右旋雷贝拉唑钠对大鼠消化性溃疡的药效研究

林晓冬，刘 娜，刘 纯，郑晓霞，房绍英，程艳玲，郭秀丽

（1. 山东大学 药学院，山东 济南 250001；2. 山东省药学科学院 新药评价中心，山东 济南 250101）

消化性溃疡病（peptic ulcer disease ，PUD）主要发生于胃和十二指肠，是由胃酸、胃蛋白酶自身消化所致的黏膜局限性组织缺损、炎症与坏死性病变，深达黏膜肌层[1]。公认的PUD的发病机制有：幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染、胃酸及胃蛋白酶等损伤因子和黏膜自身保护能力的降低[2-3]。

右旋雷贝拉唑[dexrabeprazole，R-(+)-rabeprazole]是新型苯并咪唑类质子泵抑制剂（proton pump inhibitor，PPI），通过抑制胃酸分泌的限速酶H+, K+-ATP酶（H+, K+-ATPase）起到抑制胃酸的作用。右旋雷贝拉唑是雷贝拉唑旋光异构体的右旋体，雷贝拉唑本身具有受肝脏CYP2C19 基因多态性的影响小、H+, K+-ATP酶亚基结合位点多等优势[4]。与其他已上市的PPI单一旋光异构体埃索拉唑、右旋兰索拉唑、左旋泮托拉唑相比，右旋雷贝拉唑具有个体差异小、起效更快、药效持久等优势[5]。因此右旋雷贝拉唑有可能成为治疗PUD的首选药物之一。

已有研究表明，右旋雷贝拉唑钠对胃食管反流病、非甾体抗炎药引起的胃溃疡有显著的抑制作用，是主要药效活性成分[6-7]。我们采用大鼠溃疡模型对右旋雷贝拉唑钠、左旋雷贝拉唑钠及消旋雷贝拉唑钠治疗消化性溃疡的作用进行了对比研究，为右旋雷贝拉唑钠相关临床研究和开发提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

AY220型电子分析天平（日本岛津公司）；YP3001N型电子天平，JY1002型电子天平（上海精密科学仪器公司）。

1.2 药物和试剂

注射用右旋雷贝拉唑钠（山东省药学科学院，批号：130403）；注射用左旋雷贝拉唑钠（山东省药学科学院，批号：20130401），注射用雷贝拉唑钠（山东省药学科学院，批号120101）。0.9 %氯化钠注射液（辰欣药业，批号1212055301）；冰乙酸（天津广成，批号20120409）；戊巴比妥钠（德国默克公司，批号100808）。

1.3 实验动物和环境设施

SPF级CD（SD）大鼠210 只，雌雄各半，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。饲养环境：SPF级，室温20～25 ℃，日温差≤3 ℃，换气次数10～20次/h，湿度40 %～70 %，压强梯度20～50 Pa，昼夜明暗交替照明12 h/12 h。

2 方法

2.1 大鼠胃酸分泌功能

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水24 h后，按性别、体重随机分为7组，即右旋雷贝拉唑钠0.9，1.8，3.6 mg/kg组，左旋雷贝拉唑钠对照组，雷贝拉唑钠对照组，模型对照组，假手术组，每组10只，雌雄各5只。

造模前各组大鼠经尾静脉注射相应的药物溶液1次（5 ml/kg），模型对照组和假手术组同法给予生理盐水。给药完毕1 h后，各组大鼠以1 %戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，将动物仰卧固定，腹部手术区碘伏消毒，医用酒精脱碘。取腹部剑突下正中切口，钝头镊子将胃引出腹腔，避开血管，在幽门和十二指肠的交界处穿线将幽门结扎。将胃放回原位，缝合腹壁切口，碘伏消毒。术后将动物放回饲养笼，禁食禁水5 h后，麻醉处死大鼠，摘取全胃，收集胃液，3000 r/min离心20 min。取全部上清，量其体积，酸碱滴定法测定胃总酸含量，计算胃酸总分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率[8-9]。

2.2 大鼠幽门结扎型胃溃疡

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水54 h后，分组、给药、手术，方法同2.1项。术后禁食禁水18 h后，麻醉处死各组大鼠。摘取全胃，沿胃大弯剪开胃腔，以生理盐水轻柔漂洗后，测量判定胃黏膜面溃疡程度，计算胃溃疡指数、胃溃疡抑制率。

胃溃疡指数评分采用Guth法[10]：斑点糜烂计1分，糜烂长度<1 mm计2分，1～2 mm计3分，2～4 mm计4分，＞4 mm计5分。宽度＞1 mm时，分值×2。胃溃疡抑制率=（模型对照组溃疡指数-给药组溃疡指数）/模型对照组溃疡指数×100 %。

2.3 大鼠乙酸型十二指肠溃疡

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水24 h后，分组，方法同2.1项。动物麻醉后，仰卧位固定于手术板，腹部手术区碘伏消毒，医用酒精脱碘。剑突下1 cm正中切口，暴露十二指肠。将一内径5 mm的医用级聚丙烯管的光滑切面紧贴十二指肠起始部浆膜面，向管内注入70 %乙酸60 µl，30 s后移出聚丙烯管，迅速用无菌吸水棉吸去残留的乙酸，用10 ml生理盐水冲洗并引流后，缝合腹壁。各组大鼠经尾静脉注射相应的药物溶液（5 ml/kg），模型对照组和假手术组同法给予生理盐水。每天给药1 次，连续7 d。

末次给药2 h后，麻醉处死，取出胃及十二指肠上部。从乙酸贴敷的对面纵行剖开十二指肠，以生理盐水轻柔漂洗后，测量十二指肠溃疡的长径和短径，计算十二指肠溃疡面积、十二指肠溃疡抑制率。十二指肠溃疡面积=π×长径×短径/4[11]。十二指肠溃疡抑制率=（模型对照组溃疡面积-给药组溃疡面积）/模型对照组溃疡面积×100 %。

2.4 数据统计

试验数据使用SPSS 19.0统计软件分析，以±s表示，数据服从正态分布，且方差齐，采用LSD检验。P<0.05认为有统计学意义。

3 结果

3.1 胃酸总分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率

与模型组比较，右旋雷贝拉唑钠1.8，3.6 mg/kg组和雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组胃酸总分泌量均显著减少（P<0.01），右旋雷贝拉唑钠1.8，3.6 mg/kg组和雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组胃液pH值显著升高（P<0.05，P<0.01）。本试验条件下，假手术组个体动物胃酸分泌量过少，本测试方法不适用。右旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组胃酸总分泌量、胃液pH均优于左旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组，但差异无统计学意义（P＞0.05）。右旋雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组胃酸总分泌量、胃液pH均优于雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组，但差异无统计学意义（P＞0.05）。胃酸分泌抑制率由高到低顺序为：右旋雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组＞雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组＞右旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组＞右旋雷贝拉唑钠0.9 mg/kg组＞左旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组＞模型对照组。具体结果见表1。

表1 右旋雷贝拉唑钠对单纯幽门结扎大鼠胃酸分泌的影响（±s，n=10）

表1 右旋雷贝拉唑钠对单纯幽门结扎大鼠胃酸分泌的影响（±s，n=10）

注：*P<0.05，** P<0.01 vs 模型组

/mg·kg-1胃酸总分泌量/μmol·h-1pH值胃酸分泌抑制率/%假手术组 － － － －模型对照组 － 93.12±29.83 1.02±0.11 0.00右旋雷贝拉唑钠组组别 剂量0.9 65.22±49.51 1.12±0.14 29.96 1.8 50.02±28.25** 1.17±0.16* 46.28 3.6 39.32±32.99** 1.30±0.19** 57.77 1.8 70.38±34.44 1.05±0.10 24.42雷贝拉唑钠组 3.6 46.24±31.38** 1.24±0.21** 50.34左旋雷贝拉唑钠组

3.2 胃溃疡指数、胃溃疡抑制率

幽门结扎型胃溃疡大鼠单次尾静脉注射给药5 h后，与模型组比较，右旋雷贝拉唑钠1.8、3.6 mg/kg组和雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组溃疡指数显著降低（P<0.05，P<0.01）。右旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组胃溃疡指数、胃溃疡抑制率均优于左旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组。右旋雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组胃溃疡指数、胃溃疡抑制率均优于雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组。胃溃疡抑制率由高到低顺序为：右旋雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组＞雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组＞右旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组＞左旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组＞右旋雷贝拉唑钠0.9 mg/kg组＞模型对照组。具体结果见表2。

表2 右旋雷贝拉唑钠对大鼠胃溃疡的影响（±s，n=10）

表2 右旋雷贝拉唑钠对大鼠胃溃疡的影响（±s，n=10）

注：*P<0.05，** P<0.01 vs 模型组

/mg·kg-1胃溃疡指数胃溃疡抑制率/%假手术组 － － －模型对照组 － 44.1±13.65 0.00右旋雷贝拉唑钠组组别 剂量0.9 35.7±18.06 19.05 1.8 23.3±11.64* 47.17 3.6 15.6± 9.03** 64.63左旋雷贝拉唑钠组 1.8 33.3±17.04 24.49雷贝拉唑钠组 3.6 23.0±8.27* 47.85

3.3 十二指肠溃疡面积、十二指肠溃疡抑制率

乙酸型十二指肠溃疡大鼠经尾静脉注射给药7 d后，与模型组比较，右旋雷贝拉唑钠1.8，3.6 mg/kg组、雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组的十二指肠溃疡面积显著降低（P<0.01）。与左旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组比较，右旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组十二指肠溃疡面积显著降低（P<0.01），十二指肠溃疡抑制率明显升高。右旋雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组十二指肠溃疡指数、十二指肠溃疡抑制率均优于雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组。十二指肠溃疡抑制率由高到低顺序为：右旋雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组＞雷贝拉唑钠3.6 mg/kg组＞右旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组＞右旋雷贝拉唑钠0.9 mg/kg组＞左旋雷贝拉唑钠1.8 mg/kg组＞模型对照组。具体结果见表3。

表3 右旋雷贝拉唑钠对大鼠十二指肠溃疡的影响（ ±s，n=10）

表3 右旋雷贝拉唑钠对大鼠十二指肠溃疡的影响（ ±s，n=10）

注：** P<0.01 vs 模型组；△△P<0.01 vs 左旋雷贝拉唑钠组

组别 剂量/mg·kg-1十二指肠溃疡面积/mm2十二指肠溃疡抑制率/%假手术组 － － －模型对照组 － 6.04±1.37 0.00右旋雷贝拉唑钠组0.9 4.98±1.33 17.63 1.8 4.09±0.86**△△ 32.42 3.6 2.82±0.63** 53.34左旋雷贝拉唑钠组 1.8 5.81±1.94 3.88雷贝拉唑钠组 3.6 3.90±0.97** 35.51

4 讨论

H+, K+-ATP酶位于胃壁黏膜层，能以大约每小时1 %的速度重新生成，每天可生成25 %，半衰期约50 h，由于H+, K+-ATP酶是胃酸分泌的限速酶，因此H+,K+-ATP酶抑制剂是目前最有效的抑制胃酸的药物[12]。PPI是目前治疗Hp感染、胃食管反流病、吻合口溃疡、慢性胃炎和卓-艾综合征等胃酸相关性疾病的首选药物和重要的诊断手段[13-14]，对非甾体抗炎药引起的胃溃疡同样有效[15]。

研究表明，雷贝拉唑钠主要通过非酶途径代谢，其异构体的大鼠和犬体内药动学参数均无性别差异，且无构型转化[16-17]。不同异构体在犬体内血药浓度-时间曲线存在差异[18]，其原因可能是细胞色素P450 CYP2C18、CYP2C21的基因型在不同种属间存在差异所致[19-20]。相比左旋雷贝拉唑，CYP2C19基因多态性对右旋雷贝拉唑的影响更大[21]。右旋雷贝拉唑对H+, K+-ATP酶活性抑制作用强于左旋雷贝拉唑，且在水应激溃疡模型、吲哚美辛诱导溃疡模型和幽门结扎模型中具有优势[22]。

本研究结果表明，右旋雷贝拉唑钠1.8，3.6 mg/kg通过抑制胃酸分泌、减少胃酸总分泌量、升高胃液pH，对胃溃疡、十二指肠溃疡均具有抑制作用。雷贝拉唑钠临床已知的不良反应有：腹泻、头痛、鼻炎、咽炎、恶心、腹痛、血清胃泌素水平升高等，但组织学改变不显著，肾功能损害和轻中度肝功能损害无需调整剂量[23]。由于右旋雷贝拉唑钠潜在临床的不良反应和药物相互作用的报道较少，应得到重视。在仿制药临床前药理毒理学评价过程中，针对药物的自身特点具体问题具体分析，结合药物临床信息进行评估和预测同样具有十分重要的意义[24]。