高效液相色谱法测定毛黄堇不同部位脱氢卡维丁含量

吴 佳

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121）

毛黄堇 Corydalistomentella Franch.系罂粟科紫堇属植物，产于湖北西部、四川东部至南部、重庆、陕西南部，又名干岩矸，全草皆可入药，为民间贵重中草药[1－2]。其具有抗菌、消炎、镇痛和强安定作用，主治疮痈肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌等症[3－4]。毛黄堇与石生黄堇〚5－6〛均含有明确的药理活性成分脱氢卡维丁，且含量较高[7]。本研究中建立了测定毛黄堇中脱氢卡维丁含量的高效液相色谱（HPLC）法，考虑毛黄堇为全草入药，各部位之间的脱氢卡维丁含量可能存在差异[5]，故对其不同部位叶、叶柄及根茎进行了定量分析。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（包括四元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器，Agilent 1260工作站），BP221S型、MSA225S－100－DU 型电子天平（德国赛多利斯公司）；KQ－500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；烘箱（德国Binder公司）。

1.2 试药

脱氢卡维丁对照品（中国食品药品检定研究院，批号为111732－200904）；毛黄堇由重庆市药物种植研究所提供，采集地为南川金佛山，由本院蒋万浪主任中药师鉴定为正品；乙腈为色谱纯，二乙胺、甲醇、盐酸、磷酸二氢钾、磷酸均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

取五氧化二磷中减压干燥至恒重的脱氢卡维丁对照品适量，精密称定，加1%盐酸甲醇溶液制成每1 mL含0.200 4 mg的对照品溶液[8]。取本品粉末（过2号筛）约0.2 g，精密称定，至具塞锥形瓶中，加1%盐酸甲醇溶液50 mL，称定质量，超声处理（功率为250 W，频率为40 kHz）30 min，置室温，用甲醇补足减失的质量，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：磷酸盐缓冲溶液（每1 L含20 mmol磷酸二氢钾，10 mmol二乙胺，0.1%磷酸）－乙腈（72 ∶28）；流速：1 mL ／min；柱温：35℃；检测波长：347 nm；进样量：10μL。在此色谱条件下，分别进样对照品溶液和供试品溶液各10μL，色谱峰峰形良好，达到较理想的分离结果，理论板数按脱氢卡维丁峰计算大于4 000，具有较好的专属性，分析条件可行。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密吸取对照品贮备液0.2，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，12.0 μL，按拟订色谱条件进样测定。以质量浓度的对数（X）和对应峰面积的对数（Y）计算回归方程，得 Y＝2 833.6 X＋99.236，r＝0.999 1（n＝7），线性范围为 0.040 08～2.404 80μg。

精密度试验：取同一对照品溶液，按拟订色谱条件重复进样6次。结果的 RSD为0.32%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温下放置，分别于 0，2，4，8，12 h 时按拟订色谱条件进样测定。结果的RSD为0.9%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品6份，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果的 RSD为1.8%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的毛黄堇（3.028 2 mg／g，未除水分）9份，精密称定0.1 g，分别精密加入低、中、高浓度的对照品贮备液，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

将毛黄堇全草进行部位拆分，分别得叶、叶柄、根及根茎3个部位，将上述3份样品置硅胶中干燥48 h，取上述3份样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，同时按2015年版《中国药典（四部）》通则0832第二法测定水分。结果见表2。

表1 脱氢卡维丁加样回收试验结果（n＝9）

表2 样品含量测定结果（n＝3）

3 讨论

曾尝试用以下2种溶剂制备供试品溶液：1%盐酸甲醇溶液；流动相溶液[磷酸盐缓冲溶液（每1 L含20 mmol磷酸二氢钾，10 mmol二乙胺，0.1%磷酸）－乙腈（72∶28）][9]。结果采用第1种溶剂，有效成分提取更完全，且杂质较少。试验了0.05 mol／L磷酸二氢钾溶液－乙腈的流动相系统[10]，但脱氢卡维丁峰对称性较差，易拖尾。

经过对脱氢卡维丁的二极管阵列扫描，发现有2个较大的紫外吸收峰，最强吸收峰在274 nm波长处[11]，次吸收峰在347 nm波长处。但采用274 nm为检测波长时杂质干扰较多，而选用347 nm作为检测波长时干扰较小[12－13]，故最终选用347 nm作为检测波长。

综上所述，通过对毛黄堇植物各部位脱氢卡维丁含量的考察发现，在根及根茎中脱氢卡维丁的含量最高，叶柄次之，叶中含量最低，仅为根及根茎中的1／10。根据上述试验，不仅掌握了毛黄堇中脱氢卡维丁的含量分布，更为制订毛黄堇质量标准及限度提供了参考依据。HPLC法测定毛黄堇中脱氢卡维丁含量，操作简便，结果可靠，色谱图可反映毛黄堇的特征，对其质量控制具有重要意义。