气相色谱—质谱联用法测定水产制品、干制水产品中的N—二甲基亚硝胺

摘 要：结合日常检测的需要，建立了一种适用于水产制品、干制水产品中N-二甲基亚硝胺含量测定的气相色谱-质谱联用选择离子方式扫描的检测方法。在0.02-0.5μg/mL范围内，线性相关系数为0.9997，加标回收率为87.7%，重现性良好，相对标准偏差小于10%，检出限为1.0μg/kg。

关键词：气相色谱-质谱联用 N-二甲基亚硝胺 选择性离子监测

N-二甲基亚硝胺分子式为C2H6N2O或（CH3）2NNO，属于高毒化合物，于环境中广泛存在，2017年10月27日世界卫生组织将其列为2A类致癌物，《GB2762-2017食品中污染物限量》也对食品中N-二甲基亚硝胺的最大允许含量做出新的修定，其中水产制品、干制水产品的限量为4.0μg/kg，本文方法采用二氯甲烷做溶剂提取，通过固相萃取小柱对提取液进行净化，经气相色谱分离，用电子轰击电离模式对N-二甲基亚硝胺进行定性、定量检测。

1.材料与方法

1.1仪器与试剂

1.1.1主要仪器。气相色谱-质谱联用仪（GC/MS），Agilent GC7890A/MS5975C，美国安捷伦科技有限公司固相萃取装置，Win-SPE 12，北京莱伯泰科仪器有限公司电子天平，FA2004，感量0.1mg，上海上平仪器有限公司高速冷冻离心机，CT14RDⅡ，天美（中国）科学仪器有限公司超声波清洗机，上海科导超声仪器有限公司匀浆机，D-500，DVB

1.1.2试剂。标准品：N-二甲基亚硝胺（100μg/mL），Accustandard.Inc.；二氯甲烷：色谱纯，天津市光复精细化工研究所；氯化钠、无水硫酸钠：优级纯，天津市光复精细化工研究所；硫酸：分析纯，天津市科密欧化学有限公司；固相萃取柱：参考美国EPPA Method 521，选用活性炭小柱（CNW，2g/6mL，ANPEL）

1.2试驗方法

1.2.1样品制备。将样品粉碎均匀，准确称取20g（精确至0.0001g），置于50mL离心管中，加入30mL二氯甲烷和5g氯化钠，匀浆1min，超声提取20min，低温条件下5000r/min离心10min，吸取有机相溶剂层；以20mL二氯甲烷重复提取2次，合并3次萃取液；加入2mL硫酸（1+3体积比），振摇3min，低温条件下5000r/min离心10min，移取有机相澄清液，加入适量无水硫酸钠脱水后，转移至150mL鸡心瓶中，于40℃水浴中旋转蒸发至约2mL，待净化。

1.2.2样品净化。用6mL二氯甲烷活化固相萃取柱，弃去流出液；将待净化液加入SPE小柱，收集流出液，并用6mL二氯甲烷洗脱，收集流出液，合并两次流出液，于35℃下氮吹至近干，用1.0mL二氯甲烷复溶，过0.22μm有机膜，备用。

1.2.3色谱条件。色谱柱：参考GB 5009.26-2016[3]，色谱柱选取DB-INNOV WAX，30m×0.25mm×0.25μm进样口温度：250℃；载气：He（纯度>99.999%）流速1.0mL/min；隔垫吹扫流量：3mL/min；不分流进样；进样：自动进样，进样量1μL；

升温程序：起始温度40℃，以10℃/min升温至80℃，再以1℃/min升温至100℃，再以20℃/min升温至240℃，保持3min。

1.2.4质谱条件。电离方式：电子轰击（EI）离子源；电子能量：70eV；离子源温度：230℃； 四极杆温度：150℃；接口温度：240℃；溶剂延迟：4min；SIM采集模式，定性离子15、42、43、74，定量离子74。

1.2.5 标准溶液制备 ：将浓度为1.0mg/mL的N-二甲基亚硝胺标准溶液用二氯甲烷稀释为10μg/mL的标准储备液，然后将标准储备液逐级稀释配制标准工作溶液：0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL，进样量1μL。

2 结果与分析

2.1定性定量

在1.2的色谱和质谱条件下，N-二甲基亚硝胺的保留时间为5.817min（图-1），sim扫描质谱图（图-2）与NIST谱库中检索的N-二甲基亚硝胺质谱图（图-3）相似度较高。选取特征离子74为定量离子，外标法定量。

2.2 线性关系及检出限

以标准品浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。曲线方程Y=122081X-769.01，R2=0.9997。最低检出浓度为1.0μg/kg。

2.3回收率及精密度

于20.0g冻虾空白样品中添加0.2μg N-二甲基亚硝胺做加标回收，重复6次（87.7%、90.4%、86.1%、89.3%、87.1%、85.6%），平均回收率为87.7%，相对标准偏差为2.1%，能够满足检测要求。

3 结论

本文方法直接采用有机相提取被测物，通过固相萃取净化，使样品前处理快捷简便，易于操作，定性定量方法和检出限能够满足GB2762对水产制品、干制水产品中N-二甲基亚硝胺的限量的要求。

参考文献：

[1] 世界卫生组织国际癌症研究机构致癌物质清单

[2] US Environmental Protection Agency （2004） Method 521 .Determination of nitrosamines in drinking water by solid phase extraction and capillary column gas chromatography with large volume injection and chemical ionization tandem mass spectrometry（MS/MS），EPA/600/R-05/054，Cincinnati，USA

[3] GB 5009.26-2016 食品安全国家标准 食品中N-亚硝胺类化合物的测定

作者简介：王柏兴，男，1980年，汉，天津，本科，助理工程师，食品检测、轻化工程。