超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响

顾红霞，邹晨鹏

（赣州农业学校，赣州 341100）

0 引言

子宫是一个中空的肌质性器官，富有伸展性，是胎儿生长发育和娩出的器官。子宫借子宫阔韧带附着于腰下部和骨盆腔侧壁，大部分位于腹腔内，小部分位于骨盆内，在直肠和膀胱之间，前端与输卵管相接，后端与阴道相通。子宫阔韧带为宽而厚的腹膜褶，含有丰富的结缔组织、血管、神经及淋巴管，其外侧有子宫圆韧带。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验组织

超数排卵处理后的子宫10个和未经处理的子宫10个。

1.1.2 试剂与药品

70%、80%、90%、95%酒精及无水酒精、二甲苯、甲醛、苏木素液、1%的盐酸酒精、伊红水溶液、蒸馏水。

1.1.3 主要仪器

包埋机：型号KD-BM，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产生产。

切片机：型号RM2235，上海莱卡仪器有限公司生产。推片机：型号TP-1，上海医疗仪器厂产品。

烘片机：型号KD-H，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产。

显微镜及图像采集系统：型号OLYMPUS-BH2，沈阳市互利康医疗器械公司。

1.2 试验方法

1.2.1 子宫组织切片制作

（1）取材。取出超数排卵处理和未处理的小鼠子宫各10个，放在10%的福尔马林溶液中固定5～7 d，制作切片前于相同部位切取组织块。

（2）脱水。组织块用自来水冲洗4～6 h，然后再用不同浓度的酒精逐级脱水。脱水的时间如下：①70%酒精，4～6 h（也可长期保存）；②80%酒精，4～6 h；③90%酒精，4～6 h；④95%酒精Ⅰ、Ⅱ各4～6 h；⑤无水酒精Ⅰ、Ⅱ各 2 h。

（3）透明。酒精与石蜡不能混和，因此脱水后的材料在浸蜡前必须经过透明。透明剂既可替代组织中的酒精，又能溶解石蜡，有利于石蜡的渗入。二甲苯是常用的一种透明剂。将脱水后的材料经1∶1无水酒精与二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ），各级时间为0.5～2 h，使组织达到透明为止。

（4）浸蜡和包埋。透明后的组织块做好标记，放入包埋机中，依次在石蜡Ⅰ（56 ～58 ℃）和石蜡Ⅱ（58～60 ℃）中浸蜡，各2 h，取出后再用60 ℃的蜡包埋，待蜡和组织块完全冷却，修整蜡块。

（5）切片、贴片和烘片。将修整好的蜡块置于切片机上进行切片，厚度为5 mm。选择较好的切片置于45 ℃恒温水浴锅中进行展片，2～3 min即可，用洗好的载玻片轻轻取出展好的切片，并将其放到烘片机上烘2～4 h。

（6）脱蜡、染色。将载有切片的载玻片依次放入下面的液体中进行脱蜡。①二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5～10 min；②无水酒精1 min；③90%酒精1 min；④80%酒精1 min；⑤70%酒精1 min；⑥蒸馏水3～5 min；⑦苏木素液7～10 min；⑧1%盐酸酒精分色1～3 s；⑨自来水洗5～15 min；⑩伊红水溶液1～3 min；k70%酒精2 min；l80%酒精2 min；m90%酒精2 min；n95%酒精Ⅰ、Ⅱ各2 min；o无水酒精Ⅰ、Ⅱ各5 min；p蒸馏水3 min；q二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各5 min。

（7）封片。中性树胶滴到组织上，盖上盖玻片，平置晾干，每组制片30张。

1.2.2 显微镜下观察

在显微镜下观察子宫的组织结构，拍摄照片并做好相关记录。

2 结果与分析

未经过超数排卵处理的小鼠，子宫黏膜表面较平整，子宫内膜上皮是单层柱状上皮，上皮细胞成矮柱状，少数腺体有弯曲，有腔的腺体很少，分布稀疏，子宫腺不发达，子宫壁相对比较薄，见图1、图2。超排后，在激素的作用下子宫开始发育，子宫壁厚度增加，子宫内膜胚性结缔组织迅速增生变厚，上皮为假复层柱状上皮，上皮细胞变得较高较密，腺体较弯曲，腺腔增大，腺体发达，有稀少分泌物，腺体分布较密，见图3、图4。子宫壁表面不完整，这是由于子宫内膜增厚，上皮细胞变密，子宫黏膜内的子宫腺非常发达，腺腔增大、弯曲、增生，分泌更加旺盛，血管迅速增长，间质疏松并有水肿，因此，切出的片表现不完整，有像突起和皱褶一样的结构。

图1 对照组子宫 40×

图2 对照组子宫 40×

图3 超排处理组子宫 40×

图4 超排处理组子宫 40×

3 讨论

3.1 对子宫组织结构的影响

超排后雌激素水平达到高峰，小鼠子宫内膜上皮细胞和子宫腺细胞均为高柱状，细胞排列整齐，可见核分裂象，子宫腺较发达，子宫壁变厚[1]。

3.2 对子宫内膜的影响

超数排卵处理后，小鼠子宫内膜形态表现与对照组明显不同，镜下可见内膜表层细胞呈锯齿状，宫腔间隙较宽，被复粘膜层子宫腺发育，固有膜宽大，肌壁厚，见图3、图4；而对照组小鼠子宫腔呈裂隙状，粘膜层平坦，被复上皮由柱状单层立方组成，子宫腺少，固有膜窄，肌壁薄，见图1、图2。

超数排卵处理后，FSH激素促进子宫内膜腺的分泌，引起附植现象的出现。

胚泡附植过程中，子宫内膜细胞内的水解酶，可消化子宫液中的大分子物质为胚泡提供发育的营养。同时，水解酶还在胚泡疏松附植、穿入和子宫内膜的蜕膜化过程中具有重要作用[2]。

3.3 对子宫腺的影响

超排后子宫切片上皱褶增加，表明超排在时大量激素的作用下子宫腺的发育更充分，子宫腺体增加，子宫腺体较大蜷曲，出现许多分支管状腺，腺体腔隙增大导致切片上子宫黏膜不完整[3]，说明超排处理时的激素对子宫壁的结构以及子宫腺的发育有促进作用，可以满足超排后更多胚胎附植的需要。

4 结论

试验通过对小鼠子宫组织切片的观察，经试验组与对照组的比较，发现经超数排卵激素的处理，子宫内膜发生变化，主要表现为子宫内膜上皮增生、腺体加长、腺腔加大、弯曲增多，子宫内膜的结缔组织和成纤维细胞发育，子宫壁变厚可以为胚胎的着床和发育提供良好的环境。