迁移诱导蛋白7在肠癌血管生成拟态形成中的作用及分子机制的研究

许 冰

（沈阳市肛肠医院病理科，辽宁 沈阳 110009）

肠癌在一定程度上会对人体的生命安全造成影响，由于早期肿瘤的转移性较高，因此，很多患者在确诊的时候都为中期或是晚期，且在手术之后复发转移的情况下，会导致患者的生活质量受到影响，生存率降低。因此，探索肠癌相互关联的癌基因与蛋白，并针对性的进行基因治疗，有利于提升治疗效果。在实际研究中可以发现，VM处于肠癌中，且与肿瘤转移存在直接联系。但是，当前还没有明确Mig-7在肠癌VM形成期间，是否起到了一定作用。在此次研究中，观察肠癌中VM、Mig-7、VEGF及MMP-2的表达情况，观察其对VM形成的影响，并初步探讨其形成机制。

1 材料与方法

1.1 一般资料：收集2014年1月至2018年3月沈阳市肛肠医院病理科的存档石蜡标本160例，所有的患者在手术之前，都没有进行放疗、化疗与免疫治疗，都属于完成的临床资料，患者知情同意，病程1～18个月。其中男性90例，女性90例；年龄42～82岁。

1.2 试剂：兔抗人Mig-7多克隆抗体购自英国Abcam公司；鼠抗人VEGF单克隆抗体（SC-25784）主要在Santa Cruz公司购买，相关的浓度为1∶99；鼠抗人MMP-2单克隆抗体（SC-25784）在Santa Cruz公司购买，浓度为1∶99；即用型鼠抗人CD34单克隆抗体（MAB-0034）、ElivisionTM plus试剂盒以及DAB显色试剂盒在福州迈新公司购买。

1.3 试验方法

1.3.1 CD34和PAS双重染色：将石蜡标本利用连续切片的方式，将切片规格控制在4 μm厚，然后进行烤干，在二甲苯溶液中进行清洗，同时还需在乙醇中进行脱蜡。其中，抗CD34抗体和生物素标记的山羊抗鼠IgG（二抗）都属于工作液规格样本，实现DAB染色目的，在完成最终反应之后，进行PAS染色，最后使用苏木精开展对比染色处理工作，使用树胶材料开展密封固定。结果判定：如果血管内皮细胞的颜色显示为棕色，那就表明CD34属于阳性。管腔的周围没有阳性细胞，且PAS的阳性紫红色基膜主要表现属于内皮血管。采用随机方式选择5个视野（×100）计数VM，取平均值。将VM作为主要的计数方式，最后的平均值平均值≤2则为阴性表达，＞2则为阳性表达。

1.3.2 免疫组织化学染色：使用免疫组织化学方式，选择多张连续切片，规格为4微克/片，进行烤干，设置在二甲苯溶液中脱蜡，然后在乙醇中进行清洗。按照试剂盒的说明书严格进行免疫组织化学染色的操作处理。使用已经获得的阳性片进行对照，然后将PBS作为主要的缓冲液，代替一抗空白对照。

结果判定：细胞质和细胞膜如果颜色为棕黄色，就代表是阳性。采用随机方法选择5个高倍（×400）视野，每个视野计数100个细胞。

1.3.3 统计学分析：采用SPSS19.0统计软件进行数据分析。在肠癌组织中，VM的形成、Mig-7、VEGF及MMP-2的表达与各临床病理因素的相关性以及三个指标之间的关系采用χ2和Spearman等级相关检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

肠癌组织中Mig-7、VEGF、MMP-2、VM的相关性分析，癌组织中，Mig-7的表达与VEGF、MMP-2、VM的形成呈正相关。见表1。

表1 肠癌组织中Mig-7、VEGF、MMP-2、VM的相互关系

3 讨 论

血管生成拟态属于不依赖于内皮细胞衬覆，但是肿瘤细胞会出现高通透性管腔结构，此类结构具有一定的血液灌注性能，可以促进肿瘤血管生成方面理论内容的合理补充[1-2]。当前，在实际研究的过程中，已经得知VM与癌症侵袭、转移及患者不良预后等产生着密切联系，并且在很多肿瘤中都存在。而迁移诱导蛋白7，会导致肿瘤侵袭速度增快，肿瘤转移出现增进的现象，属于血管生成模拟方面，较为重要的调节因子。当前，我国在Mig-7方面的研究还是很少，因此，可以积极借鉴国外的相关研究进行分析，并明确具体的情况[3]。综上所述，Mig-7蛋白与肠癌存在较为直接的联系，很有可能在VM形成中出现参与的现象，导致肿瘤侵袭问题严重，对患者的生活质量造成直接影响。因此，需要从靶向治疗方面进行分析，形成一定的参考依据。