瘤1例，黏液性囊腺瘤9例，浆液性囊腺瘤9例，成熟性畸胎瘤18例，卵巢子宫内膜异位囊肿4例。两组年龄具有可比性。临床分期按照国际妇产科联合会(the international federation of gynaecology and obstetrics，FIGO)标准进行。

1.2 血清HE4、CA125检测及ROMA的计算 在研究对象未进行相关治疗前采集患者血液4 mL，置于分离胶离心管中，1 h后3000 r/min离心10 min，采用雅培i2000化学发光微粒子免疫分析法检测,ROMA由仪器携带的软件自动生成结果。HE4、CA125检测前进行室内质控检测，以保证检测结果的准确性。

1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件。首先进行正态分布检验，发现其不符合正态分布。两组之间比较采用非参数Mann-Whitney U检验。记数资料采用中位数(P25～P75)表示。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者绝经前后HE4、CA125及ROMA水平比较 良恶性卵巢肿瘤患者HE4、CA125及ROMA水平无论在绝经前还是绝经后差异均有统计学意义(P<0.05)，卵巢癌组HE4、CA125及ROMA均高于卵巢良性肿瘤组，见表1。

表1 良恶性卵巢肿瘤绝情前后HE4、CA125及ROMA水平比较[中位数(P25～P75)]

组别绝经前绝经后HE4/(pmol/L)CA125/(U/mL)ROMA/%HE4/(pmol/L)CA125/(U/mL)ROMA/%卵巢癌组295.2(96.3^723.3)461.0(111.0^1000)86.8(30.5^99.7)320.0(81.2^1049.5)811.7(186.7^1000)91.0(67.2^99.9)卵巢良性肿瘤组39.7(33.8^47.1)18.2(11.1^53.4)4.6(3.1^7.1)50.5(42.1^67.0)12.2(8.8^20.4)9.8(7.7^18.9)Z6.4866.3236.4535.2345.8685.867P0.0000.0000.0000.0000.0000.000

2.2 HE4、CA125及ROMA水平在卵巢癌诊断中的价值 根据患者绝经状态的不同得出绝经前后各自的ROC曲线(见图1)，绝经前HE4、CA125及ROMA的曲线下面积分别为0.893、0.883、0.891，理想界值分别为69.6 pmol/L、120.0 U/mL、15.9%，其灵敏度分别为79.4%、76.5%、79.4%，特异度分别为100%、91.4%、100%；绝经后HE4、CA125及ROMA的曲线下面积分别为0.899、0.947、0.947,理想界值分别为93.2 pmol/L、57.5 U/mL、40.6%，其灵敏度分别为72.7%、90.9%、72.7%，特异度分别为88.4%、95.3%、93.0%。我们采用临床常用cut-off值(绝经前CA125为35.0 U/mL，HE4为70 pmol/L，ROMA为7.4%；绝经后CA125为35.0 U/mL，HE4为140 pmol/L，ROMA为25.3%)和ROC曲线计算的最佳cut-off值分别计算其灵敏度和特异度，发现CA125无论绝经前后临床常用cut-off值较最佳cut-off值其特异度偏低，而灵敏度相对高；HE4主要影响绝经后患者，临床常用cut-off值较最佳cut-off值其特异度更高，灵敏度低。ROMA采用最佳cut-off值在绝经前后显示了较好的灵敏度(79.4%、90.9%)和特异度(100%、93.0%)，但是其cut-off值较临床常用cut-off值偏高。

2.3 HE4、CA125及ROMA水平与卵巢癌患者临床分期之间的关系 无论在绝经前还是绝经后，HE4、CA125及ROMA在Ⅲ～Ⅳ期水平均比Ⅰ～Ⅱ期高(见表2)，差异有统计学意义(P均<0.05)。说明HE4、CA125及ROMA与卵巢癌的严重程度密切相关，可能与卵巢癌的发展与预后具有一定的关系。

A.绝经前;B.绝经后。

图1 HE4、CA125及ROMA检测卵巢癌ROC曲线图

表2 CA125、HE4及ROMA与卵巢癌患者临床分期之间的关系

nCA125/(U/mL)HE4/(pmol/L)ROMA/%中位数ZP中位数ZP中位数ZP绝经前FIGO分期Ⅰ^Ⅱ期17126.1(24.9^715.3)2.9230.003113.3(47.7^358.3)3.0140.00339.2(6.9^94.5)2.9380.003Ⅲ^Ⅳ期17937.2(411.0^>1000.0)547.5(175.1^1116.1)99.0(85.0^99.97)绝经后FIGO分期Ⅰ^Ⅱ期9247.3(47.5^619.6)2.8840.00470.6(53.1^98.1)3.9110.00063.3(32.5^71.1)3.8410.000Ⅲ^Ⅳ期13895.1(595.8^>1000.0)710.7(397.0^1497.8)98.6(95.1^99.3)

3 讨论

目前临床上对于卵巢癌诊断和监测的首选肿瘤标志物是CA125，它是由19号染色体上的MUC16基因编码的糖蛋白，其分子量为200～1000 ku。研究表明CA125与卵巢癌的发生、发展及预后有明显相关性。但是，CA125在临床应用中仍有许多缺陷[2-3]，主要体现在：①特异性低，许多组织器官良恶性疾病如肺癌、肝硬化、心功能衰竭等均可出现升高；②受月经期或妊娠等生理性因素影响大；③在许多妇科良性疾病患者中也可升高。这些因素造成了CA125在诊断和监测卵巢癌过程中误诊率较高。

HE4是由WFDC2基因编码的糖蛋白，1991年由德国的Kirchhoff 等通过cDNA筛查方法从人的附睾组织中克隆发现，其编码的蛋白由124个氨基酸组成。它是一个分子量为20～25 ku的小分子分泌型糖蛋白，定位于染色体20q12-q13.1上的14个同源基因之一，全长12 kb左右，由5个外显子和4个内含子组成。据推测，它参与了免疫反应，但其作用尚未准确确定[4]。它存在于输卵管上皮、子宫内膜、子宫颈内腺中，但卵巢表面上皮细胞中未见。卵巢癌组织可分泌HE4，由于其分子量较CA125更小，因此在肿瘤的发生发展过程中，能更快地分泌到外周血中。有文献报道[5]HE4从正常卵巢、卵巢良性肿瘤到卵巢癌组织中逐渐升高。据报道，与CA125相比，HE4在鉴别良性和恶性卵巢肿块方面提供了更好的特异度[6]，因此HE4可能是鉴别恶性和良性卵巢肿瘤的有价值的补充。通过联合HE4与CA125结合患者绝经状态，Moore等[7]提出了ROMA预测卵巢癌发病风险概率的数学模型，并发现其诊断卵巢癌的准确率高达93.8%。

鉴于上述研究结论，本文选择卵巢癌患者作为研究对象，发现HE4、CA125及ROMA在卵巢恶性肿瘤组高于卵巢良性肿瘤组(P<0.05)，表明在卵巢癌的诊断中具有一定的鉴别价值。进一步分析其灵敏度和特异度，发现绝经前患者HE4和ROMA曲线下面积高于CA125，说明其诊断价值更高。然而在绝经后卵巢癌患者中，我们发现CA125和ROMA诊断曲线下面积高于HE4，与文献报道[8]不太一致，究其原因可能与本研究中绝经后患者大部分为较晚期患者有关，此时多数患者CA125出现了明显升高，从而影响了统计结果，但是ROMA诊断价值仍然最高。CA125和ROMA采用临床建议的cut-off值较最佳cut-off值偏低，突出的问题是在临床诊断中其特异性偏低，而HE4临床建议的cut-off值较最佳cut-off值在绝经后患者偏高，这与文献报道基本一致[9]。3项指标的cut-off值与临床建议的cut-off值有一定的出入，这可能需要增加研究病例数进行大样本的研究以确定最佳cut-off值。另外，我们还研究了CA125、HE4及ROMA在绝经前后与卵巢癌的临床FIGO分期之间的关系，Ⅰ～Ⅱ期3项指标水平明显低于Ⅲ～Ⅳ期患者，说明其可以反映患者的分期状况，对于卵巢癌患者的治疗评估具有一定的潜在价值[10]。

通过上述研究，我们认为CA125、HE4及ROMA在卵巢癌临床诊断、分期中具有重要价值，尤其以ROMA临床价值为最大，有利于卵巢癌的临床鉴别诊断并有助于判断卵巢癌的临床分期。