蛭龙活血通瘀胶囊对氯化锂－匹罗卡品致痫大鼠海马组织炎性因子表达的影响*

吴 英 ，郑 直 ，刘 丽 ，赵立志

（1.西南医科大学附属中医医院，四川 泸州 646000； 2.四川省泸州市人民医院，四川 泸州 646000）

癫痫（Epilepsy）是脑部神经元高度同步化异常放电所致的一组中枢神经系统功能失常综合征，发病率为5‰～8‰。70% ～80%的患者服用抗癫痫药物后可控制发作，但约30%患者对抗癫痫药物耐药[1]。中药制剂蛭龙活血通瘀胶囊在前期动物及临床实验研究中，已证实具有保护脑细胞、改善神经功能、减少神经细胞凋亡、改善血液流变性等作用[2－4]。本研究中通过观察氯化锂－匹罗卡品（毛果芸香碱）致痫大鼠脑组织中海马区细胞因子的变化，探讨蛭龙活血通瘀胶囊抗癫痫的机制。

1 材料与方法

1.1 主要药物及试剂

蛭龙活血通瘀胶囊（西南医科大学附属中医医院制剂室，批号为川药Z20070528）；丙戊酸钠片（湖南省湘中制药有限公司，国药准字H43020874，规格为每片0.2 g）；盐酸匹罗卡品（上海迈瑞尔化学技术有限公司，批号为1538902CAS，规格为每瓶5 g）；氯化锂（北京智杰方远科技有限公司，批号为B00199301，规格为每瓶100 g）；硫酸阿托品（遂成药业股份有限公司，国药准字H41021257，规格为每瓶 0.5 mg）。酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（上海邦奕生物科技有限公司）。

1.2 实验动物与分组

成年健康雄性SD大鼠48只，体质量200～250 g，由西南医科大学实验动物中心提供，动物合格证号为SYXK（川）2013－063，室温、普通饲料喂养。随机分为对照组、癫痫组、蛭龙活血组、丙戊酸钠组，各12只。

1.3 造模方法

氯化锂及匹罗卡品溶于生理盐水，质量浓度分别为42.39 g／L和10 g／L。癫痫模型大鼠首日腹腔注射氯化锂（127 mg／kg），24 h后予以腹腔注射匹罗卡品（30 mg／kg），匹罗卡品注射前 30 min，予硫酸阿托品（1 mg／kg）腹腔注射，以减轻匹罗卡品的不良反应。对照组：仅腹腔注射等量生理盐水。蛭龙活血组：蛭龙活血通瘀胶囊溶于生理盐水中，制备成100 g／L的母液，使用时按照0.8 mg／（kg·d）剂量腹腔注射给药，大鼠癫痫发作开始后2 h予以第1次给药，每24 h重复腹腔注射等量药物1次，连续给药3次。丙戊酸钠组：将200 mg丙戊酸钠加蒸馏水溶解至质量浓度为20 g／L[5]，大鼠癫痫发作开始后2 h第1次腹腔注射给药，每24 h重复腹腔注射等量药物1次，连续给药3次。根据Racine分级标准[6]，密切观察发作情况，造模成功标准为发作达Ⅳ～Ⅴ级。若大鼠在造模过程中死亡，则按随机原则补足数量。

1.4 行为观察及指标检测方法

行为学观察：造模成功后使用视频监测录像记录存活癫痫大鼠行为，用苦味酸分别标记大鼠以区别。于癫痫发作开始至第3次治疗结束，观察大鼠癫痫发作的时间、形式、级别、持续时间及次数。

脑电图变化：将大鼠连接电极，置透明玻璃笼，笼子放置于屏蔽室，以避免噪声、静电及电磁信号的干扰，记录并分析脑电波形。

炎性因子：癫痫后72 h，用水合氯醛深度麻醉大鼠至对疼痛刺激无反应，0℃生理盐水50mL心脏灌注至流出液清凉，断头处死。取大鼠海马组织加入蛋白裂解液，匀浆收集上清液，肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、白细胞介素1b（IL－1b）检测严格按照ELISA试剂盒说明书步骤操作。

1.5 统计学处理

应用SPSS17.0统计学软件分析。计量资料以中位数±四分位数间距表示，采用秩和检验，等级资料的统计分析采用非参数秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

结果见表1和表2。

表1 各组大鼠癫痫发作程度比较（只，n＝12）

表2 各组大鼠海马组织中炎性因子水平比较（± s，pg／mL，n ＝12）

表2 各组大鼠海马组织中炎性因子水平比较（± s，pg／mL，n ＝12）

注：与对照组比较，▲P＜0.01，★P＜0.05；与癫痫组比较，●P ＜0.05。

组别对照组癫痫组蛭龙活血组丙戊酸钠组TNF－α 679.86±25.92 759.73±22.53▲718.83±23.01★●721.14±22.87★●IL－1b 269.48±31.61 425.23±31.03▲351.04±28.46★●349.31±29.03★●

3 讨论

目前，越来越多的证据支持炎症和免疫反应在癫痫产生的病理生理机制中起重要作用，且癫痫持续状态所致脑损伤引起的炎性反应应答与癫痫复发有密切关系[7－9]。炎性反应在脑组织癫痫病灶形成中的作用，已在颞叶癫痫耐药和灰质发育异常有关的癫痫患者中体现[10－14]。动物研究证实，炎性介质包括细胞因子、补体因子等参与癫痫发作，且干预这些分子或其相应的受体可减轻癫痫发作的频率和程度[15]。Gomes等[16]研究发现，长春西汀和卡马西平的抗癫痫机制可能与减少大鼠海马组织内IL－1b和TNF－α表达有关。

本研究结果发现，蛭龙活血通瘀胶囊预处理癫痫大鼠可减少癫痫发作次数和发作程度，对控制癫痫发作有较好的疗效。肖倩等[17]研究发现，炎性因子IL－1b和TNF－α水平在癫痫发作后6 h内快速升高。本研究中ELISA检测结果也显示，蛭龙活血组大鼠海马组织中TNF－α和IL－1b表达量较癫痫组明显下降。

综上所述，蛭龙活血通瘀胶囊可能通过抑制炎性因子TNF－α和IL－1b的产生，抑制神经元变性、兴奋性增高及血脑屏障破坏，从而控制癫痫发作。