六味安消分散片对胃肠动力作用的影响

潘俊英　宋晓玲

(1.内蒙古自治区呼和浩特市蒙医中医医院，内蒙古　呼和浩特　010030；　2. 内蒙古自治区包头医学院，内蒙古　包头　014060)

六味安消散又称西吉德-6或阿木日-6，是蒙藏医常用的经典验方。制剂处方由大黄、土木香、山柰、诃子、北寒水石(煅)、碱花6味中药组成[1]，具有和胃健脾、导滞消积、活血止痛的功效；临床用于脾胃不和、积滞内停所致的胃痛胀满、消化不良、便秘、痛经[2]。《中国药典》一部1985版年至2015年版连续7版收载了该药。为便于质量控制及减低原剂型药量，提高患者顺应性，前期我们将六味安消散研制成六味安消分散片。本文将以阿托品致胃肠动力障碍小鼠为模型对六味安消分散片促胃肠动力的作用进行实验研究，进而评价六味安消分散片促进胃肠动力的作用；以“适度夹尾激惹刺激复合不规则喂养”致FD大鼠模型为研究对象，通过给予六味安消分散片治疗后，测定大鼠的离体十二指肠平滑肌收缩振幅及血浆胃动素(motilin，MTL)水平，探讨其治疗肝郁脾虚型FD可能的机制；以期为制剂的临床应用提供前期基础。

1　材料与仪器

1.1动物SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重(20±2)g，由中国食品药品检定研究院提供，动物合格证号：SCXK(京)2014-0013；SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重180～200g，由中国食品药品检定研究院提供，动物合格证号：SCXK(京)2014-0013。

1.2试剂六味安消散，由包头医学院药剂实验室自制，批号：20160727；六味安消分散片(批号：20160724)由包头医学院药剂实验室自制，制备方法：北寒水石微粉碎至粒径为40～60μm的粉末待用；碱花用8倍量的水，加热搅拌充分溶解后，滤过、滤液浓缩、干燥，粉碎待用；土木香等4味植物药材粉碎成粗粉，90%乙醇浸渍48h后渗漉至无色，收集渗漉液，回收乙醇后，浓缩至相对密度为1.18的清膏；称取处方量的清膏水浴加热软化，与矿物药粉及3%羧甲基淀粉钠、3%低取代羟丙基纤维素、35%微晶纤维素混合均匀，50%乙醇制软材，过20目筛制粒，60℃干燥，18目筛整粒后，加入5%交联聚乙烯吡咯烷酮和1%微粉硅胶，混合均匀后，压片即得。多潘立酮(西安杨森制药有限公司)，批号：160719150；硫酸阿托品注射液(芜湖康奇制药有限公司)；批号：151010；蓝色葡聚糖2000(DB-2000)(瑞典 Pharmacira，17-0360-01)；血浆胃动素ELISA检测试剂盒，购自上海羽朵生物科技有限公司。

1.3仪器Multiskan GO酶标定量测量仪(芬兰，Thermo Fisher)；UV-1780紫外可见分光光度计(岛津仪器苏州有限公司)；X1R台式高速冷冻离心机(德国、Thermo Fisher)；DF-101Z智能集热式恒温磁力搅拌器(河南省予华仪器有限公司)；BL-420生物机能检测系统(成都泰盟电子有限公司)。

2　方法

2.1六味安消分散片对小鼠胃肠动力的影响SPF级昆明小鼠，雌雄各半，体质量18～22g，随机分为空白对照组、阿托品模型组、六味安消散组(1.17g/kg，临床等效剂量)、六味安消分散片组(0.59g/kg、1.17g/kg、2.34g/kg，以原散剂剂量折算计)、多潘立酮组(4.5mg/kg)，每组10只，ig给药。六味安消散及六味安消分散片临用前分散成混悬液；空白对照组及模型组给予生理盐水15mL/kg；给药体积均为15mL/kg，1次/d。连续用药6d后，禁食(不禁水、药)18h，第7天灌胃给药1h后，除空白组腹腔注射等容积的生理盐水外，其它组均腹腔注射硫酸阿托品1mg/kg。20min后，各组均ig2%葡聚糖蓝(DB-2000)溶液0.4mL/只；20min后脱颈椎臼处死，结扎贲门及幽门处，取全胃，沿胃大弯剪开，将胃内容物分散于4mL蒸馏水中，4000r/min离心20min，取上清液置分光光度计λ620nm处测得吸光度；另取10只空白小鼠ig2%葡聚糖蓝(DB-2000)溶液0.4mL/只后立即处死，同法操作，测定胃内残留色素吸光度，作为标准管；计算胃内色素排空率[胃内色素排空率=(1-胃内残留色素吸光度/标准管色素吸光度)×100%][3]。同时迅速取各组小鼠幽门切迹至回盲部肠段，自然平铺于玻璃板上，量取幽门切迹至色素推进前端距离和至回盲部全长，计算小肠推进比；小肠推进率(%)=色素前沿至幽门的距离/小肠全长×100%。

2.2对FD大鼠离体肠平滑肌条的影响实验大鼠40只随机分成对照组、模型组、给药组、阳性对照(多潘立酮)组，每组10只。大鼠适应性饲养2周后，参考文献[4]，除空白对照组外，余组均采用“适度夹尾激惹刺激复合不规则喂养”法制备FD大鼠模型，即用纱布包裹止血钳轻度钳夹鼠尾后1/3处，立即放开，以不破皮为度，令其暴怒，寻衅与其他大鼠撕打，以激怒全笼大鼠站立对峙打斗，每次30min，4次/d；同时，予每周二、四、六禁食，余日给足量饲料，持续造模3wk；3wk后，大鼠出现扎堆，靠边，反应迟钝，易受惊吓，毛发干枯不顺，粪便交替出现变稀和坚硬等表现，可认定造模成功。造模结束次日，各组大鼠均恢复正常喂养并开始ig给药。阳性对照组ig2.7mg/kg多潘立酮混悬液，给药组ig0.81g/kg六味安消分散片混悬液(临床等效剂量，以原散剂剂量折算计)，对照组及模型组ig给予等体积生理盐水，给药体积为10mL/kg，连续7天。末次给药后，禁食不禁水18h，各组大鼠脱颈臼处死，腹主动脉采血5mL。模型组大鼠立即剖腹取2cm十二指肠段放入37℃克氏液中，处理后，连接BL-420E生物机能实验系统[5]，将肠段悬吊于盛有20mL台氏液(通氧)的恒温浴管中，上端连接拉力换能器，下端系于L形钩上固定，同时通入混合器60～80个气泡/min，稳定15min，待平滑肌收缩曲线的波形呈稳定的正余弦曲线后，先采集3min肠平滑肌收缩曲线，然后向浴管中滴加六味安消分散片混悬液，采集给药后肠平滑肌曲线。分别选1min内曲线进行处理计算，求出给药前后肠平滑肌收缩振幅。

2.3对FD大鼠血浆胃动素的影响采集的腹主动脉血置入离心管(提前加入4%柠檬酸钠抗凝)中，4000r/min离心15min，取上清，采用ELISA法测定MTL数值，严格按照试剂盒说明步骤操作。

2.4统计学方法应用SPASS17.0统计软件处理。每组均数以x±s表示，采用方差分析均采。用组间两两比较，P<0.05有统计学差异。

3　实验结果

3.1六味安消分散片对小鼠胃排空、肠推进的影响模型组小鼠胃内色素排空率和小肠推进率明显低于对照组，差异显著(P<0.01)，提示模型小鼠胃排空和肠推进功能异常，预示造模成功。

给药后，六味安消分散片1.17g/kg、2.34g/kg组及六味安消散组、多潘立酮组均有促进小鼠胃内色素排空的作用(与模型组比，P<0.01)，与对照组相比无显著性差异(P>0.05)；六味安消分散片各剂量组与六味安消散组比较差异不显著(P>0.05)。

给药后，六味安消分散片各剂量组及六味安消散组、多潘立酮组均有促进小鼠小肠推进运动的作用(与模型组比，P<0.05-0.01)，与对照组相比无显著性差异(P>0.05)；六味安消分散片1.17g/kg、2.34g/kg组与六味安消散组比较差异不显著(P>0.05)。结果见表1。

表1　六味安消分散片对小鼠胃排空、肠推进的影响

注：与阿托品模型组比较：*P<0.05，**P<0.01；与对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01

3.2对FD大鼠离体十二指肠平滑肌运动的影响将空白克氏液中大鼠离体十二指肠平滑肌的收缩振幅设定为100%，采用累积给药的方式加入药物混悬液，在一定浓度范围内，观察肠平滑肌的收缩振幅。当六味安消分散片混悬液浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5g/L时，十二指肠平滑肌的收缩振幅显著增强(P<0.05～0.01)，结果见图1。结果表明，六味安消分散片对模型大鼠离体十二指肠平滑肌自主收缩均具明显促进作用，呈浓度依赖性地增加收缩振幅，在0.5～2.5g/L浓度范围内有明显量效关系。

3.3对大鼠血浆MTL的影响FD模型组大鼠血浆MTL水平明显低于对照组，差异显著(P<0.01)，提示造模成功。给予六味安消分散片0.81g/kg治疗后的模型大鼠，其血浆MTL水平与对照组无显著性差异(P>0.05)；而给予多潘立酮治疗后的模型大鼠，其血浆MTL水平仍很低，与模型组比较无显著性差异(P>0.05)，与对照组有显著性差异(P<0.01)见表2。

表2　各组大鼠血浆MTL比较

注：与对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01，与FD模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

4　讨论

FD是临床常见的胃肠疾病之一，主要症状包括上腹痛、上腹灼热感、餐后饱胀、嗳气、食欲不振、恶心、呕吐等其中的一种或多种[6]。目前认为，FD的病理生理学基础普遍认为可能与胃肠动力障碍、胃底容受性受损、胃对机械扩张敏感性升高、十二指肠对酸及脂敏感性的改变、胃窦十二指肠运动异常、自主神经功能改变、幽门螺杆菌感染、精神应激及胃肠激素分泌失常等因素密切相关。其中，胃肠动力障碍是目前研究最为集中的病理生理机制[7]。随着人们生活节奏的加快，其发病率越来越高。祖国医学认为FD病位在脾胃，涉及肝脾两脏，饮食不节和情志所伤为其主要发病因素；饮食不节，饮食停滞，胃中气机阻滞，即所谓“饮食自倍，肠胃乃伤”，而情志所伤在肝者因恼怒伤肝。肝气郁结不得疏泄，肝木乘脾土，致胃失和降，脾失健运而出现消化不良[8]。本实验采用“适度夹尾激惹刺激复合不规则喂养”法复制肝郁脾虚FD模型，使得该模型发病过程及特征与患者的临床过程相类似，能够较真实地反映FD的自然病程。

多潘立酮为多巴胺受体拮抗剂，主要作用于周围神经系统，进而增加胃十二指肠蠕动，协调幽门收缩，促进胃排空，已被广泛用于改善FD症状，因此，本实验选作为阳性对照药物。六味安消分散片为我实验室自制中蒙药制剂，处方中土木香健脾和胃，理气解郁为君药；大黄苦寒消导积滞，泻热通肠为臣，诃子收敛止泻，与大黄相配。一泻一收，通涩各异；山奈温中行气，消食止痛为佐；寒水石清热泻火，除胃中积热，为佐药；碱花抑酸和胃。全方合用具有和胃健脾、导滞消积、活血止痛的功效[9]。现代研究表明大黄中的结合型蒽苷在细菌酶的水解作用下还原为蒽酮，它可直接作用胃肠粘膜，刺激胃肠蠕动加快；同时蒽酮还具有胆碱样作用，使平滑肌M胆碱受体兴奋，乙酰胆碱释放增多，使胃肠道的蠕动作用强，胃排空增快。此外，蒽酮还能抑制胃肠平滑肌N+-K+-ATP酶的活性，阻断钠离子从肠腔转移至细胞内，使肠腔内透压升高，肠内容物的容积扩大，增强肠道蠕动。诃子具有胃肠道粘膜保护作用，土木香则可降低胃肠道过高的运动和分泌功能，具有兴奋和抑制的双向调节作用[10]。

本实验通过测定阿托品致胃肠动力障碍小鼠的胃内色素排空率和肠推进来反映六味安消分散片促胃肠动力情况。结果显示：模型组大鼠胃内色素排空率明显低于对照组，提示胃肠功能减低。给予六味安消分散片治疗后，1.17g/kg、2.34g/kg剂量组可显著增加胃内色素排空率和肠推进率，且与传统的改善胃肠动力药物多潘立酮片(多潘立酮)相比疗效相当，提示味安消分散片1.17g/kg、2.34g/kg剂量可有效改善胃肠动力。

MTL是由十二指肠以及空肠的Mo细胞合成并分泌的由22个氨基组成的直链多肽，其与胃动素受体结合发挥生理效应，主要通过激发消化间期肌电活动Ⅲ相，促进胃强力收缩和小肠分节运动，该运动可周期性产生并向小肠远端传播，从而可加速小肠的传递时间。故血浆胃动素水平升高，肠道蠕动加速，使肠内容物通过加快[11]。有研究指出血浆MTL水平异常引起的胃动力障碍可能会是FD的病因之一[12]。本实验发现FD模型大鼠血浆MTL水平显著降低(与对照组比较)，给予多潘立酮后血浆MTL水平并未提高，而六味安消分散片组血浆MTL水平可显著提高；提示多潘立酮作用靶点并不是内分泌Mo细胞，其促进胃肠动力是通过直接阻断胃肠道的多巴胺D2受体实现的，不受阿托品的抑制；六味安消分散片(0.81g/kg)即可促进小鼠胃肠运动又能显著增加血浆MTL水平，体现出中药的多组分、多靶点及其组分间的协同作用。