子宫内膜样腺癌中CD74和细胞周期蛋白A1的表达及关联性

梁晓红 段广庭 袁 颖

(青海省交通医院妇科，青海 西宁 810001)

子宫内膜样腺癌是子宫内膜上皮来源的肿瘤中最常见的类型。近年显示其发病率有升高趋势〔1〕。CD74是在小鼠及人类体内被发现，通过与CXC趋化因子受体、CD44和CD95等分子结合成为蛋白复合体介导下游分子通路，并在细胞组装和肽类抗原递呈方面发挥重要作用。近年研究显示CD74在多种肿瘤中的表达升高〔2〕。细胞周期蛋白A1(CyclinA1)作为细胞周期正调控因子，在G1晚期到有丝分裂期均有表达，是维持正常细胞周期所必需的因子〔3,4〕。本实验应用流式细胞术检测子宫内膜样腺癌术后组织中CD74和CyclinA1的表达，分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 2015年1月至2017年6月青海省交通医院经病理学确诊为子宫内膜样腺癌，并行手术根治的患者82例为观察组，年龄40～83岁，平均62.7岁。纳入均符合WHO新版的诊断标准。排除标准：①林奇综合征；②先天性疾病；③伴有风湿免疫性疾病。34例子宫肌瘤行子宫全切的患者为对照组，留取术后的子宫内膜组织，其中增生期18例，分泌期16例，年龄41～60岁，平均47.3岁。两组均留取术后新鲜组织，均应用70%的酒精固定保存。

1.2流式细胞术检测CD74和CyclinA1的表达 CD74和CyclinA1蛋白均为浓缩液，先应用免疫组化方法进行预实验，由显微镜观察后选择最理想的表达浓度用于正式实验。CD74和CyclinA1的正式检测应用流式细胞术。将酒精固定的组织剪成碎末，用铜网过滤后，制备成单细胞悬液(1×106/ml)。取1 ml单细胞悬液，分别加入CD74或CyclinA1一抗、磷酸盐缓冲液(PBS)及异硫氰酸荧光素(FITC)-IgG二抗(均严格按实验步骤操作)。流式细胞仪为美国BC公司生产，采用系统自带软件进行数据分析。

1.3结果分析 以荧光指数(FI)表示CD74或CyclinA1蛋白表达的半定量。FI=(肿瘤中蛋白表达的平均荧光强度-对照样品平均荧光强度)/正常对照样品平均荧光强度。

1.4统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行t、F检验、线性相关分析。

2 结 果

2.1CD74和CyclinA1在两组中表达 两组CD74和CyclinA1表达量差异有统计学意义(P<0.001)。见表1。

2.2CD74和CyclinA1表达在观察组不同临床病理特征中的比较 CD74和CyclinA1表达与肿瘤浸润深度和增殖指数相关，CD74表达与肿瘤分化程度相关。见表2。

2.3观察组中CD74和CyclinA1相关性 CD74和CyclinA1表达无明显相关性(P>0.05)。

表1 CD74和CyclinA1在两组中表达

表2 CD74和CyclinA1表达在观察组不同临床病理特征中的比较

3 讨 论

子宫内膜样腺癌是一种腺上皮肿瘤，由腺泡状、乳头状或部分实性结构构成，缺乏子宫内膜浆液性癌的细胞核特征〔5〕。子宫内膜样腺癌患者雌激素水平较高，平均年龄约63岁，90%的患者有一定程度的阴道排液，典型的病变特点为腺性或绒毛腺性结构，衬覆复层柱状上皮，并伴有拥挤、复杂的分支结构，衬覆细胞一般为柱状，相邻细胞的顶部边界平齐，所形成的腺腔轮廓光滑〔6〕。肿瘤细胞嗜酸性、颗粒状，核可见轻到中度不典型性，核仁不明显。肿瘤在生长和进展时可以表现出增殖相关蛋白的失调〔7〕。CD74是一种非多形性糖基化蛋白，分子量为31～45 kD，通过选择性剪切及成熟mRNA经过选择性翻译起始密码子产生了P33、P35、P41和P43这4种异型体蛋白〔8〕。P33是细胞内CD74蛋白的主要存在形式，其一级结构由胞内段、跨膜区及胞外段组成。研究认为CD74作为促炎细胞因子的受体，与促炎因子结合后启动细胞下游信号级联反应，促进肿瘤性病变形成〔9,10〕。CyclinA1是细胞周期家族的重要成员，属于高度保守的Cyclin家族，具有组织特异性，可以结合转录因子E2F-1、P21家族蛋白等，CyclinA1可以与Cyclin依赖性蛋白质激酶2形成复合物，引起E2F-1的磷酸化，调节细胞周期〔11,12〕。

流式细胞术是新型检测技术，组织制备单细胞悬液后应用抗体及荧光二抗标记，结果客观，准确。本实验结果提示CD74和CyclinA1二者对肿瘤的形成有明显的促进作用，即二者类似癌基因样的作用。CD74和CyclinA1二者参与肿瘤的浸润过程及增殖过程。CD74和CyclinA1高表达使肿瘤细胞具有明显的直接蔓延能力，同时使肿瘤细胞对肌层的侵袭破坏能力明显增强，这可能是由于CyclinA1和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2结合后引起CyclinA1活化有关，同时引起CDK2磷酸化，进而抑制CDK2活性〔13,14〕。CyclinA1和CyclinB间也有相互作用，这可以引发Cyclin销毁路径并终止有丝分裂。CyclinA1在CyclinB之前也有相互作用，这可以引发Cyclin销毁路径并终止有丝分裂。也有观点认为CyclinB可以诱导泛素介导的Cyclin家族成员的降解，CyclinA1可以阻止这种降解。这些作用均与促肿瘤作用密切相关〔15〕。CD74表达的变化使肿瘤浸润模式发生改变，能引起细胞极性紊乱，使肿瘤细胞的形态更加弥漫，细胞体积更小，易于浸润〔16〕。本结果提示CD74可以调节肿瘤性的分化过程，其表达升高可以使肿瘤细胞停滞在幼稚状态。本实验未发现CD74和CyclinA1的相关性，提示二者在子宫内膜样腺癌中的作用可能是通过独立的通路发挥的，其具体调控机制有待更多实验证实。