化胃舒颗粒对DNCB致小鼠迟发型超敏反应模型的影响

孟 莉 向绍杰 刘小虎 贾 冬 贾天柱

1.辽宁省中医药研究院，辽宁沈阳 110034；2.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600

化胃舒颗粒由人参、藿香、黄芪、甘草等中药组成，具有和胃降逆、益气养阴之功效，常用于治疗癌症患者使用化疗药物后因损伤脾胃造成的不良反应，如恶心、食欲不振、腹胀、呕吐等症[1-2]。研究表明，在肿瘤发生的同时也伴随着机体的免疫力低下，中药对肿瘤机体的免疫调节作用是较为重要的抗癌机理之一，机体的免疫系统具有限制肿瘤细胞生长的能力，通过生物反应调节改变宿主对肿瘤的生物反应[3-5]。因此在治疗肿瘤过程中，调动、增强机体的抗肿瘤免疫学机制在肿瘤的防治过程中占有重要的地位。本文旨在通过实验对化胃舒颗粒在调节机体免疫功能方面的作用进行研究，为进一步研究其作用机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 昆明种小鼠，SPF级，雄性，体重（20±2）g，购于辽宁长生生物技术有限公司，动物质量合格证号：SCXK（辽）2010-0001。

1.1.2 试验药物 化胃舒颗粒（辽宁省中医药研究院药学室，生产批号：112404），复方环磷酰胺片（天津金世制药有限公司，国药准字：H12021006，生产批号：2110501），复方天仙胶囊（通化白山药业股份有限公司，Z10880008，生产批号：1108011）。

1.1.3 试剂 2，4-二硝基氯苯（DNCB）（军事医学科学院药材供应站，批号：991223），丙酮（天津市百世化工有限公司，批号：20050405），小鼠CD4（CD4+）酶联免疫检测试剂盒（美国RD公司，批号：201210），小鼠 CD8（CD8+）酶联免疫检测试剂盒（美国RD公司，批号：201210）。

1.1.4 仪器 多功能酶标仪，ELx800 光吸收酶标仪，美国宝特（BIO-TEK）公司生产。YLS-Q4耳肿打耳器，山东省医学科学院生产；FA2004分析天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 动物分组和小鼠迟发型超敏反应模型的制作 取体重18～22g昆明种雄性小鼠84只，禁食不禁水17小时，随机分7组，分别为空白对照组，模型对照组、复方环磷酰胺片（环磷酰胺52mg/kg）组、复方天仙胶囊（0.58g/kg）组、化胃舒颗粒低（7.90g生药/kg）、中（15.80g生药/kg）、高（31.60g生药 /kg）组，每组12只。实验前1日，在小鼠背部去毛，面积约4cm2，实验当日除空白对照组外，其余各组小鼠于去毛区涂以7% DNCB液100μL致敏1次[6-9]，空白对照组涂以基质溶液（丙酮/大豆油=4：1)100μL。空白对照组和模型对照组等容积蒸馏水灌胃，各组每天给药1次，连续21d。给药第5天后，除空白对照组外，于其余各组小鼠右耳内侧涂1%DNCB丙酮液10μL激发，每隔3天激发1次，左耳涂抹等量基质，空白对照组左右耳均涂抹等量的基质。分别于第4次激发后72h处死小鼠。

1.2.2 耳重量差的测定 激发后72h，将小鼠离断颈椎处死，立即剪下双侧耳廓备检。在左右耳同一部位打孔迅速用天平称重，计算耳肿胀率。耳肿胀率（%）=（右耳重-左耳重）/左耳重×100%。

1.2.3 血液中CD4+和CD8+含量的测定 激发后72h将小鼠摘眼球取血，放置2h后，3000r离心5min，取上层血清，分别用酶标仪测定小鼠血清中CD4+和CD8+的含量，比较各组间小鼠血清中CD4+和CD8+的含量差异的显著性。

1.3 统计学处理

实验数据采用SPSS11.5软件进行统计学处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对小鼠迟发型超敏反应模型耳肿胀的影响

与空白对照组比较，模型对照组小鼠耳肿胀率明显高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01），说明造模成功；化胃舒颗粒高剂量组（31.60g生药/kg）小鼠耳肿胀率高于模型对照组，与模型对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 化胃舒颗粒对小鼠迟发型超敏反应模型耳肿胀的影响（x ± s，n=12）

2.2 对小鼠迟发型超敏反应模型CD4+、CD8+含量的影响

造模后各给药组小鼠血清中CD4+含量均高于空白对照组和模型对照组，各给药组小鼠血清中CD4+含量，与空白对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.01）。化胃舒颗粒中剂量组（15.80生药/kg）和高剂量组（31.60g生药/kg）小鼠血清中CD4+的含量，与模型对照组比，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。

造模各给药组小鼠血清中CD8+含量均高于空白对照组和模型对照组。与空白对照组相比，模型对照组可增加CD4+/CD8+比值，但差异无统计学意义（P＞0.05），各给药组除复方环磷酰胺片组可降低CD4+/CD8+比值外，其余各给药组略有增加两者比值的趋势。见表2。

3 讨论

2，4-二硝基氯苯（DNCB）致小鼠耳肿胀实验是用于测定机体细胞免疫功能最常用的体内试验方法。其本质属于迟发型变态反应（第Ⅳ型）。当机体被一些细菌（如结核分枝杆菌、布鲁菌）、病毒、或真菌等显性或隐性感染，或接触一些小分子物质、半抗原物质，当与体内组织蛋白接合成为完全抗原时机体就会产生针对这些抗原物质的特异性致敏淋巴细胞。当有相应抗原再次进入机体，局部的致淋巴细胞会释放多种淋巴因子，经24～72h后导致以单核细胞浸润为主的炎症，表现为皮肤红肿硬结，这种反应称为迟发型变态反应[10-11]。由于小鼠耳朵比较薄，血管丰富但结构致密，引起水肿后不能有效扩散，于是在局部形成肿块，通过双耳重量差异反映水肿的程度，即炎症严重程度。该反应可作判断机体细胞免疫功能的指标之一。参与迟发型性超敏反应的主要细胞之一为T细胞，而CD4+T细胞和CD8+T细胞是T细胞的两个亚群[3]。CD4+T细胞也叫辅助性T细胞（Helper T cells，Th），具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；CD8+T细胞也叫抑制性 T 细胞（Suppressor T cells，Ts），具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能[12-15]；它们的含量能直接反应人体的免疫功能，但是通常受人体生理情况不同而变化较大，而CD4+和CD8+的比值相对比较稳定。

表2 化胃舒颗粒对小鼠迟发型超敏反应模型CD4+ 、CD8+含量的影响（x ± s，n=12）

化胃舒颗粒对DNCB致小鼠迟发型超敏反应模型的影响结果表明，迟发型超敏反应模型小鼠的耳肿胀度明显高于空白对照组（P＜0.05），说明模型成立，小鼠服用化胃舒颗粒后耳肿胀度明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05），说明化胃舒颗粒能增强DNCB致小鼠迟发型超敏反应。血液中的CD4+和CD8+T细胞的含量与对照组均有所提高，CD4+/CD8+比值仅略高于对照组，且体现出一定的剂量关系。提示化胃舒颗粒具有提高迟发型超敏反应小鼠的机体免疫力的作用。