细胞块与免疫组化技术联合在解决胸腔积液诊断中的应用价值探究

李 雯 韩 莉

（新疆巴音郭楞蒙古自治州人民医院病理科，新疆 库尔勒 841000）

胸腔积液，属于临床常见症状，临床多采取查找脱落癌细胞方式，明确肿瘤性病变的性质、肿瘤性质[1]。常规离心涂片处理，缺少组织形态的结构，所以容易和转移性腺癌弄混，进而对诊断结果构成直接影响。为此，本次研究，探究细胞块联合免疫组化技术诊断、单纯免疫组化技术诊断的效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料：按照诊断方法，将三级甲等医院病理科2012年3月至2017年10月收治的236例胸腔积液患者，分成观察组、对照组，分别为126例、110例，两组患者均经影像学检查[2]。观察组中包括男性78例，女性48例；最小年龄、最大年龄分别为32岁、86岁，平均年龄为（59.4±5.5）岁。对照组包括男性75例，女性35例；最小年龄、最大年龄分别为34岁、82岁，平均年龄为（58.9±5.3）岁。两组临床一般资料比较，差异不具有统计学意义，P＞0.05。

1.2 方法：两组均接受常规离心涂片法处理，取患者胸腔积液标本10 mL，放置在锥形试管中，置于离心设备每分钟2000 r，离心时间为6 min。然后，倒上清液，将沉淀物涂片取出。

1.2.1 对照组诊断方法：采用免疫组化技术，通过免疫组化染色SP法，选择CK7、TTF-1、CEA等抗体，操作时严格按照要求进行。

1.2.2 观察组诊断方法：采用免疫组化技术联合制备细胞块。细胞块制备方法为脱落细胞石蜡包埋法，具体步骤如下：选取胸腔积液标本50 mL，置于锥形试管中，2000 r/min，6 min离心，取沉淀物质，离心两次，沉淀物为凝集块情况，采取滤纸将10%的重型福尔马林包裹并固定处理。也可添加1%的融化琼脂，混合、离心，取沉淀。然后，将固定物实行包裹及固定处理。固定时间为5 h，和活检标本脱水、包埋，形成细胞块后切片处理。

1.3 观察指标

1.3.1 观察两组HE染色形态学、诊断效果、免疫表型情况。

1.3.2 经离心涂片、细胞块HE切片和免疫组化切片，经两名医师评判，以确保诊断结果的准确性。免疫组化标记CK7、Ecadherin、CEA细胞膜显示为着棕黄色粒状、TTF-1细胞核着棕黄色颗粒、Calretinin细胞核阴性，即可判定为阳性。

1.4 统计学处理：研究数据通过SPSS13.0软件处理，计数资料以例数（n）代表，组间率（%）比较经χ2检验，数据对比为P＜0.05差异时，表示组间对比具有统计学意义。

2 结 果

2.1 HE染色形态学分析：细胞块镜下，能观察到腺癌细胞异型比较明显，核质比增大、核膜清晰。同时，可清晰的观察到核分裂情况，通过腺管样排列、乳头状排列、小梁状排列。反应性增生间皮细胞核为圆形，多处于中心位置，常见多核、双核。

2.2 两组诊断效果的对比：观察组和对照组的诊断情况实行对比，存在显著差异，P＜0.05，见表1。

表1 两组患者诊断结果的对比[n（%）]

2.3 免疫表型分析：236例患者中，腺癌细胞阳性率为70.34%（166/236），166例诊断腺癌细胞阳性患者中，肺腺癌细胞CK7阳性率、TTF-1阳性率、E-cadherin阳性率、CEA阳性率、Calretinin阳性率各占100%（166/166）、80.72%（134/166）、95.78%（159/166）、94.58%（157/166）、0。反应性增生间皮细胞阳性率29.66%（70/236），70例诊断为反应性增生皮细胞阳性者中，间皮细胞CK7阳性率、TTF-1阳性率、E-cadherin阳性率、CEA阳性率、Calretinin阳性率各占5.71%（4/70）、0、0、10%（7/70）、87.14%（61/70）。肺腺癌细胞中CK7、TTF-1、E-cadherin、CEA均为高表达状态。反应性增生间皮细胞中，Calretinin显示为高表达状态。见图1、图2。

图1 放大倍数：20×10 E-cadherin

图2 放大倍数：20×10 TTF-1

3 讨 论

胸腔积液中恶性肿瘤最为多见，主要包括转移性癌、淋巴瘤和恶性间皮瘤等[3]。转移性癌，主要以乳腺癌、肺癌、肠癌等常见。查找胸腔积液中的癌细胞，对肿瘤防治、预后有着重要的临床价值。临床方面多采取体液细胞学中离心涂片方法处理，这种处理方式容易产生收集细胞少和假阴性情况。蛋白质多聚集在细胞的四周，进而会直接对免疫组化试剂进到细胞的效果构成不良影响，无法满足临床实际需求[4-5]。细胞块技术的主要原理为离心操作，可将细胞浓缩后形成沉淀物。然后，实行固定、脱水、包埋和切片、染色等处理。细胞块能连续切片，保存时间较长，所以比较利于观察，可提高浆膜腔积液诊断率。免疫组化技术，主要利用免疫学抗原抗体特异度结合原理，经化学反应对抗体显色剂显色，从而能明确组织内抗原的情况。免疫组化技术，对于浆膜腔积液转移性癌、增生间皮细胞进行诊断，可达到较好的诊断效果[6]。细胞块诊断的过程中，通过免疫组化标记，以确保细胞检查结果的准确度。其中CK7为相对分子质量细胞角蛋白，一般多在上皮、尿路上皮细胞标记中应用。TTF-1，属于核转录蛋白NKx2，可对肺部、甲状腺上皮细胞、胚胎大脑区域表达。相关研究人员认为，TTF-1于肺腺癌敏感度、特异度均比较高，将其作为肺腺癌特异度的标志，便于判定转移性腺癌细胞、间皮源性细胞。E-cadherin，为相对分子钙黏附蛋白，介导细胞间黏附效果较佳，通过在机体上皮组织表达，降低肿瘤细胞间黏附性，一般多在肿瘤浸润诊断中应用。CEA为胚胎性癌抗原，多出现在胎儿消化道上皮组织、胰腺、肝脏位置，为上皮性肿瘤的标志。Calretinin常处于神经组织，可对间皮瘤、反应性间皮细胞进行诊断。总而言之，细胞块联合免疫组化技术，能够有效鉴别并解决胸腔积液，具有重要的临床价值。