护肝片对慢性酒精性肝损伤模型大鼠的影响

彭晓云 赵林涛 王 磊 曲天歌 关彦玲 曲文华 曲韵智#

1 葵花药业集团北京药物研究院有限公司 北京 101100 2 陕西省中医药研究院药理室 陕西 西安 710003 3 陕西中医药大学药学院 陕西 咸阳 712046 4 北京中医药大学 北京 100029 5 黑龙江葵花药业股份有限公司 黑龙江 哈尔滨 150036

酒精中毒和酒精滥用对人类健康的危害成为日益严重的社会问题，长期大量饮酒可导致人各种器官的损伤，尤其以肝受损最为严重。酒精性肝损伤，根据病理学和临床分型，可分为酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化等，其发生的原因主要是由于酒精对肝脏的毒性作用。酒精性肝病是西方发达国家肝硬化的主要病因（占80%～90%），也是青壮年死亡的主要原因[1]。护肝片主要由柴胡、茵陈、板蓝根、五味子、猪胆粉和绿豆组成，能够疏肝理气、健脾消食，具有降低转氨酶的作用,用于脂肪肝[2]、慢性肝炎及早期肝硬化等。本研究观察护肝片对肝脏组织结构及功能的影响，为其防治酒精性肝损伤提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物：雌性SD大鼠，体重180～220g，由西安交大医学院实验动物中心提供，动物合格证号：610017000001469，许可证号：SCXK(陕)2012-003。

1.2 药物：护肝片，黑龙江葵花药业股份有限公司生产；硫普罗宁肠溶片，河南省新谊药业有限公司生产；复方甘草酸苷片，乐普药业股份有限公司生产。

1.3 试剂与仪器：60度红星二锅头，北京红星股份有限公司生产；丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、谷氨酸脱氢酶(GLDH)、血清糖缺乏转铁蛋白（CDT）、甘油三酯(TG)、总胆固醇（T-CHO）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）测试盒由南京建成生物工程研究所提供；722N型分光光度计（上海元析仪器有限公司）、iMark型酶标仪，日本生产。

1.4 模型的制备、试验分组及给药：将110只雌性SD大鼠随机分为空白组和造模组2组，空白组15只，其余95只按如下方法造模。参考文献[3-5]，空白组以水灌胃并喂正常全价饲料，模型组从低浓度酒精10%（体积分数）开始,每天1次，1.5ml/100g，逐日递增3%～4%,到浓度为60%时，减少灌胃体积为1.0ml/100g，同时以10%酒精饮料（用二锅头与纯净水配制）为饮用水，连续8周以上。从第4周开始抽查，空白组和造模组均进行抽样，造模组多于空白组，进行病理检测，直到观察到酒精诱发大鼠肝炎形成后进行实验分组。空白对照组和模型组各12只，每天灌胃给予纯净水；给药组各11只，硫普罗宁肠溶片组给药量0.05g/kg，复方甘草酸苷片组给药量0.06g/kg，护肝片大、中、小剂量组给药剂量分别为0.8g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg，以上各组每日给药1次,每周给药7天，共4周。由于肝损伤模型大鼠自我修复能力强，在给药期间模型组与给药组继续造模。

1.5 取材与检测：大鼠处理前禁食不禁水12h；用水合氯醛麻醉，颈总静动脉取血测血液生化指标；解剖取大鼠肝脏，部分肝组织测组织生化指标含量；剩下的肝组织固定，做病理切片，采用HE染色。

表1 对大鼠血清AST、ALT的影响（±s，U/L）

表1 对大鼠血清AST、ALT的影响（±s，U/L）

注：与空白组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别空白组模型组硫普罗宁肠溶片复方甘草酸苷片护肝片大剂量护肝片中剂量护肝片小剂量剂量（g/k g）--0.0 5 0.0 6 0.8 0 0.4 0 0.2 0只数1 2 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 A S T 5 6.8 6±1 9.0 1 9 2.2 6±2 7.1 4△△6 0.5 6±8.7 1**6 2.4 2±1 0.6 6**5 8.6 9±1 7.1 4**6 1.8 1±1 4.9 5**7 0.3 0±1 3.0 3*A L T 5 1.3 8±5.6 7 8 0.4 8±2 1.9 3△△5 5.4 3±8.8 6**5 7.0 1±9.9 6**5 3.5 8±1 5.5 0**5 6.4 6±6.1 7**6 3.4 8±1 2.0 2*

1.6 统计学方法：采用SPSS16.0软件进行统计学处理，各组实验动物数据采用±s表示，组间采用方差分析，各指标间比较采用t检验，各组均与模型组比较P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对大鼠血清生化指标的影响：由表1、表2可见，模型组大鼠血清AST、ALT、GLDH、CDT、GGT含量明显高于空白组（P＜0.01）；各给药组大鼠血清AST、ALT含量明显低于模型组（P＜0.01或P＜0.05），硫普罗宁肠溶片组复方甘草酸苷组及护肝片大、中剂量组大鼠血清GLDH CDT、GGT含量明显低于模型组（P＜0.01或P＜0.05），小剂量护肝片组大鼠肝功能指标CDT、GGT也明显低于模型组（P＜0.01）。

表2 对大鼠血清GLDH、T-BIL、CDT的影响（±s）

表2 对大鼠血清GLDH、T-BIL、CDT的影响（±s）

注：与空白组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别空白组模型组硫普罗宁肠溶片复方甘草酸苷片护肝片大剂量组护肝片中剂量组护肝片小剂量组剂量（g/kg）- -0.05 0.06 0.80 0.40 0.20动物数（只）12 10 11 11 11 11 11 GLDH（U/mL）299.31±62.16 396.23±62.36△△322.53±69.10*335.29±49.63*320.13±45.56**334.74±58.16*351.12±61.92 CDT（mg/L）17.21±5.87 44.46±9.08△△28.69±7.83**35.17±7.86*26.60±8.94**30.32±9.02**30.11±6.08**GGT（U/L）40.72±7.97 81.84±7.51△△47.21±5.65**48.41±9.58**46.72±5.14**48.73±6.56**53.51±9.16**

2.2 对大鼠肝组织生化指标的影响：由表3、表4可见，模型组大鼠肝组织中TG、T-CHO、MDA含量明显高于空白组（P＜0.01），SOD、GSH含量明显低于空白组（P＜0.01）；各给药组大鼠肝组织TG、T-CHO、MDA含量明显低于模型组（P＜0.01或P＜0.05），GSH含量明显高于模型组（P＜0.01或P＜0.05），除了小剂量组，各给药组的SOD含量也明显高于模型组（P＜0.01）。

2.3 对肝病理组织的影响：HE染色镜下空白组：肝组织结构正常，无炎症和脂滴；模型组：大部分动物可见肝细胞有散在脂滴并伴随局灶性炎细胞浸润；给药组：普遍可见肝细胞有极少量脂肪变性。

表3 大鼠肝组织中TG、T-CHO含量（±s，mmol/gprot）

表3 大鼠肝组织中TG、T-CHO含量（±s，mmol/gprot）

注：与空白组比较，△△P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

组别空白组模型组硫普罗宁肠溶片复方甘草酸苷片护肝片大剂量护肝片中剂量护肝片小剂量剂量（g/k g）--0.0 5 0.0 6 0.8 0 0.4 0 0.2 0只数1 2 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 T G 1.0 0±0.1 6 1.3 0±0.1 9△△1.0 6±0.1 2**1.0 8±0.1 2**1.0 5±0.1 4**1.0 7±0.1 1**1.1 2±0.1 3*T-C H O 1.5 8±0.1 7 2.6 6±0.2 0△△1.6 5±0.2 1**1.6 9±0.1 9**1.6 2±0.2 0**1.6 5±0.2 8**2.0 9±0.3 3**

表4 对大鼠肝组织SOD、GSH、MDA的影响（±s）

表4 对大鼠肝组织SOD、GSH、MDA的影响（±s）

注：与空白组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别空白组模型组硫普罗宁肠溶片复方甘草酸苷片护肝片大剂量护肝片中剂量护肝片小剂量剂量（g/k g）- -0.0 5 0.0 6 0.8 0 0.4 0 0.2 0动物数（只）1 2 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 S O D（U/m g p r o t）1 1 8.2 8±1 1.8 9 9 6.5 2± 7.2 4△△1 0 9.0 7±1 1.0 6**1 0 7.4 2±7.1 5**1 1 0.2 6±1 0.6 8**1 0 8.5 0±1 0.9 9**1 0 3.6 0±1 5.0 5 G S H（m g/g p r o t）5.8 5±0.6 4 4.0 2±0.6 7△△5.0 5±0.3 8**4.9 7±0.7 1**5.4 5±0.4 1**5.0 7±0.7 5**4.8 8±0.7 9*M D A（n m o l/g p r o t）2.3 5±0.3 6 3.7 3±0.6 5△△2.5 4±0.4 0**2.5 7±0.6 7**2.5 5±0.3 9**2.5 6±0.3 9**3.0 1±0.3 6**

3 讨论

人体摄入酒精后主要在肝脏代谢，长期大量饮酒会引起酒精性肝损伤，其损伤机制与乙醇及其代谢产物对肝细胞的氧化损伤或降低机体抗氧化水平有关[6-7]。本研究结果说明，护肝片能够有效地对抗慢性酒精性肝损伤模型大鼠的肝损伤程度，其作用机理可能通过增强模型大鼠肝组织中SOD、GSH活性，抑制MDA的产生，从而保护细胞器和酶的结构功能，减少活性氧自由基的数量，提高肝细胞抗氧化能力，保护肝细胞正常的通透性，保护肝细胞的结构和功能，进而发挥保护肝脏的作用。另外，护肝片可明显降低CDT的含量，也为本品对抗肝组织损伤的机理之一。