基于三联吡啶钌的毛细管电泳电化学发光联用技术及其在药物分析中的应用

孙双姣,粟 雯,陈志良

(邵阳学院 药学院，湖南 邵阳,422000)

在CE-ECL检测中，目前报道的电化学发光检测模式为：

目前，我国已商品化的CE-ECL实验装置主要为西安瑞迈分析仪器有限公司、中科院长春应用化学研究所自主研制开发的MPI-A型与MPI-B型CE-ECL检测仪。该仪器由数控毛细管电泳高压电源、数控电化学恒电位仪、多通道数据采集分析仪、多功能化学发光检测仪四部分组成。电化学发光强度的输出信号由计算机记录并放大。电极为三电极体系，包括铂盘工作电极、Pt丝辅助电极和Ag/AgCl参比电极(饱和KCl)。

CE-ECL具有选择好、灵敏度高，线性范围宽、分析速度快等特点，近十多年，该项技术在生化分析、环境分析、食品检测及药物分析等方面得到了广泛的应用[15]，药物分析是这几年研究的热点，得到了迅速的发展。

近年来，心血管患者越来越多，该病是导致中老年患者突发性死亡的重要原因之一，因此有必要建立快速、高效测定心血管药物的分析手段。异丙吡胺为广谱抗心律失常药，主要用于室性早搏及心动过速，尤其对伴有预激综合症的心动过速疗效较好。2005年，Kang[16]用CE-ECL测定了异丙吡胺。盐酸维拉帕米能选择性扩张冠状动脉，增加冠脉流量，能抑制房室传导和心肌兴奋，临床上用于治疗阵发性心动过速。梁汝萍等[17]用CE-ECL分离测定了药物和尿液中的盐酸维拉帕米的含量。利多卡因是一种麻醉剂，但也是目前防治急性心肌梗死以及各种心脏病和心律失常的常用药物，是急性心肌梗死的室性早搏，室性心动过速及室性震颤的首选药，李昕沛等[18]用星点设计-效应面法优化CE-ECL实验条件，测定了利多卡因药物制剂，分析了尿液样品。阿替洛尔、美托洛尔、艾司诺尔是β1阻滞剂，具有明显的降压和降心率的效果。Wang等[19]用CE-ECL测定了药物制剂及尿液中的阿替洛尔、美托洛尔、艾司诺尔。Xia等[20]通过优化分析条件，同时测定了阿普洛尔、普罗帕酮、醋丁洛尔、维拉帕米、阿替洛尔、美托洛尔六种心血管药物在尿液中的含量。Liu等[21]以聚乙烯比咯烷酮为添加剂，采取场放大样品堆积方法提高检测的灵敏度，同时测定了阿替洛尔、艾司诺尔、比索洛尔。Sun等[22]用毛细管电泳电化学发光同步测定了人血浆中盐酸喹那普利及其代产物喹普利拉。

CE-CEL由于分离效果好，灵敏度高而在生物碱分析中得到了较好的应用。粉防己碱主要存在于粉防己的根中，具有镇痛消炎的作用。Chen等[23]用CE-ECL测定了小鼠血浆中粉防己碱的含量。Du等[24]建立了测定小檗碱的CE-ECL法，用于黄连和片剂中小檗碱的测定。利血平是一种吲哚型生物碱，Cao等[25]用该法测定了人体尿液中的利血平。Liu等[26]对滴鼻液中麻黄碱和伪麻黄碱的含量进行了测定。Guo等[27]在7min内实现了山莨菪碱、樟柳碱的分离，以铕(Ⅲ)掺杂普鲁士蓝膜的铂电极为工作电极测定了山莨菪中这两种生物碱的含量。Zhou等[28]用该法测定了青风藤中的青藤碱含量。Gao等[29]以离子液辅助提取样品，用CE-ECL测定了贝母中贝母碱和浙贝乙素。Wang[30]等以PVP为分离缓冲溶液添加剂，测定了红花石蒜碱中加兰他敏和石蒜碱的含量。Xiang等[31]用1-丁基-3-咪唑四氟硼酸为添加剂，采取场放大进样量，用CE-ECL测定了槟榔中的槟榔碱。Yin等[32]用该法测定了苦参中的氧化苦参碱、槐定碱、苦参碱。Li等[33]以β-环糊精为添加剂，测定了洋金花中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱三种生物碱。Yuan等[34]以乙腈、丙胺、乙酸，醋酸钠和高氯酸四丁铵的混合液作电泳缓冲液，采取非水CE-ECL法分析了植物提取液中的阿托品、山莨菪碱和东莨菪碱。Sun[35]等以聚乙烯比咯烷酮为分离缓冲溶液添加剂，同步测定了红花石蒜中加兰他敏、多花水仙碱、石蒜伦碱和高石蒜碱。邓光辉等[36-38]测定了博落回果实中血根碱和白屈菜红碱的含量，金钗石斛中石斛碱的含量以及荷叶中荷叶碱与莲子心中莲心碱的含量。

药物进入血液后，一部分与血浆蛋白呈可逆的结合状态存在，一部分以游离的分子存在。游离药物分子通过血液循环进入作用部位发挥药理作用。当游离药物进入组织或被清除后，部分结合药物与血浆蛋白解离而弥补游离药物。药物的这种可逆性结合不仅影响其代谢动力学、作用时间与强度,而且往往与药物的作用机制、药物相互作用等密切相关,故研究药物与蛋白质的结合具有重要意义。Zhao等[39]最早用CE-ECL与透析平衡结合，研究了药物与蛋白质的相互作用，考察了通过毛细管区带电泳分离的二苯哌丙醇、普环啶及苯海索与人血清白蛋白单独结合和共同结合情况，发现三个抗帕金森病的药物在HSA争夺相同的结合位点。该项工作表明，CE-ECL不失为一种好的研究药物与蛋白质结合的分析方法。盐酸地芬尼多片可防治疾病或其他原因引起的眩晕、恶心、呕吐，Wen等[40]用CE-ECL对盐酸地芬尼多、枸缘酸氯米芬和利多卡因进行了分离测定，研究了盐酸地芬尼多与血红蛋白的结合，并得出了结合位点数和结合常数。Yan等[41]用CE-ECL分离测定了磷酸氯喹，盐酸地芬尼多和柠檬酸，研究了磷酸氯喹和人血清白蛋白的结合位点数和结合常数。周玲玲[42]利用CE-ECL研究了丙吡胺和人血浆蛋白的结合作用，得出丙吡胺与人血浆蛋白的结合率约为90.4%。Deng等[43]将超声微量透析与CE-ECL结合，研究了盐酸地尔硫卓和人血清白蛋白的相互作用，得出了二者的结合位点数和结合常数。Sun等[44]自制简易透析装置，将透析平衡和结合平衡进行简化,用CE-ECL研究了盐酸曲美他嗪与人血清白蛋白的相互作用。Zeng等[45]对盐酸托莫西汀进行了CE-ECL测定，并用该法研究了该药与牛血清白蛋白、细胞色素C以及肌红蛋白的相互作用。Duan等[46]用CE-ECL法测定了尿液中酒石酸美托洛尔、富马酸比索洛尔含量，并同时研究了两种药物与人血清白蛋白的相互作用。

药代动力学对药物研究开发、临床合理用药具有很好的指导作用，在药学领域具有重要的意义。CE-ECL在药物代谢动力学中的研究不多，主要为Deng实验室开展的研究工作，该实验室用CE-ECL测定了甲磺酸培氟沙星[47]、培氟沙星[48]、盐酸普萘洛尔[49]在健康成人尿液中的药代动力学，同时还研究了盐酸乌拉地尔在大鼠血浆中的药代动力学[50]及四环素[51]在鲫鱼肉中的药代动力学[52]。同时，Ming等[53]用CE-ECL分析测定了诺氟沙星和左氧氟沙星在尿液中的浓度，并同时研究了二者在2位成年健康人尿液中的药代动力学。

4)在药物分析、生化分析中的进一步运用。由于CE-ECL的高灵敏，高选择和可实现在线检测等特点，CE-ECL在药物和生物分析中的作用将更加突显。

5)CE-ECL技术新应用。由于CE-ECL技术在众多领域的应用所带来的潜在价值,已引起了人们的广泛关注，可能开发出新的应用领域。

6)高通量CE-ECL分析体系的研究与开发。该技术的研究与开发将更一步提高分析效率，拓宽其应用范围。