山茶油对应激性及冰乙酸致大鼠胃溃疡的影响及作用机制研究

蔡春辉 刘天宇 曹良顺 李 岩* 吴崇明*

（1 福建春辉生物工程有限公司，福建 宁德 352100；2 北京理工大学生命学院，北京 100081；3 中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193）

胃溃疡是一种全球性的消化系统疾病，临床表现主要是胃部疼痛、烧灼，有时伴有吞酸、恶心、呕吐等症状，严重的患者可能出现胃穿孔、出血，甚至癌变。现代医学认为，溃疡的发生受到多种因素的影响，包括化学损伤、气候环境、生活习惯和心理压力等[1-2]。研究结果证明，血浆抗氧化因子，如丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）等参与了胃溃疡的发生和发展过程，是治疗胃溃疡的重要调节指标[2]。山茶油是我国特有的木本油脂，富含多种不饱和脂肪酸、山茶苷、茶多酚和角鲨烯等活性成分，是国际粮农组织重点推广的健康型高级食用木本植物油，具有食疗双重功能[3-10]。在民间有每日服用山茶油治疗胃溃疡的验方，但迄今为止，其治疗胃溃疡的药理活性尚缺少现代药理学试验的证实。为此，本研究利用两种胃溃疡大鼠模型，即水浸束缚法建立的应激性胃溃疡和用冰乙酸直接刺激导致的胃溃疡，对山茶油对预防和治疗胃溃疡的效果进行评价，为应用山茶油防治胃溃疡提供实验依据，并初步探讨了其发挥抗胃溃疡功效的潜在机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物和材料：雄性Wistar大鼠，8周龄，体质量230～260 g，由中国医学科学院动物研究所提供。动物饲养于中国医学科学院药用植物研究所SPF动物房内，室温22～24 ℃，相对湿度50%～70%，光线为12 h/12 h明暗循环。使用小鼠标准饲料喂养，自由饮水。山茶油由福建春辉生物工程有限公司生产提供；奥美拉唑肠溶片由阿斯利康制药有限公司生产；血清MDA和SOD检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；其余化学和生物试剂购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 水浸束缚致大鼠胃溃疡模型实验：动物适应环境1周后，将动物随机分为5组：模型组（等体积蒸馏水），奥美拉唑组（4 mg/kg），山茶油低、中、高剂量组（0.5、1.0、1.5 mL/kg）。每天灌胃给药，连续7 d。于末次给药后禁食24 h，将其四肢固定于木板上，垂直浸入30 ℃水浴至剑突水平。24 h后取出处死，打开腹腔，结扎胃的幽门，从贲门向胃内注入1%福尔马林溶液8 mL后再结扎贲门，摘下全胃浸泡于福尔马林溶液中30 min后，沿大弯将胃剖开检查溃疡，同时取血测量血清指标。

1.3 胃溃疡指数测定：将胃用福尔马林固定后，沿胃大弯剪开，生理盐水漂洗，用滤纸吸干水分，在固定板上将胃展平并用细针头固定，观察溃疡的情况。按改良Guth标准计算溃疡指数[001]：病变的最大径＜1 mm为1分；1～2 mm为2分；2～4 mm为3分；＞4 mm为4分；若病灶宽于2 mm，其长度乘以2。全胃各病灶评分之和作为溃疡指数。

1.4 乙酸致大鼠胃溃疡模型实验：大鼠适应环境1周后，对动物进行胃溃疡手术。腹腔注射2%戊巴比妥钠（30 mg/kg）进行麻醉，然后固定于手术台上。常规消毒，沿剑突向下腹中线剪开长约2 cm的正中切口，将胃轻轻托出至腹外，于胃体与幽门窦交界处，用0.1 mL冰乙酸涂覆于胃体外侧30 s，然后用无菌生理盐水清洗多余乙酸，并缝合伤口。手术后将动物随机分为5组：模型组（等体积蒸馏水），奥美拉唑组（4 mg/kg），山茶油低、中、高剂量组（0.5、1.0、1.5 mL/kg）。每天灌胃给药，连续7 d。末次给药后处死动物，打开腹腔，结扎胃的幽门，从贲门向胃内注入1%福尔马林溶液8 mL后再结扎贲门，摘下全胃浸泡于福尔马林溶液中30 min后，沿大弯将胃剖开检查胃溃疡，同时取血测量血清指标。

1.5 胃溃疡面积测定：将胃用福尔马林固定后，沿胃大弯剪开，生理盐水漂洗，用滤纸吸干水分，在固定板上将胃展平。用游标卡尺测溃疡长径（DL）和短径（DS），大鼠溃疡面积按照公式S=DL×DS×π/4计算，π取3.14。

1.6 统计学处理：数据以Mean±SEM表示，用SPSS17.0软件进行单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

图2 山茶油对乙酸致大鼠胃溃疡的促愈合作用（n=10）。（A）典型的胃组织图片；（B）胃溃疡面积定量数据。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001试验组vs模型组

2.1 山茶油对水浸束缚致胃溃疡大鼠的保护作用：正常大鼠的胃黏膜光滑，呈淡粉色，可见黏膜皱襞，没有充血、出血现象。水浸束缚8 h后，模型组胃腔内出现咖啡样物质，冲洗后可见胃黏膜表面弥漫性水肿，胃体可见广泛分布的呈条索状或点状的深褐色溃疡面及出血点。山茶油和奥美拉唑预防处理可以显著减轻胃溃疡病变（图1A）。胃溃疡指数测定结果显示，水浸束缚导致大鼠产生严重的应激性胃溃疡，胃溃疡指数达到35.5（图1B）。奥美拉唑（4 mg/kg）预防给药可使胃溃疡指数显著降低（P＜0.01），抑制率为62.73%（图1B）。每日给予山茶油预防处理7 d，大鼠胃溃疡指数呈剂量依赖性降低，其中1.5 mL/kg剂量的胃溃疡抑制率接近阳性药奥美拉唑（57.18% vs.62.73%）（图1B），显示出较强的预防胃溃疡功效。山茶油对水浸束缚诱导的大鼠胃溃疡的抑制率：奥美拉唑62.73%，山茶油低、中、高分别为40.56%、48.73%、57.18%。

图1 山茶油对水浸束缚诱导的大鼠胃溃疡的防治作用（n=10）。（A）典型的胃组织图片；（B）胃溃疡指数定量数据。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001试验组vs模型组

2.2 山茶油促进乙酸致大鼠胃溃疡愈合的作用：乙酸涂覆胃体导致大鼠的胃组织产生典型的胃溃疡病灶，溃疡病灶与溃疡边缘有明显分界，溃疡面覆盖灰白苔，边缘水肿（图2A）。与模型组相比，各试验组的溃疡面积均明显变小，显示出促进胃溃疡愈合的效果。胃溃疡面积测量结果显示，模型组动物的胃溃疡面积达52 mm2（图1B）。经山茶油治疗7 d后，胃溃疡面积呈剂量依赖性降低，以1.5 mL/kg的剂量最好，其效果接近阳性药奥美拉唑（图2B）。山茶油对乙酸致胃溃疡大鼠的促愈合率：奥美拉唑66.53%，山茶油低、中、高分别为27.89%、46.97%、60.19%。

2.3 山茶油对乙酸致胃溃疡大鼠血清MDA和SOD的影响：为初步探讨山茶油治疗胃溃疡的潜在机制，我们进一步考察了山茶油对动物体内氧化应激的影响。如图3A所示，山茶油在0.5～1.5 mL/kg的剂量下可以显著降低乙酸致胃溃疡大鼠血清中MDA的含量，并具有明显的量效关系。同时，每天灌胃1.5 mL/kg的山茶油可以显著提高血清SOD的活性（图3B）。虽然山茶油在0.5和1.0 mL/kg的剂量下未能显著升高血清SOD活性，但仍然显示出了一定的量效关系（图3B）。这些结果提示，山茶油可能通过增强动物体内氧自由基清除酶SOD的活性，降低氧自由基的含量，从而促进胃黏膜的愈合。

3 讨 论

图3 山茶油对乙酸致胃溃疡大鼠的血清MDA和SOD的影响（n=10）。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001试验组vs模型组

山茶油是我国特有的木本油脂，以其富含多种不饱和脂肪酸、蛋白质和维生素A、B、D、E等，而成为优良的健康型食用油。近年的植物化学研究显示，山茶油中含有山茶苷、茶多酚和角鲨烯等多种具有抗炎、抗氧化等生物活性的成分[11-13]，因此山茶油同时具有医疗保健的潜在功效。明代李时珍《本草纲目》和清代赵学敏《本草纲目拾遗》中即记载山茶油有“驱虫、益肠胃”、“润肠清胃，杀虫解毒”等功效，在我国民间也有通过服用山茶油来治疗胃溃疡的验方。虽然山茶油治疗胃溃疡功效多被人提及，但迄今为止，尚未见利用现代药理学方法，通过胃溃疡动物模型对山茶油防治胃溃疡的功效进行证实。

为了评价山茶油对胃溃疡的防治效果，本研究通过水浸束缚法建立了应激性胃溃疡大鼠模型，并通过冰乙酸法建立了损伤性胃溃疡大鼠模型，并使用这两种经典的大鼠胃溃疡模型对山茶油防治胃溃疡的功效进行药效学评价。我们的研究结果显示，每天给予0.5～1.5 mL/kg的山茶油可以剂量依赖性地预防由于水浸束缚导致的应激性胃溃疡的发生，胃黏膜表面水肿和溃疡面出血得到很大改善，胃溃疡指数显著降低，其中1.5 mL/kg剂量的山茶油可以使胃溃疡指数减少57.18%，接近4 mg/kg阳性药奥美拉唑的水平。同时，每天给予1、1.5 mL/kg的山茶油还能够显著促进乙酸刺激导致的胃溃疡病灶的溃疡面愈合，愈合率分别达到46.97%和60.19%，其效果也与4 mg/kg的奥美拉唑接近。以上本研究证明，每日口服山茶油可以有效预防胃溃疡的产生，并促进已有溃疡面的愈合，从而为使用山茶油治疗胃溃疡提供了明确的实验依据。

氧自由基在胃溃疡发生和发展过程中发挥了重要作用[1]。在正常动物中，体内同时存在完善的自由基生成和清除系统，使器官组织免于氧自由基的损害。在胃溃疡状态下，动物体内的氧自由基生成量大幅增加而氧自由基清除机制则明显减弱，最终导致胃组织内积累大量的氧自由基，从而对机体造成持续损伤[1]。山茶油中富含不饱和脂肪酸、角鲨烯等抗氧化活性成分，因此有良好的抗氧化活性。本实验研究发现，胃溃疡动物血清中SOD活性显著降低而MDA含量显著升高，显示出较严重的氧化应激状态。经过山茶油处理后，胃溃疡大鼠的血清SOD活性明显升高，同时MDA含量显著降低，表明口服山茶油可显著增强动物体内的抗氧化酶系统活性，大幅降低胃溃疡动物的氧化应激水平，从而利于胃溃疡愈合。虽然山茶油还可能通过其他途径发挥抗胃溃疡作用，但本研究结果提示，增强机体消除氧自由基的能力至少部分地参与了山茶油治疗胃溃疡的作用机制。