手足口病患儿免疫功能变化与疾病进展关系

常洁 张瑜 宋浩斌 丑广程 韩立坡 董青伟 张娣 马蕾

手足口病（HFMD）常见致病病毒包括肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇A组16型（CoxA16）等，患儿临床表现以发热伴手、足、口等部位皮疹为主，严重者可继发心肌炎、神经源性肺水肿、无菌性脑膜炎，威胁生命[1]。最新研究发现，病毒引发的中枢神经系统炎症介质大量聚集，是影响患儿预后质量的主要原因[2]，而炎症反应往往伴随着机体免疫功能的变化，因此，进一步了解HFMD患儿免疫功能变化与疾病进展的关系，有望为临床病情评估、预后预测及治疗对策的制定提供参考依据。为证实这一假设，本研究选取106例HFMD患儿及40名健康体检儿童进行了对照分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究方案征得我院医学伦理委员会批准，纳入标准：1）研究对象为2014年3月至2017年8月，参照《手足口病诊疗指南（2010年版）》[3]明确诊断的患儿；2）血清学、脑脊液或咽拭子EV71型核酸检测阳性；3）近期无免疫增强或抑制药物使用史，无结核等其他影响免疫功能的疾病；4）患儿轻型组、重型组分组标准参照文献[4]。轻型组59例，其中男31例，女28例，年龄2～7岁，平均（4.27±1.33）岁；重型组47例，其中男25例，女22例，年龄2～8岁，平均（4.18±1.10）岁；对照组来自同期40名健康体检儿童，男20名，女20名，年龄2～8岁，平均（4.31±0.99）岁。3组受试儿童性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＜0.05），具有可比性。受试儿童监护人均签署知情同意书。

1.2 检测方法

抽取外周血2 mL，取50 μL混匀全血标本与相应的荧光标记单克隆抗体10 μL混匀，室温条件下避光孵育15 min，加入250 μL溶血素，振荡混匀，37℃水浴15 min；加入250 μL PBS缓冲液，振荡混匀，37℃水浴15 min；加入1 mL PBS缓冲液，振荡混匀，以1800 r/min离心5 min，弃上清，加入250 μL PBS缓冲液，振荡混匀后使用FACS Calibur型流式细胞仪（美国BD公司）对其T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群进行检测[5]。此外，使用酶联免疫吸附法[6]测定受试儿童血清免疫球蛋白（Ig）及补体C3、C4。

1.3 统计学分析

对本临床研究的所有数据采用SPSS 20.0进行分析，对比3组T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群及Ig、补体指标（x±s）表示， t检验，影响患儿预后因素分析采用多因素Cox风险模型，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组受试儿童T淋巴细胞亚群表达水平

对照组、轻型组、重型组外周血CD3+逐渐升高，其CD4+、CD8+、CD4+/CD8+逐渐下降，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 3组受试儿童B淋巴细胞亚群及Ig、补体表达水平

对照组、轻型组、重型组外周血CD19+、IgA、IgM、IgG逐渐升高，其补体C3、C4逐渐下降，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 3组受试儿童T淋巴细胞亚群表达水平比较（x±s）

表2 3组受试儿童B淋巴细胞亚群及Ig、补体表达水平比较（x±s）

2.3 预后转归

106例HFMD患儿中，共有5例病死，病死率为4.72%，均为重型患儿。多因素Cox风险模型示，随着C、、IgA、IgM、IgG的升高，以及CD+、CD+、CD+/484CD8+和补体C3、C4的下降，HFMD患儿病死率有所上升（P＜0.05）。见表3。

表3 影响HFMD患儿病死率的多因素Cox模型分析（n/%）

3 讨论

HFMD是全球性传染病[7]。多数患儿经常规治疗后病情可得到有效控制，但也有部分患儿病情严重，病程进展较快且病死率较高[8]，加之近年来HFMD尤其是重型HFMD发生率的升高，越来越多的研究开始关注HFMD病情评估与预后预测标志物的探索[9]。

既往研究认为，病毒直接损害是引发脑干脑炎、肺水肿等严重并发症并导致HFMD患儿死亡的主要原因[10]。白细胞介素-6（IL-6）、干扰素-γ（IFN-γ）等炎症介质在中枢神经系统的大量释放，是造成轻型HFMD向重型阶段进展的重要原因之一[11]。

鉴于炎症反应与免疫功能的密切关联，有理由认为HFMD患儿疾病进展过程中可能伴随着免疫功能的显著变化，为此，本研究就HFMD患儿体液免疫、细胞免疫功能与病情及转归的关联进行了分析，发现较健康儿童，轻型HFMD患儿已发生体液免疫亢进、细胞免疫抑制状态，且随着病情的进展，上述病理生理改变进一步加剧。与此同时，多因素Cox模型亦印证了免疫功能变化对患儿预后质量的显著影响。

B淋巴细胞亚群与体液免疫功能有关，活化的B淋巴细胞能够作为抗原递呈细胞向T淋巴细胞递呈抗原，活化Th2细胞通过其分泌的细胞因子激活B淋巴细胞，进而产生IgA、IgM、IgG等特异性抗体以介导体液免疫[15]，其中，IgA主要在粘膜局部发挥抗病毒和局部免疫作用，能够阻止病毒在粘膜部位的吸附和增殖；IgM在机体早期防御中扮演着重要角色；IgG与体液免疫中毒素与病毒的中和有关[16]。同时，HFMD患儿补体C3、C4表达水平下降，考虑与补体参与特异性、非特异性免疫应答后大量消耗有关[17]。因此，随着疾病的进展，HFMD患儿体液免疫亢进逐渐加剧，此时抗原-抗体复合物大量形成并诱发多种炎症因子释放，可能是影响其预后质量的主要原因[18]。

综上所述，HFMD患儿免疫功能变化特点包括T淋巴细胞亚型比例失衡以及B淋巴细胞过度激活，即细胞免疫抑制与体液免疫亢进，且这一变化随着患儿病情进展而加剧，是影响患儿预后质量的重要原因。