大蒜提取液对蚕豆根尖微核率的影响

秦永燕

(长治学院 生物科学与技术系，山西 长治 046011)

0 引言

蚕豆根尖细胞微核技术是以蚕豆为材料，采用细胞生物学手段，利用细胞微核率来表示材料受损伤程度的一种监测遗传毒物的方法.微核(micronucleus，MCN)是指位于细胞质中独立于主核、直径为主核1/3～1/20、完全与主核分开的圆形或椭圆形的微小核[1].微核形成频率可反映细胞遗传物质损伤程度，而遗传物质损伤又是机体癌变的原因之一[2].

大蒜(AlliurnsativumL．)多年生草本，百合科葱属，其提取液具有抑菌、保鲜、增强机体免疫力、抗癌变等作用.目前，利用蚕豆根尖微核试验研究大蒜提取液对环磷酰胺诱导蚕豆根尖微核的影响还未见报道.因此，本文利用蚕豆根尖的微核实验，通过对阳性对照组、阴性对照组和不同浓度梯度的提取液实验组进行微核统计，计算并比较微核千分率，探讨大蒜提取液对蚕豆根尖细胞微核的抑制作用，为大蒜的进一步研究提供一定的科学依据.

1 材料和方法

大蒜，白皮大蒜，购于山西省长治市博源超市.

蚕豆(松滋青皮豆)，购于长治市种子公司.

环磷酰胺溶液(山西普德药业有限公司)：用蒸馏水与环磷酰胺固体配制0.1g/L环磷酰胺溶液，置于冰箱备用.

2 研究方法

2.1 大蒜提取液的制备

1)生食大蒜液的提取 称取10 g去皮大蒜，加入100 mL蒸馏水，三次匀浆，过滤，离心(8 000 r/min)，取上清，定容至100 mL，使终浓度为0.1 g/mL，置于4℃保存备用.

2)熟食大蒜液的提取 称取10 g去皮大蒜，加入100 mL蒸馏水，煮熟，匀浆，过滤，离心(8 000 r/min)，取上清，定容至100 mL，使终浓度为0.1 g/mL，置于4℃保存备用.

2.2 蚕豆根尖细胞微核率的测定

将浓度为1.0 g/mL的大蒜提取液进行梯度稀释，分别与环磷酰胺溶液以1∶1体积混合，使提取液终浓度分别稀释至0.05，0.04，0.03，0.02，0.01，0.005 g/mL，环磷酰胺溶液稀释到5 mg/mL.以蒸馏水作阴性对照，5 mg/mL环磷酰胺作阳性对照处理蚕豆根尖.每个浓度至少检查5个根尖，每个根尖至少观察1 000个间期细胞，统计观察到的微核数，按下式计算各项参数：

3 实验结果分析

3.1 生食大蒜提取液对蚕豆根尖细胞的影响

生食大蒜提取液对蚕豆根尖细胞的影响见表1，由表1可知，生食大蒜提取液均不同程度使蚕豆根尖细胞产生微核，且微核率均大于阴性对照(0.3‰)，小于阳性对照(11.2‰)，当生食大蒜提取液浓度高于0.03 g/mL时，微核指数均高于1.5[3]，因此，一定浓度的大蒜提取液处理蚕豆根尖组织会诱导微核的产生，具有致突变作用.

表1 生食大蒜提取液对蚕豆根尖细胞微核的影响

3.2 生食大蒜和环磷酰胺联合作用对蚕豆根尖细胞的影响

生食大蒜与环磷酰胺对蚕豆根尖细胞微核率、微核指数和微核抑制率的影响见表2.由表2可知处理组生食大蒜提取液与环磷酰胺联合处理的蚕豆根尖微核率时，随着处理浓度的增加，微核率逐渐减少，当生食大蒜浓度为0.05 g/mL时，微核率最低，为2.1±0.05‰，微核抑制率达到81.1%.当生食大蒜提取液浓度高于0.01 g/mL时，微核指数均低于1.5，表明生食大蒜提取液有明显的抗突变作用.

表2 生食大蒜和环磷酰胺对蚕豆根尖细胞微核的影响

3.3 熟食大蒜和环磷酰胺联合作用对蚕豆根尖细胞的影响

熟食大蒜与环磷酰胺对蚕豆根尖细胞微核率、微核指数和微核抑制率的影响见表3.由表3可知，环磷酰胺浓度为5 mg/mL时，随着熟食大蒜浓度的增加，微核率在逐渐下降，微核抑制率逐渐上升，当熟食大蒜浓度为0.05 g/mL时，微核率为5.2±0.41‰，高于阴性对照组，微核抑制率为53.3%，但是处理组微核指数均大于1.5.

表3 熟食大蒜和环磷酰胺对蚕豆根尖细胞微核的影响

4 讨论

4.1 大蒜提取液对微核的抑制作用

生食大蒜提取液单独处理蚕豆根尖时，随着处理浓度的增加，微核率逐渐增大，当浓度高于为0.03 g/mL时，微核指数高于1.5，表明高浓度的大蒜提取液可诱导微核的产生，具有一定的致突作用.但是大蒜提取液和环磷酰胺联合处理蚕豆根尖时，随着处理浓度的增加，微核率逐渐减少，当浓度为0.05 g/mL时，微核率为2.1±0.44‰，低于阴性对照(3.0‰)，微核抑制率达到81.1%，表明大蒜提取液具有一定的抗突变作用.这与大蒜具有抗癌作用[4]基本一致.

4.2 比较生食与熟食大蒜的抗微核作用

本实验在模拟人们日常生活中生食和熟食两种不同的食用方法制得大蒜提取液，分别与环磷酰胺联合处理蚕豆根尖，结果表明，环磷酰胺浓度为5 mg/mL时，生食大蒜提取液和熟食大蒜提取液对蚕豆根尖细胞微核的抑制作用不同，当大蒜浓度为5 mg/mL时，生食大蒜的微核抑制率81.1%，而熟食大蒜的微核抑制率53.3%，微核指数为1.71，仍高于1.5.说明，生食大蒜的抗突变作用高于熟食大蒜.大蒜中含有钙、磷、铁、硒、锗等微量元素和、维生素C、硫胺素、核黄素、尼克酸等一些有机化合物质，另外还含有SOD酶等活性蛋白质，这些物质的含量与状态都可能对大蒜的抗癌作用产生影响.但是，在高温条件下，制取大蒜液可能使油性挥发物质大蒜素挥发散失[5]，同时会使蛋白质SOD酶变性而失活.有研究表明加热烹饪处理后的大蒜SOD损失70%以上[6]，因此，高温加热制取的大蒜提取液的抗微核效果明显比生食大蒜提取液效果差.在日常生活中，生食大蒜具有更好的保健价值.

4.3 过量食用大蒜的会产生危害

大蒜提取液处理蚕豆根尖的实验结果表明，浓度过高的大蒜提取液会诱导蚕豆根尖细胞微核的产生，且在实验浓度范围内大蒜提取液浓度越高其微核诱变率越高，所以可初步推测大蒜过量食用会对人体产生危害.传统上讲大蒜不可多食，食用过量的大蒜不仅没有保健作用，而且对人体有害，据研究发现，过量食用大蒜对眼睛和肠胃都有伤害[7].有研究表明，成人的安全大蒜泥剂量为12.5克/天(体重为50公斤的人)[8].