临桂区鸡大肠杆菌的分离与药敏试验初步研究

赵 蓉 廖炳次

大肠杆菌病是家禽养殖中最常见的一种疫病，针对临桂区的桂林广东温氏家禽养殖有限责任公司和利源家禽养殖公司的养户经常发生鸡大肠杆菌病，临床治疗效果不明显，对这两个养殖公司随机采样各10户疑似大肠杆菌病的病例，进行细菌分离及药敏试验，为养殖户在临床用药上提供指导。试验结果表明本区主要敏感药物是头孢拉定、氟苯尼考、头孢噻呋、诺氟沙星，用敏感药物治疗取得良好效果。

1 鸡大肠杆菌病概况

大肠杆菌病是指由禽致病性大肠杆菌（APEC）所引起的局部或全身性感染的疾病。1894年Lignieres首先报道该病可引起家禽的大批死亡，并从心、肝、脾中分离到大肠杆菌。大肠杆菌属于条件性致病菌，在卫生条件差，饲养管理不完善等情况下都会引起该病的发生。临床上主要表现为败血症、心包炎、肝周炎、腹膜炎等。本病可单一发病，也可以混合感染，给养禽业带来严重的经济损失。

病原为埃希氏大肠杆菌，需氧兼性厌氧，革兰氏阴性杆菌，大多数菌株周身有鞭毛，能运动。在伊红美蓝琼脂上形成黑色带特殊金属光泽的菌落；对理化因素敏感，常用消毒液在几分钟内即可杀死本菌。已经确定的大肠杆菌抗原体共有173种，国内鉴定的鸡源大肠杆菌有74个血清型。

大肠杆菌的致病性主要由该病原体的三个方面决定，即侵袭力、感染性和致病力。该病在鸡的各个年龄均可发生，尤其是3～6周龄最为敏感。不同的大肠杆菌病例引起的症状和病变都不同，主要分几种：一是死胚、弱雏，表现为腹部大、红肿。二是败血性，剖解见气囊浑浊，腹腔内充满黄绿色水样粘稠液体。三是脐炎或卵黄囊感染，充血、肿胀；四是输卵管炎，引起产蛋量下降，产畸形蛋。五是关节滑膜炎，病鸡关节肿胀，跛行。六是全眼球炎，表现为一侧眼睛失明或积脓，头部肿胀。七是气囊炎，病鸡剖解产生心包炎和肝周炎。

2 鸡大肠杆菌病的研究进展

在养鸡业的发展过程中，大肠杆菌病一直伴随着养鸡业的发展。近十年来，大肠杆菌病的危害显得越来越突出。当前药物防治一直是本病控制的主要手段，但临床上普遍的养鸡场反映很多常规的抗菌药对肉鸡大肠杆菌病的防治效果不明显，从而出现盲目或超量应用抗菌药导致药物产生毒副作用、耐药性等不良后果。通过药敏试验，了解本地区鸡大肠杆菌病的敏感性，使用有效的药物进行治疗是当前的主要方向。近年来，中草药具有不易产生耐药性，使用中草药进行该病的防治也是当前研究的热点。据王自然等报道使用止痢灵，对耐药菌株或非耐药菌株都有极好的治疗效果，治愈率达96%以上，有效率达100%。

3 实验材料

3.1 实验器材

酒精灯、接种环、平皿、擦镜纸、剪刀、镊子、生物显微镜、玻片、培养箱、酒精棉球、棉签、记号笔等。

3.2 实验试剂

革兰氏染色液、营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝、普通肉汤及18种药敏试纸均购自桂林市贝尔实验设备有限公司。

3.3 病料来源

病料来源于诊断疑似大肠杆菌的患病鸡群，每群鸡1只，无菌操作采取心、肝、脾病料。

4 实验方法

4.1 细菌分离

采用平板划线法，于营养凯琼脂平板从病、死鸡的心、肝、脾中直接划线培养，于37℃培养24h，挑取单个菌落，再划线培养。

4.2 病原菌生长性状观察

将分离菌种分别接种到麦康凯平板和伊红美蓝琼脂培养基平板，于37℃培养24h，经鉴定后，挑取单个菌落接种于普通肉汤，于37℃培养24h，放4℃冰箱保存备用。

5 药敏试验

参照Kirby-Barer氏法，将庆大霉素、多粘菌素、氟苯尼考、头孢噻呋钠、诺氟沙星等18种常用的抗生素的药敏纸片贴到琼脂平板的表面，37℃培养24h后，测量抑菌圈的大小。抑菌圈直径小于10mm为耐药、10mm 大于15mm为中敏、大于15mm为敏感。

6 结果

6.1 病原菌的分离鉴定

经革兰氏染色后，在油镜下见大量散在红色、中等大小、两端钝圆的无芽孢杆菌；在伊红美蓝琼脂上出现特征性带有金属光泽的黑色菌落，可做出初步诊断。

6.2 药敏试验治疗情况

6.2.1 18户养鸡户分离到大肠杆菌并根据药敏试验结果进行用药，死亡率、治愈率明显提高。说明用敏感药物进行治疗有比较理想的治疗效果。

6.2.2 不同的鸡群，大肠杆菌对药物的敏感性是不完全统一的，因此及时进行药敏试验是指导养殖户临床用药的有效办法。

7 分析与讨论

7.1 鸡大肠杆菌病发病的原因分析

由于大肠杆菌病在正常肠道内都存在，属于条件性致病菌，其典型病变为心包炎、肝周炎及气囊炎。导致该病发生和流行的主要原因有：一随直传播。二饲养管理人员普遍文化素质低。养殖公司的饲养人员都是临桂区当地的农民，没有系统的专业知识，防疫意识淡薄。三养殖户防疫管理不规范，鸡场的消毒只是形式化。四饮水中大肠杆菌数超标。鸡场的饮用水未经严格消毒，直接给鸡饮用。五抗生素的滥用，随意加大药物的使用量，导致耐药性的增加。六与其他疾病的混合感染，多数都是与新城疫、传染性法氏囊等混合感染。

8 讨论

8.1 根据药敏试验的治疗效果表明：

高敏药物在临床治疗上对大肠杆菌病的控制有很好的效果。药敏试验操作方便、简单，非常适合广大基层养殖场（户）使用，临桂区目前建成了兽医实验室，这为药敏试验的用提高了时效性，方便性。

8.2 试验结果显示：

这四种药物目前在临桂区对大肠杆菌病有较好的治疗效果。但临床上，应注意有效的交替用药、联合用药，防治菌株耐药性的产生。

9 综合防治

由于大肠杆菌病属于条件性致病菌，其发生和鸡舍的环境条件有着密切的关系，因此该病的防治不仅要正确使用药物来控制，更应做好环境卫生的控制。应用中草药进行日常保健等措施综合防控，最大限度减少大肠杆菌病对养殖带来的损失。