风箱果的组织培养与离体快繁技术

●杨晓光 张 桓（吉林市林业科学研究院 吉林 吉林 132013）

风箱果（Physocarpus amurensis）别名托盘幌，原产于黑龙江及俄罗斯远东地区，属蔷薇科灌木，其花色秀美，为优良的绿化树种。为保护和开发利用风箱果种质资源，并保持优良个体遗传性状，笔者对其进行组织培养和离体快繁技术研究，为探索其发育规律性与开发利用起到促进作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料采集与预处理

2015年12月于吉林市北华大学校内采集多年生健壮风箱果树的休眠枝条用于试验。材料取回后，用水洗净，将枝条剪成70cm左右的长度，放入塑料桶内水培。

1.2 外植体的灭菌

枝条萌发后，选取饱满的腋芽，放入小烧杯中，盖上纱布，用自来水反复冲洗至干净为止。在超净工作台上先用0.1%的升汞溶液中浸泡10分钟，取出后用无菌水反复冲洗6～8次。

1.3 培养基与培养条件

以最常用的MS或WPM为基本培养基，附加外源激素BA（0.1～0.5mg/L）与NAA（0.1～0.5mg/L）。培养温度25±5℃、湿度60%～70%、光照强度2000～2500lx。

1.4 诱导培养

将灭菌处理过的腋芽接种到设计好的诱导培养基上，及时观察。

1.5 增殖与继代培养

将诱导产生的愈伤组织转接到增殖培养基上继代培养，此时应特别注意丛生芽产生时间的长短与数量。

1.6 生根培养

当分化苗长到 4～5cm高时转入到不同配比的生长培养基内诱导生根，每瓶置8～10株，注意观察生根情况。

2 结果与分析

2.1 初代培养诱导愈伤组织情况

由于实验操作方法的不完善，起初的污染率达50%以上，改善后污染基本能控制在10%左右。培养至第8天开始看到冬芽形态上有明显的变化，发生变形。2周后出现颗粒状的结构。20天后，愈伤组织已明显可见，可转为继代增殖培养。据统计，在WPM+BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L培养基上产生愈伤组织数最多，诱导率高达85%，平均诱导率达55.8%，具体情况见表1。

2.2 继代增殖培养情况

将生长健壮的愈伤组织进行分割，每种处理接种20块，培养20天后调查不定芽的分化情况，见表2。

表1 不同培养基对外植体诱导率情况

表2 不同激素配比对风箱果愈伤组织诱导不定芽的影响

在后3种培养基中，愈伤组织都有较高的增殖率，但在BA为0.5mg/L培养基中，生长较弱；而在BA为0.3mg/L的培养基中，长势较强，所以愈伤组织的增殖选择BA为0.3mg/L的两种培养基，两者的差异不显著。

2.3 分化苗诱导生根培养情况

当分化苗长到4～5cm、具有5～7片叶时，转入生根培养基内诱导生根，每瓶置8～10株小苗，20天后小苗基部可分化出4cm左右的根。通过添加两种浓度的NAA和IAA生长素的生根比较试验，结果以添加NAA0.2mg/L的生根效果为最佳，见表3。

表3 两种生长素和浓度对分化苗诱导生根的结果

3 炼苗与移栽

将已生根的试管苗置于温室中，待条件适应后，逐渐揭去瓶盖，炼苗3～5天，然后将苗取出用清水

4 小结与讨论

通过试验研究，掌握了风箱果的冬芽诱导愈伤组织、愈伤组织增殖及分化、分化苗生根等不同阶段的生长特性，探索出各阶段较为理想的培养基配方。

4.1 在不同激素配比对风箱果外殖体诱导影响的试验中，以WPM+BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L的培养基对外殖体诱导率最高，达85%。洗去根部培养基，洗净后移栽到已用0.1%的高锰酸钾溶液消毒后的珍珠岩基质中，并适时浇营养液，浇水要少量多次。

4.2 在相同的基本培养基条件下，风箱果芽增殖的最佳培养基为WPM+BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L，增殖率高达712%。

4.3 试验结果证实，WPM+BA 0.3mg/L+NAA 0.2mg/L培养基为风箱果适宜的生根培养基，平均生根数达6.8个，且根系生长健壮。