P63、P16和ki67在宫颈癌及上皮内病变中的表达及意义

施绒贤 陈 峰

（上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院病理科，上海 202150）

宫颈癌是发生于子宫颈的恶性肿瘤[1]，是妇科最常见的恶性肿瘤，其发病率有年轻化的趋势，世界卫生组织（WHO）把其致病原因归因于高危型HPV人类乳头状病毒感染[2]，根据其组织学来源大部分为鳞状细胞癌，少部分为宫颈腺癌（15%～20%），另有极少数的腺鳞癌（3%～5%），其发展过程为上皮内病变低级别-高级别-鳞状细胞癌，对其精确诊断尤其是对上皮内病变低级别的诊断，在有效的防止由上皮内瘤变向宫颈癌的发展具有重要的实际意义，本研究旨在探讨其在宫颈癌癌前病变至癌变中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2017年12月本院妇科门诊及病房活检标本、leep刀标本及宫颈（含全子宫或附件）切除标本共161例，其中22例鳞状细胞癌，3例宫颈腺癌，上皮内病变低级别104例，上皮内病变高级别32例，另选取超过40例确定无上述病变（包括正常宫颈，急慢性宫颈炎，宫颈萎缩等）的宫颈活检组织作为对照实验，年龄22～72岁，平均年龄42岁。

1.2 方法

所有组织用10%中性福尔马林固定，采用LEICA ASP300S标准化脱水机脱水，LEICA组织包埋机制成蜡块，使用LEICA 2035石蜡切片机切成4微米厚度，涂胶片使用江苏世泰公司的商品化载玻片，P63、P16和ki67抗体采用即用型一抗，由上海长岛生物制品公司提供，免疫组织化学实验方法采用全自动染色方法，设备为LEICA BOND-MAX全自动免疫组织化学机，DAB显色剂等为LEICA BOND-MAX套装试剂。

1.3 结果判断

以HE染色病变部位及性质对照，病变部位棕黄色染色为判断阳性依据，其中P63及KI67为细胞核染色，P16为胞浆及胞核表达，染色深度及百分比综合判断确定阴性（-），弱阳性（+），阳性（++），强阳性（+++），ki67及 P63的判断标准为仅位于基底/副基底层并且细胞阳性数小于5%为（-），阳性细胞数5%～25%为（+），阳性细胞数25%～50%为（++），阳性细胞数大于50%为（+++）

1.4 统计学分析

采用SPSS统计学软件进行数据分析，计数资料用（%）表示，行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

P63在各级病变中呈明显的细胞核阳性表达，在显微镜下主要位于宫颈外口鳞状上皮与柱状上皮的移行部位的基底部，随着级别的增高而表达程度增高，从分布情况而言在对照组宫颈上皮的基底细胞中呈散在性的表达（5%），在上皮内病变低级别中基底层细胞表达明显增多，且棘细胞层也有部分表达，在上皮内瘤变高级别中几何全层均有表达，在浸润性鳞状细胞癌癌中的表达100%，在腺癌中不表达。

表1 P16、ki67和P63在宫颈癌及上皮内病变中的表达

Ki67在各级病变中的表达，正常宫颈鳞状上皮中表达小于8%，低级别鳞状上皮内病变低表达78%，高表达约22%，高级别鳞状上皮内病变低表达19%，高表达约81%，鳞状上皮癌100%，除了正常鳞状上皮外，其他上皮内病变及鳞状细胞癌及宫颈腺癌ki67均表达良好（P＜0.05）。

P16在正常组织中阴性表达（以不表达或散在性表达作为标准），在鳞状细胞癌及高级别的病变中表现为弥漫阳性，在低级别的病变中约40%表现为弥漫性阳性，在宫颈腺癌中也阳性表达，见表1。

3 讨论与结论

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，50年前，宫颈癌是美国妇女癌症患者最主要的因素，但目前死亡率已经下降了2/3，死亡原因的第8位[3]，与死亡率下降明显不同的是发现早期癌及癌前期病变的频率非常之高，而目前中国的发病率上升很快，从流行病学资料来看，目前认为宫颈的浸润性鳞状细胞癌及腺癌，其致病因素均为高危型人类乳头状病毒（HPV），2014年WHO采用了美国病理家协会（CAP）及美国阴道镜和宫颈病理学会（ASCCP）的LAST方案，该方案方案提出了对于包括宫颈在内的下生殖道HPV感染相关鳞状上皮病变进行命名的修订，推荐采用鳞状上皮内病变（squamous intraepithelial lesion，SIL）来命名，并且将其分为两级，即低级别鳞状上 皮 内 病 变（Low grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）和高级别鳞状上皮内病变（High grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）。在病理诊断中低级别与高级别的鉴别诊断尤为重要。

P16为抑癌基因，一旦失活会导致恶性增殖，在判断良性宫颈病变，SIL中有十分重要的临床意义[4]，在大量的文献报道中P16与宫颈鳞状上皮癌的关系密切[5]，在本实验中发现在良性病变中呈局灶性或单个细胞着色，而在SIL以上病变中呈弥漫着色，本实验结果P16着色不能区分LSIL（40%表达）及HSIL（100%表达）以及宫颈鳞状上皮癌（100%），需要结合HE切片，其临床意义是区分SIL以上病变及以下病变，有文献报道P16在宫颈SIL及癌中表达证实可能与HPV感染有关[6]。

P63蛋白是P53蛋白的家族成员，其在增殖的上皮细胞、宫颈及尿道上皮中表达，有关文献报道P63表达和鳞状细胞癌有相关性，为鳞状上皮癌的诊断标志之一[7]，在本研究中在高级别上皮内病变及鳞状上皮癌中阳性率较高，在宫颈腺癌中无表达 。

Ki67是一种与细胞增殖特异相关的核抗原，主要用于判断增殖活性在所有细胞周期活动期的增殖细胞中表达，但在静止期细胞中不表达，ki67的表达与多种肿瘤的发展和浸润有关[8]，在宫颈的病变包括SIL及宫颈表达良好，特别是高度增生表明其异常增殖状态，随着病变的进展，特别在宫颈癌阳性细胞的层次逐步开展至全层，表达明显好于SIL。

综上所述p63、p16和ki67在上皮内病变及宫颈癌中的表达，特别由上皮内瘤变向宫颈癌的发展具有重要的实际意义，KI67由于其超强的敏感性，P16在SIL中表达特点对于临床也有一定的指导意义，p63、p16和ki67的检测无论在诊断及判断预后中有较大的临床价值。