天津株（TJM-F92）高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后病毒血症和抗体消长规律的试验报告

徐洪滨 李四山 宗卫阳

（1.如皋市家畜改良站，江苏如皋 226500;2.如皋市畜牧兽医站，江苏如皋 226500）

1 猪蓝耳病介绍

高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性疫病。发病主要特征为怀孕母猪流产、早产、木乃伊胎等，母猪流产率可达30%以上；仔猪出现严重的呼吸道症状，感染率可达100 %，死亡率在50%以上。

猪蓝耳病诱因复杂，主因为蓝耳病病毒的感染。受此影响多数免疫缺失，加重其他病菌和病毒的感染概率，比如：猪瘟、猪狂犬病、附红细胞体病、猪巴氏杆菌、猪弓形体等等，而形成较高的致死率。除此之外，其他的一些不良应激。比如：接种防疫工作不到位，同样为不可忽视的关键因素。此外，处于恶劣的养殖环境、舍内养殖密度过大、长途运输、饲喂营养不全、饲料管理不善等等，都将加重此病的易感性。猪蓝耳病造成的危害极大，主要是体现在：其一，大量母猪流产，死胎率高升，大量仔猪死亡，影响猪场的经济效益。其二，可造成猪体的免疫抑制，导致其他疫苗接种的失败，易混合感染猪瘟、附红细胞体病、猪肺疫、猪传染性胸膜肺炎等等，而加重致死率。

在猪蓝耳病防控管理过程中，接种防疫疫苗为最佳的选择。目前我国使用的高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗均为活疫苗，据报道活疫苗免疫后可在动物体内复制并持续存在。为摸清高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后在猪体内的存在时间，探究高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后病毒血症和抗体消长规律的情况，对规范接种防疫管理工作大有裨益。

2 天津株（TJM-F92）高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后病毒血症和抗体消长规律的试验设计

2.1 试验对象

如皋市某规模化养猪场，选择日龄在20～25之间未经高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的仔猪15头，经荧光RT-PCR检测，待试验的猪只健康无感染猪瘟、猪蓝耳病、II型圆环病毒感染的情况，上述病毒检测均显阳性。

2.1.2 试验用疫苗

天津株（TJM-F92）高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗，由政府统一采购发放。

2.1.3 RT-PCR试剂

鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）高致病性强毒和致弱TJM-F92株疫苗毒的RT-PC R引物，由华威特生物科技有限公司提供，扩增片段位于NSP2基因；dNTP，M-MLV反转录酶，RNA酶抑制剂、Ex Taq聚合酶等，购自宝生物工程（大连）有限公司。

2.1.4 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒

购自北京天之泰生物科技有限公司，法国LSI公司生产。

2.1.5 核酸提取试剂

[42]央广网：《对接“一带一路”倡议，柬埔寨文化旅游发展迎来新契机》，http://dl.cnr.cn/tnhb/20171031/t20171031_524007040.shtml，2017年10月26日。

核酸提取试剂盒（磁珠法），购自西安天隆生物科技有限公司。

2.1.6 试验器材

eppendorf微量移液器，PC R仪，电泳仪，凝胶成像系统，西安天隆生物科技有限公司NP968核酸提取仪，伯乐iMark酶标仪。

2.2 试验方法

2.2.1 注射疫苗

根据使用说明书规定的剂量接种，规范接种操作，选择安全有效的防疫疫苗。

2.2.2 过程比较

生猪在接种试验前，需采血1次。疫苗注射后，每周采血1次，连续采血10周。之后，间隔2周采血1次，连续采血4次。

2.2.3 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸检测

用RT-PCR方法检测。

2.2.4 接种后抗体检测

根据抗体检测试剂盒要求，按照步骤依次进行检测。判定标准，阻断率（IRPC）在20%以上的，确定为抗体阳性。而且，阻断率越大的，抗体水平同样越高。

2.3 调查结果

2.3.1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸变化情况

上表为血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸检测结果，从统计的数据来看，在没有接种防疫之前，所有生猪体内都没有检测出疫苗毒核酸。而在接种后1周开始，陆陆续续在生猪体内检测出TJM-F92株疫苗病毒核酸显阳性。第一周4头，第二周2头，第三周7头，第四周3头，第五周0头，第六周1头。自第六周开始，被检测的15头生猪检测毒血症均显阴性。为此，可以判断血清中TJM-F92株疫苗病毒持续时间最长也就6周，之后会逐渐减弱消失。

表1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸检测结果

表2 接种后抗体检测结果

2.3.2 天津株（TJM-F92）高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后抗体消长规律

从统计数据来看，免疫之前猪体受母源抗体的保护，被检测抗体显阳性的为13头，抗体阳性率为87%。开始接种免疫疫苗后，猪群中检测出来的抗体阳性率逐渐下降，第二周降低到最低值有33%。而后，抗体检测阳性率开始慢慢回升，第3周47%；第4周 53%，到第五周，所有猪只都检测均显阳性。这种状态一直持续到第十二周，抗体阳性检测率维持在100%。从十四周开始，阳性检测率略有下降，始终维持在93%。从抗体平均阻断率来看，接种防疫之前，同样维持在较高水平，72%。接种后开始缓慢的下降，第1周26%，第2周降低到最低为18%。从第二周开始，抗体平均阻断率开始回升。一直到第六周到达最高值为78%。而后，又开始缓慢的下降。

3 讨论分析

3.1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸变化情况

从表1统计的接种活疫苗后病毒存在时间的变化规律来看，不同的生猪在接种后毒血症存在的时间长短不一。可以说，有的不出现毒血症，而有的存在几天，有的存在1周。甚至，最长的可持续到接种后第六周。从此可以看出来，天津株（TJM-F92）高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后毒血症持续最长的时间应该是在6周。

3.2 （TJM-F92）高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后抗体消长

从表2抗体检测结果的消长规律来看，早期接种防疫疫苗后，由于体内有母源抗体的存在，势必会影响到接种后疫苗的效力。早期抗体阳性率会降低，降低到临界合格值附近。这种低抗体的水平会一直维持到免疫后第四周。从第五周开始，抗体水平逐渐回升。基本上到第六周，抗体水平得到最高水平，而且会维持这一水平一直到第16周。实际上，同样有类似的试验报道，即没有母源抗体的作用，接种防疫后同样需要4个周左右的时间恢复到较高水平的抗体。为此，自这一方面来看，从免疫后第一周到第四周这段时间，抗体水平是最低的，同样是最危险的时期。

3.3 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸变化与活疫苗免疫后抗体消长情况的关系

将表1与表2 的数据进行关联性联系，猪体内毒血症的严重化程度与抗体水平的变化呈明显的负相关联系。即，当体内毒血症水平较高时，往往生猪体内的抗体水平较低。而随着生猪抗体水平的逐渐高升，毒血症的迹象反而慢慢变得削弱。从这样的内在关联性比较分析，疫苗本身的毒性与抗体是相互斗争的关系。在疫苗接种后，能刺激机体不断生产抗体。产生抗体的同时，会不断中和疫苗。后期，随着免疫时间的延长，抗体免疫效力的进一步提升，疫苗毒性被逐渐被中和，而达到难以被检测的现象。