EGFR、Her-2及Hsp90α在食管腺癌患者中的表达及病理研究

姜　波　高爱民　盛　莹　文　进　赵胜乾　王仰坤

食管腺癌可以说是我国比较常见的1种恶性肿瘤，严重威胁着人们的生命健康。根治性手术虽然能够切除病变早期的食管腺癌，但是大多数患者就诊时属于进展期。辅助化疗治疗该病效果理想，能够降低患者的肿瘤分期，改善进展期切除率，从而延长患者的生存期[1]。不过进展期患者的预后方面，还缺乏统一的评估方案，同时术前对化疗效果的预测也缺乏可靠的医学证据。如果能够筛选食管腺癌预后评估的可靠指标，有利于防止盲目用药给患者带来非必要的痛苦。本研究在此分析EGFR、Her-2及Hsp90α的表达在食管腺癌患者中的表达及同病理学特征之间的关系，现报告如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料

选取2013年1月至2015年12月我院收治的食管腺癌患者30例为研究组，男性27例，女性3例，年龄22～56岁，平均(37.2±1.9)岁。同时选取同期胃镜下食管活检正常的健康人员30例为对照组，男性26例，女性4例，年龄23～51岁，平均(35.2±2.3)岁。两组研究对象均知情同意，经过伦理委员会同意。

1.2　方法

1.2.1仪器与试剂脱水机为PELOIUSII，包埋机EGl140H，染色机ST5020，切片机RM2135，显微镜DMlOoo，均为德国徕卡公司生产。兔抗人EGFR抗体、兔抗人Her-2抗体、兔抗人HSP90Α抗体，均由上海艾博抗公司生产。兔抗人SP法试剂盒，北京金桥公司生产[2]。

1.2.2实验方法常规染色，切取厚度5.0 μm的切片，烤箱当中放置1 h，冷却后相继添加二甲苯、乙醇15 min，去除之后使用自来水进行冲洗。之后使用苏木精5 min并使用自来水进行冲洗，酒精脱水之后使用树胶封片，在显微镜条件下观察[3]。

1.2.3免疫化学检测检测食管腺癌组织当中的EGRF表达、HER-2表达以及HSP90Α表达。蜡块5 μm切片后烤箱干燥2 h，常规脱蜡之后添加二甲苯20 min以及无水乙醇10 min，之后应用自来水进行冲洗。抗原修复方面，把切片浸入枸橼酸液当中浸泡，高压锅中修复3 min后冷却，使用生理盐水冲洗10 min[4]。室温条件下孵育20 min，生理盐水冲洗10 min后滴加一抗(EGRF、HER-2以及HSP90Α)。室温放置20 min之后生理盐水冲洗，并DA显色。自来水冲洗之后使用苏木精复染，酒精脱水之后应用树胶进行封片[5]。

1.3　观察指标

阳性对照方面，应用已知的EGFR、Her-2以及HSP90Α阳性切片使用相同方法染色，作为阳性对照。阴性对照方面，使用生理盐水PS代替一抗，将操作结果当作阴性对照。由两名以上的病理科医师阅片，切片随机计数20个高倍镜下(×400)视野当中的阳性细胞，统计染色细胞数量以及强度[6]。

Hsp90α结果分析方面，阳性评分(0～10%计0分，11%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，76%～100%计4分，并进行染色强度评分(不着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。相加得到结果，0～1分是(-)，2～3分是(+)，4～5分是(++)，6～7分是(+++)。将(-)以及(+)判断为阴性，(++)是弱阳性，(+++)定为强阳性，++以上为阳性结果[7]。

EGRF以及HER-2结果分析方面，染色为零是完全阴性-：+，细胞膜染色>10%，同时间断分布，未曾环绕胞膜；++，>10%的细胞膜中度阳性同时连续染色，环绕细胞膜；+++，>10%的细胞膜强阳性同时连续染色，环绕细胞膜；-及+属于阴性；++属于弱阳性，+++属于强阳性。其中++以上判断为阳性。

1.4　统计学方法

2　结果

食管腺癌组织中EGFR、Her-2及Hsp90α表达阳性率显著高于正常鳞状上皮，差异均有统计学(P<0.05)。见表1。

表1　两组EGFR、Her-2及Hsp90α表达情况比较(例，%)

HSP90α表达与肿瘤浸润深度、肿瘤细胞分化、淋巴结转移、TNM分期以及脉管侵犯等因素相关(P<0.05)，EGFR表达与肿瘤TNM分期、细胞分化、浸润深度以及淋巴结转移等因素相关(P<0.05)，Her-2表达与患者的肿瘤细胞分化、淋巴结转移以及TNM分期等因素相关(P<0.05)，见表2。

食管腺癌组织中Hsp90α表达与EGFR表达存在正相关(P<0.05)，Hsp90α表达与Her-2表达存在正相关(P<0.05)，Her-2表达与EGFR表达无相关性(P>0.05)，具体见表3。

3　讨论

食管腺癌发生发展以及转移等同各方面的因素相关，具体的作用机制还不够明确，寻找食管腺癌分子靶标还有靶向药物已经成为临床研究的热点[8]。本研究借助于分析食管腺癌组织当中EGFR表达、Her-2表达以及Hsp90a表达情况，同时判断三者同患者病理特征之间的关系，从而判断患者的预后情况，也为临床的靶向治疗提供可靠的分子学判断依据。EGFR属于酪氨酸激酶的1种，转导信号的方式同肿瘤侵袭以及转移等存在着直接的联系。研究结果显示，50%左右的食管腺癌患者存在和EGFR的过度表达，并且同患者的预后质量较差存在联系。EGFR表达同患者的淋巴结转移、肿瘤分期以及生存期等存在联系，也跟肿瘤血管增殖、转移侵袭以及细胞凋亡等因素相关[9]。本研究的结果显示，食管腺癌患者癌组织当中的EGFR表达要显著高于正常组织(P<0.05)。病理分析结果显示，EGFR表达同患者年龄、性别、肿瘤位置以及分化程度等缺乏明显联系，同浸润深度、TNM分期以及淋巴结转移等因素存在正相关(P<0.05)。有研究显示，食管腺癌患者手术之后的生存期随着EGFR的表达上升而逐渐下降[10]。这意味着EGFR表达同食管腺癌患者的浸润、转移还有预后等存在联系。在食管腺癌当中表达的差异，需要在选择EGFR靶向药物进行食管腺癌患者治疗的过程当中明确具体的治疗策略。

表2　EGFR、Her-2及Hsp90α表达与食管腺癌病理特征的关系/例

表3　食管腺癌组织中EGFR、Her-2及Hsp90α表达的关系

Her-2同样是酪氨酸激酶的一种，在各种恶性肿瘤当中呈现出高表达，例如肺癌、结直肠癌以及卵巢癌等。过表达同乳腺癌患者的临床分期以及分化程度等存在正相关，同患者的预后质量存在负相关，可以说是乳腺癌患者重要的预后判断指标。近年研究人员发现Her-2在胃癌的发展过程当中同样发挥着重要的影响，并且曲妥珠单抗经过欧盟以及日本的注册应用到治疗Her-2存在过表达的胃癌患者当中[11]。食管腺癌患者当中Her-2的表达方面，还存在着一定程度的争议，大部分研究人员认为这一比例不高于30%。有研究人员认为Her-2的过表达同患者的年龄、性别、分化程度以及肿瘤大小等缺乏直接的联系，但是同肿瘤的浸润深度还有淋巴结转移等因素存在密切联系，并Her-2的过表达会影响到患者的生存率以及生存期现[12]。本研究的结果显示，食管腺癌患者癌组织当中的Her-2表达率要显著于正常组织(P<0.05)，同时表达情况同管腺癌患者年龄、性别、分化程度以及肿瘤位置等因素无关，不过同患者肿瘤的浸润深度存在负相关，同淋巴结转移还有TNM分期等因素存在正相关。除此之外，也有研究人员认为Her-2表达同食管腺癌患者手术之后的生存期存在联系，随着表达程度的上升，患者的生存期越来越短，这表明Her-2同食管腺癌患者的预后质量存在联系[13]。不过因为Her-2的表达率比较低，同时研究的样本量不多，因此食管腺癌当中Her-2的变化还需要后续的深入研究。

Her-2以及EGFR的分子学功能存在着密切的联系，Her-2缺乏显著的单体活性，需要借助于二聚体才能够生成活化信号。在细胞膜遭到EGF的处理之后，Her-2以及EGFR就能够在功能上发挥反向激活效果。EGF同EGFR以及Her-2二聚体之间的结合，要高于EGF受体二聚体的结合。同时异质二聚体同均质二聚体对比而言，无论在人体的正常细胞当中还是在肿瘤细胞当中，生长活性都显著上升。因为Her-2配体还不够清晰，传导信号需要借助于其它的二聚体来发挥相互影响，或者是借助于同EGFR家族当中的受体来发挥作用。与此同时，在食管腺癌转移过程当中，EGFR以及Her-2共同过表达发挥着不容忽视的重要影响。联合过表达同食管腺癌患者的发生发展以及预后质量存在这密切的联系，这一关系得到研究人员的普遍认同。本研究的结果显示，食管腺癌患者的组织当中，EGFR表达以及HER-2表达存在着正相关，这表明两者在食管腺癌发病过程当中存在着联系。

Hsp90α属于EGFR以及Her-2分子的伴侣，在肿瘤发生发展环节都有重要的影响。Hsp90α在多种人类恶性肿瘤组织当中呈现出高表达的状态，并且同肿瘤出现、转移以及恶性行为存在着密切的联系。有研究人员通过实验发现，结肠癌患者当中Hsp90的表达表达率超过72%，要明显高于患者癌旁组织当中的40%以及正常黏膜组织当中的20%，同时肿瘤浸润加深之后，Hsp90表达也越来越高。也有研究人员分析宫颈癌患者病理组织当中Hsp90的表达情况，结果表明示Hsp90表达同宫颈癌患者的病理分级缺乏显著的关联性[14]。食管腺癌患者当中Hsp90表达同患者手术之后生存时间的对比还不够明确。本研究的结果显示，食管腺癌组织当中的Hsp90α表达率要显著高于正常组织(P<0.05)，并且同食管腺癌患者年龄、性别、肿瘤分化程度以及肿瘤位置无明显联系，同食管腺癌的TNM分期、浸润深度还有淋巴结转移等因素存在正相关(P<0.05)。有研究人员借助于检测食管腺癌患者的Hsp90α表达情况，同患者的生存时间进行对比，结果显示Hsp90α的表达程度同食管腺癌患者手术之后的生存期存在着直接的联系，Hsp90α的表达越强，那么食管腺癌患者的生存期也就越短。这意味着Hsp90α能够当作食管腺癌患者预后质量判断的可靠指标。食管腺癌患者当中Hsp90α表达以及EGFR表达存在正相关，因此理论层面而言，联合应用将Hsp90还有EGFR当作靶点的治疗药物可以提高药物治疗的敏感性，降低肿瘤患者的耐药性还有药物治疗造成的不良反应。除此之外，EGFR表达、Her-2表达以及Hsp90α表达在食管腺癌组织当中存在着表达差异，并且同病理特征之间的关系以及对患者手术治疗之后的生存期也有着各自的影响，需要引起医务人员的重视。

综上所述，食管腺癌患者当中EGFR、Her-2及Hsp90α表达阳性率显著高于健康人群，并且同TNM分期以及细胞分化的因素存在密切联系。研究分析肿瘤当中蛋白过度表达同肿瘤之间的关系，对指导临床治疗以及评估患者预后都有重要价值。