CXCR-2和MMP-9在非小细胞肺癌癌组织中的表达水平及其与肺癌侵袭转移的相关性

曾媛媛，刘 哲，雷 舒，李 敏

相关数据显示，全球新发肺癌病例明显增加，多数新发病例在城市人口[1]，其中非小细胞型肺癌（NSCLC）约占所有肺癌的80%。目前，对于诱导NSCLC产生机制及NSCLC与炎症之间关系的研究较少见[2]。最近有学者提出，免疫相关的细胞因子及与其相关的调节因子涉及NSCLC发生、发展、转移及预后等各个方面[3]。本研究拟通过对NSCLC组织与癌旁正常肺组织的临床病理特征进行回顾性分析，比较二者间CXCR-2和MMP-9的表达水平差异，探讨CXCR-2和MMP-9与肺癌侵袭转移的相关性，为NSCLC的发病机理研究和临床诊治提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2012年3月～2014年9月医院手术切除的73例NSCLC组织、48例癌旁正常肺组织标本，均经病理、组织学检查确诊，所有病例的病理、临床、随访资料均完整；入选病例随访时间截止于2017年9月或者患者死亡。NSCLC组中，患者男 46 例，女 27 例；年龄 26～76（59.3±10.1）岁；肿瘤长径≥3.0 cm 44例，肿瘤长径＜3.0 cm 29例；有淋巴结转移27例，无淋巴结转移者46例；高-中分化47例，低-未分化26例。癌旁正常肺组织均距离肿瘤边缘＞5 cm，经病理检查证实无肿瘤细胞浸润；患者年龄 25～76（59.27±10.08）岁。

1.2 试剂 CXCR-2检测用兔抗人CXCR4单克隆抗体、MMP-9检测用免疫人多克隆抗体MMP-9均购自于北京博奥生物公司；即用型 SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 标本制备[4]组织标本经石蜡包埋，4 μm厚连续切片，56℃烘烤 48 h后取出，37℃烤箱过夜，行免疫组化学染色。免疫人多克隆抗体MMP-9工作浓度为 1∶25，兔抗人CXCR-2多克隆抗体工作浓度为 1∶25，封闭时用正常羊血清，工作浓度为 1∶20。染色标本在光学显微镜高倍镜(400倍)下观察，胞质或胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。染色成功后，任意选择5个高倍镜视野，每个高倍视野下计数100个细胞。根据阳性细胞所占比例分别记分：无阳性细胞记为0分；阳性细胞所占比例＜30.0%记为1分；阳性细胞所占比例≥30.0%记为2分。另根据阳性细胞表达强弱分别记分：未出现着色记为0分；浅黄色或者黄色记为1分；棕黄色记为2分；棕褐色记为3分。将两项的记分进行相乘，0～1分为阴性；2～6分为阳性记。

1.4 统计学方法 应用SPSS18.0软件分析，计量资料以均数±标准差表示，采用t检验；计数资料以例和构成比表示，采用χ2检验；相关性分析采用Pearson法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组CXCR-2和MMP-9阳性表达比较CXCR-2和MMP-9主要定位于NSCLC细胞的胞质中，呈浅黄色至棕黄色颗粒（图1、2）；NSCLC组织CXCR-2和MMP-9阳性表达率明显高于癌旁正常肺组织（P＜0.05，表 1）。

表1 两组CXCR-2和MMP-9阳性表达比较［n(%）］

图1 癌旁正常肺组织

2.2 NSCLC组织CXCR-2和MMP-9表达与临床病理因素的关系 在随访过程中，73例NSCLC患者中，有46例（63.01%）未出现淋巴结转移，27例出现淋巴结转移，在出现淋巴结转移患者中，24例（88.89%）CXCR2表达阳性，25例 （92.59%）MMP-9表达阳性。肿瘤分期高和出现淋巴结转移患者的NSCLC组织中，CXCR-2和MMP-9的阳性表达率显著上升（P＜0.05），见表 2。

2.3 CXCR-2和MMP-9表达与NSCLC侵袭转移的相关性分析 根据相关性结果显示，CXCR-2和MMP-9的阳性表达率与NSCLC患者淋巴结转移发生率均呈正相关（r=0.437、0.348，P＜0.01）。

3 讨论

近年来，肺癌发病率呈上升趋势，且发病逐渐趋于年轻化[5]。虽然临床上予以外科手术及联合药物治疗取得了一定的疗效，但是，患者的预后生存率仍然很低，尤其对于已经发生远处转移以及不能切除的肺癌患者的治疗仍然十分困难[6]。据报道，NSCLC约占所有肺癌的80%，绝大部分患者确诊时已经到了癌症中晚期，5年生存率很低[7]。文献报道[8]，CXCR-2是肿瘤细胞常见的趋化因子受体，在肿瘤的相关转移过程中起着尤为关键的生物学作用，在肿瘤中的阳性表达率均较高；基质金属蛋白(MMPs)可以降解机体组织细胞外基底膜以及基质，从而对肿瘤细胞的侵袭和转移起促进作用，MMP9属于MMPs家族，肿瘤中MMP 9表达较高，则肿瘤的浸润性和转移性强[8-9]。本研究结果发现，NSCLC组织CXCR-2阳性和MMP-9阳性表达率均明显高于癌旁正常组织，与上述结论相似，这可能与淋巴结转移有关，由此推测，CXCR-2和MMP-9表达与NSCLC患者淋巴结转移等临床病理特征存在着一定的关系。

表2 NSCLC组织中CXCR -2和MMP-9与临床病理因素的关系(n=73）

既往有研究表明[10]，炎症因子的异常表达会提高同源细胞的致癌潜能，也会提高癌细胞的转移能力。梁乃超等[11]研究发现，CXCR-2和MMP-9水平被抑制后，可以抑制癌细胞的生成和转移，同时降低癌细胞的侵袭转移能力。本研究结果也发现，CXCR-2和MMP-9高阳性表达患者的临床分期更晚，浸润深度更深，更容易出现淋巴结转移，且本组数据还显示：CXCR-2和MMP-9的阳性表达率与NSCLC患者淋巴结转移发生率均呈正相关（P＜0.05），与杨大运等[12]研究报道一致。分析原因可能是[12]：CXCR-2和MMP-9的高水平表达常合并有异常基因的存在，而相关异常基因的存在可一定程度上加快癌细胞的生长，促使其对脉管等进一步产生侵犯，从而随着血液出现远处转移，增加了肿瘤的侵袭行为。

综上所述，NSCLC组织中CXCR-2和MMP-9均呈高水平表达，且与肿瘤分期及淋巴结转移关系密切，二者联合检测对评估NSCLC侵袭转移和预后具有指导意义。但本组研究所选样本量较小，且未研究CXCR-2和MMP-9是否受其他因素的影响，因此，有待进一步深入研究证实。