化学发光法检测抗核抗体特定靶抗原/抗体的临床研究

周丽芳

(武汉市江夏区第一人民医院/江南协和医院检验科 430200)

抗核抗体(ANA)在自身免疫性疾病(AID)诊断中经常用到，其是以真核细胞的各部位成分作为靶抗原的自身抗体的总称，其在AID如系统性红斑狼疮、干燥综合征、类风湿关节炎中广泛存在，已作为临床诊断AID的重要参考标志物，因此临床十分重视对ANA的检测并将其作为AID筛查的首选[1-2]。目前临床检测ANA的方法很多，包括间接免疫荧光法(IIF)、化学发光法(CLIA)、线性IIF等，其中以间接IIF最为常用，也是公认的检测ANA的金标准，但是其在判断ANA滴度时只能依靠观察荧光强度来进行，而且无法准确地进行定量分析，容易受到主观因素的影响，不利于临床对疾病的诊断和病情评估[3-4]。但近年来随着化学发光免疫技术的发展和进步，临床开始通过CLIA检测ANA特定靶抗原/抗体，极大地促进了自身抗体检测水平的提高和发展[5]。为了更好地指导临床对AID的诊疗，本院随机从2016年6月至2017年6月选取的405份血清标本分别采用CLIA和IIF进行检测,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年6月至2017年6月本院收集的405例标本作为研究对象；入组标本的疾病诊断均参考国际相关学会最新拟订的诊疗标准；所有标本采集后都要在最短时间内离心并储存于低温环境已以备检测。采集标本的患者中男203例，女202例；年龄34～55岁，平均(45.2±6.5)岁；疾病：干燥综合征100例，系统性红斑狼疮280例，类风湿性关节炎25例。入组患者基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 所有患者抽取空腹静脉血4 mL，于37 ℃孵育至血液凝集完全，以3 500 r/min离心5 min，取血清待检。应用由苏州浩欧博生物医药有限公司提供的全自动化学发光分析仪进行ANA特定靶抗原/抗体检测，仪器型号为LumiRay 1260，试剂盒采用配套的试剂盒。ANA特定靶抗原/抗体检测项目包括抗核糖核蛋白抗体(PNP)、抗史密斯抗体(Sm)、抗干燥综合征抗原A抗体(SSA)、抗干燥综合征抗原B抗体(SSB)、抗双链DNA抗体(dsDNA)、抗核小体抗体(Nuc)和抗核糖体P蛋白抗体(Rib-P)等抗体。IIF的试剂盒由德国欧蒙医学诊断股份公司提供。同时通过CLIA和IIF进行ANA检测，整个操作过程严格按照说明书要求进行。对两种方法检测结果存在差异的可通过欧蒙荧光法进行复查。

2 结 果

2.1CLIA在检测ANA特定靶抗原/抗体中性能分析 分别用两种方法进行405例标本进行检测(平行)，同时参考系统性红斑狼疮及干燥综合征患者阳性标本对抗体检出率进行分析，参考疾病对照组的阴性标本进行检测特异性分析，从中得出，CLIA和IIF在ANA特定靶抗原/抗体检测中抗体检出率和特异性相当，见表1。

2.2ANA特定靶抗原/抗体应用两种方法检测符合率比较 实验结果显示，入组的标本分别通过两种方法进行检测，在抗RNP、SSA、SSB等抗体检测中一致性良好，抗Sm、dsDNA、Nuc、Rib-P等和系统性红斑狼疮具有高度特异性的抗体一致性表现一般，见表2。

表1 在不同疾病组织CLIA和IIF检测ANA特定靶抗原/抗体的抗体检出率和特异性比较[n(%)]

表2 ANA特定靶抗原/抗体应用两种方法检测符合率比较

3 讨 论

临床检测ANA特定靶抗原/抗体对在AID的诊断、病情评估和预后判断具有重要的意义[7]。最新报道显示，目前90%以上的实验室通过IIF检测ANA特定靶抗原/抗体，但是其在临床实际应用中具有一定的局限性，如结果判读主观性强、对设备要求高、自动化操作程度低、标准化难、无法进行定量分析等，因此限制了其在临床的应用和推广[8]。近年来随着更多特异性自身抗体被发现以及抗原纯化技术的发展和进步，CLIA在临床的应用越来越多，其操作简单、客观性强、重复性好、自动化和标准化程度高的优点得到普遍认可[9-10]。本研究显示，在抗体检出率和特异性对比中，CLIA和IIF结果相当，而且CLIA的抗体检出率和国内外大量研究中的抗体检出率及特异性基本一致[11-12]。实验中在抗RNP、SSA、SSB等抗体检测中两种方法检测结果具有良好一致性。有研究指出，IIF并不能保证所有检测项目在检测期间发挥最充分和最优的反应，因此可以造成不同检测项目间有一定的差异性[13]。而CLIA则用数值代替了滴度，用特异性抗体代替了荧光模式，检测期间更加客观性，自动化程度更高，但是也有一定的缺点，即不能反映自身抗体细胞的内定位以及分布。总之，虽然CLIA和IIF在检测ANA特定靶抗原/抗体中各有优缺点，且二者在抗体检出率和特异性能力相当，但CLIA在全自动、全定量、随机上样等方面优势更显著，更符合临床诊疗的需求，值得推广和应用。