手术创伤对在体口腔黏膜细胞状态的影响研究

贾江

【摘 要】目的：探讨手术创伤对在体口腔黏膜细胞状态的影响。方法：回顾性分析性了12例保乳术患者以及15例乳腺癌根治术患者的临床资料，于手术前后分別采用亚G1峰法以及Ki-67法分别对其口腔黏膜凋亡率以及增殖率进行检测、分析，并对两组手术前后口腔黏膜细胞状态以及组间细胞状态进行比较。结果：两组患者在年龄、性别、营养状态等方面的差异均无统计学意义（P>0.05）；保乳术组手术前后口腔黏膜凋亡率分别为（27.49±2.27）%及（26.97±1.78）%，保乳术组患者手术前后增殖率分别为（16.02±2.19）%及（16.32±2.38）%；根治术组手术前后口腔黏膜凋亡率分别为（27.28±2.08）%及（27.44±2.17）%，根治术组手术前后口腔增殖率分别为（16.11±1.28）%及（16.35±1.30）%；两组手术前后口腔黏膜凋亡率及增殖率差异均无统计学意义（P>0.05），且两组术后口腔黏膜凋亡率及增殖率差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：手术创伤对在体口腔黏膜细胞状态不产生显著性影响。

【关键词】手术创伤；在体口腔黏膜；凋亡率；增殖率

【中图分类号】R318 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2018）06-03--01

外科营养在临床上受到了广泛地关注，尤其对于围术期患者，营养支持已经被提升至营养治疗的地位[1]。所以，如何及时以及有效地对单个机体的营养状态加以评价，具有十分重要的意义与价值，以往关于外科营养的评价标准还存在着时间滞后以及特异度低下等方面的缺陷，已完全不能满足指导临床营养治疗[2]。因此，探索一种及时、特异度高以及高效的营养评价标准已经逐渐发展成为人们的迫切需求。

之前，我们的研究团队已经发现，口腔黏膜细胞状态受到人体营养状态的影响，营养不良患者的口腔黏膜凋亡率以及增殖率显著低于正常人，且提出可通过检测口腔黏膜细胞凋亡率以及增殖率来对机体的营养状况加以评价[3-4]。然而，围术期患者机体口腔黏膜细胞的凋亡率以及增殖率除了受到营养等因素的影响以外，是否同样也会受到手术创伤等方面因素的影响呢？本研究带着这个问题进行逐一探讨，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年12月至2013年12月入住我院的12例保乳术患者以及15例乳腺癌根治术患者作为研究对象，术前采用患者总体主观评价法PG-SGA进行营养评定，结果显示均无营养不良。采用ELSIA法对各项生化营养指标均显示正常；年龄23～54岁，平均（38.90±2.33）岁；无肝肾功能不良、无恶液质以及无代谢性疾病；无口腔局部性疾病；围术期基本可进行正常的饮食。

1.2 口腔黏膜细胞的收集及处理 分别于手术前1、2d，术后1、2d，于晨起洗漱以及进食之前，采用经消毒的生理盐水将口腔清洁干净之后，再用经消毒的医用棉签搔刮擦拭双侧口颊黏膜，每侧擦拭次数各为3次，然后用棉签放入约为15mL的生理盐水的清洁容器之中进行缓缓地震荡，以500目的筛网进行过滤，再经转速为800rpm的离心机离心5min，制作成细胞悬浮液，将上清液弃去，后用质量浓度为80%的C2H5OH溶液加以固定，最后置于-20℃温度的冰箱中放置24h备用[5]。

1.3 亚G1峰法检测口腔黏膜细胞凋亡率 首先取已经固定好的口腔黏膜细胞液，按照转速为800rpm离心5min，将上清液弃去，使用磷酸盐缓冲溶液（PBS）将细胞洗涤2次之后于80μL PC缓冲液于冰上孵育半小时；然后再使用PBS溶液将细胞洗涤2-3次，用10mg/L碘化丙锭（PI）以及浓度为0.1%的RNA酶于室温条件下避光行DNA染色20min；经上述方法处理的细胞使用FACSort流式细胞仪检测分析。然后采用波长为488nm的激光进行激发，被标记的细胞发射红色荧光被FACSort流式细胞仪透镜接收；最后使用Cellquest软件对上述所测细胞的荧光强度加以处理[6]。

1.4 Ki-67/DNA双参数法检测口腔黏膜细胞增殖率 首先取已经固定好的口腔黏膜细胞液，按照转速为800rpm离心5min；经固定的细胞采用PBS洗涤2次，浓度为0.25%的Triton X-100 BSA稀释的鼠抗人Ki-67单克隆抗体于温度为4℃的条件下孵育24h；第二天再使用PBS将细胞洗涤2-3次之后，再加入标有荧光标记的FITC的羊抗鼠IgG抗体，于室温条件下避光孵育半小时；PBS溶液洗涤2-3次之后，再采用浓度为10mg/L的PI以及浓度为0.1%的Rnase A于避光、室温条件下用细胞核DNA染色约20min；使用FACSort流式细胞仪进行检测分析，经波长为488nm的激光进行激发，检测被标记的细胞发射的荧光，最后使用Cellquest软件对上述所测细胞的荧光强度加以处理[7]。

1.5 观察指标 对两组手术前后口腔黏膜细胞状态以及组间细胞状态进行比较。

1.6 统计学方法 数据均采用SPSS14.0软件加以统计及处理，计量资料均以均值±标准偏差（）的形式进行表示，采用t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组手术前后口腔黏膜细胞凋亡率及增殖率对比分析 见表1。由下表可知，两组手术前后口腔黏膜细胞凋亡率及增殖率差异均无统计学意义，且两组术后上述两个指标的差异也均无统计学意义（P>0.05）。

2.2 两组手术前后营养指标对比分析 见表2。由下表可知，两组手术前后营养指标（包括前白蛋白、转铁蛋白及视黄醇蛋白）水平相比，差异均无统计学意义（P>0.05），且两组术后上述指标差异也均无统计学意义（P>0.05）。

3 讨论

近代营养学发展日新月异，目前营养支持已成为临床综合治疗重要的措施之一，它已经由既往的辅助治疗，发展为现代临床治疗中重要部分之一，临床营养的角色从既往的营养支持正转变为营养治疗[8]。现代外科营养被认为是20 世纪后半叶医学发展的重要里程碑，据研究显示，住院病人中约有15﹪-60﹪的患者存在营养不良，并且有约50﹪为严重营养不良[9]。营养不良可导致疾病并发症发生率和医疗费用增加、住院时间延长、疾病恢复缓慢，而合理的营养支持有利于改善上述情况。特别在围手术期应用营养支持能减少手术并发症和病死率，缩短住院时间，减少医疗费用；在危重症患者给予积极的营养支持能改善预后，使机械通气时间、住ICU 时间、MODS 发生率及病死率明显下降。本研究主要对如下观察指标进行了探讨与分析：对两组手术前后口腔黏膜细胞状态以及组间细胞状态进行比较。结果显示：保乳术与乳房根治术组手术前后口腔黏膜细胞凋亡率及增殖率差异均无统计学意义，且两组术后上述两个指标的差异也均无统计学意义（P>0.05）；保乳术与乳房根治术组手术前后营养指标（包括前白蛋白、转铁蛋白及视黄醇蛋白）水平相比，差异均无统计学意义（P>0.05），且两组术后上述指标差异也均无统计学意义（P>0.05）。综上所述，手术创伤对在体口腔黏膜细胞状态不产生显著性影响。

参考文献

尹小平，龚建平.手术创伤对口腔黏膜细胞凋亡和增殖的影响[J].中华实验外科杂志，2011，28（11）：1927-1929.

高纯，魏欣，朱真闯，等.口腔黏膜细胞凋亡和增殖率与化疗患者营养状况的关系[J].华中科技大学学报（医学版），2009，38（1）：56-58.

金莉.化疗对患者口腔黏膜细胞凋亡和增殖的影响及中药的干预作用[J].浙江中医药大学学报，2012，36（2）：162-163.

罗晓秋，吴华裕，刘承武，等.巴马地区壮族人群口腔黏膜细胞端粒的长度[J].中国老年学杂志，2013，33（1）：17-20.

邹游，李小兰，肖徽.肠外瘘对患者口腔黏膜细胞凋亡和增殖的影响[J].临床口腔医学杂志，2011，27（3）：131-133.

魏欣，高纯.化疗对患者口腔黏膜细胞生长状态的影响[J].临床口腔医学杂志，2009，25（4）：199-201

金莉.化疗对患者口腔黏膜细胞凋亡和增殖的影响及中药的干预作用[J].浙江中西药大学学报，2012，36（2）：162-163.

李毅萍.hBD-2在口腔黏膜下纤维性变、扁平苔藓、口腔鳞癌中表达的研究[J].口腔医学研究，2012，28（12）：1291-1295.

罗刚，董俊英，陈谦明，等.细胞周期素D1过表达在口腔黏膜癌变过程中的作用[J].广东医学，2011，32（23）：3083-3087.