6种不同来源蒙药尖叶假龙胆中齐墩果酸的含量比较

白春杰　哈申高娃

(1.内蒙古自治区通辽市食品药品检验所，内蒙古　通辽　028000；　2.内蒙古自治区通辽市科左后旗疾病预防控制中心，内蒙古　科左后旗　028100)

尖叶假龙胆来源于龙胆科植物尖叶假龙胆Gentianella acuta(Michx)Hulten的干燥全草。蒙名：阿古特-其其格，别名：苦龙胆，药用同肋柱花，是蒙、藏药中常见的5～6种地格达之一。属一年生草本，产于赤峰西部、锡林郭勒盟东部及南部、大青山、蛮汗山、乌拉山、贺兰山。分布于我国山西、宁夏、新疆；蒙古、俄罗斯(西伯利亚、远东地区)、北美也有。生于山地林下、灌丛及低湿草甸，海拔1500M以下[1-2]。根据资料记载及内蒙古习惯性用药定名为“尖叶假龙胆”，并作为正名收入质量标准。主治：黄疸，头痛，发热，口干，未成熟热，胆热。

齐墩果酸为尖叶假龙胆中所含的有效成分之一，属于香树脂醇型五环三萜类化合物，又名庆四素，土当归酸[3]广泛存在于自然界多种植物中。研究表明，齐墩果酸毒性很低，具有抗病毒，抗炎，增强免疫和抑制免疫(免疫双向调节作用)，抑制血小板凝集，降血脂，降糖，保肝，护肾，抗艾滋病毒等多种生物活性[4]。本文采用高效液相色谱法，测定6种不同来源的尖叶假龙胆中齐墩果酸的含量并加以比较，为尖叶假龙胆含量测定的进一步研究提供参考依据。

1　仪器和试剂

1.1仪器ters e2695-2998型高效液相色谱仪(美国产)，Empower 2色谱工作站，KQ5200DE型数控超声波清洗器，AE-163 型电子天平(梅特勒托利多)色谱柱：Inertsil ODS-SP C18柱 (150 ×4.6mm，粒度5μm)。

1.2试药与试剂乙腈、甲醇为色谱纯(国药集团化学试剂有限公司)；水为试验用高纯水。其它试剂为分析纯。

1.3药材及对照品6种不同来源尖叶假龙胆，1号样：购于内蒙古阿拉善蒙医院；2号样：采集于内蒙古阿拉善贺兰山南寺；3号样：采集于内蒙古呼伦贝尔市根河观光大道旁；4号样：采集于内蒙古呼伦贝尔市根河满归镇路边；5号样：采集于内蒙古呼伦贝尔市根河林业局喇嘛沟附近；6号样：购于黑龙江省漠河县特产店。齐墩果酸对照品购于中国食品药品检验研究院(110709-201607，使用前置五氧化二磷减压干燥器中干燥12h以上)。

2　方法学考察

2.1色谱条件流动相：乙腈-甲醇-0.05%乙醇胺溶液(68：15：17)；流速0.6mL/min；柱温25℃；检测波长为210nm；进样量：10μL。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品19.89mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.5mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2供试品溶液的制备： 取6批全草粉碎后过4号筛，精密称取本品细粉0.5g置50mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25mL，称重，浸泡2h，超声提取30分钟，放冷，再称重，用甲醇补足减失重量，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3线性关系的考察精密量取上述对照品溶液(19.89mL→25mL)0.125mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL和2.5mL，各置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图及峰面积值，以峰面积(A)为纵坐标，进样浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，结果表明齐墩果酸在10μg/mL～200μg/mL范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=8685.78X-838.30，r=0.9999。

2.4精密度试验精密量取对照品溶液(100μg/mL)10μL，连续进样5次，测定对照品峰面积，结果峰面积平均值为876494，RSD=0.69%，表明本实验精密度良好。

2.5稳定性试验精密量取同一批供试品溶液(1号样品)10μL，分别于0、2、4、6、8、10、12h注入液相色谱仪，测定并记录峰面积值，结果峰面积平均值为883297，RSD=0.72%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.6重现性实验取同一供试品细粉(1号)6份，精密称取各0.5g，按2.2.2制备成供试品溶液，并按上述色谱条件测定每份供试品峰面积值，按外标法计算含量。结果平均含量为5.0357mg/g，RSD=0.45%，表明本试验重现性良好。

2.7加样回收率试验精密称取含量为5.0357mg/g的供试品6份，各0.25g，置50mL具塞三角瓶中，精密加入对照品溶液(20.12mg→25mL)1.5mL，再精密加入甲醇23.5mL，按2.2.2制备成供试品溶液，并按上述色谱条件测定每份供试品峰面积值，计算回收率，结果见表1。

3　样品含量测定

取2.2.1项下方法制备对照品溶液及2.2.2项下方法制备的6批供试品溶液各10μL 注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积值，测得对照品峰面积平均值为1034193，按外标法以峰面积计算每批供试品含量，结果见表2。该条件下齐墩果酸峰保留时间为15.2min。

表2　样品中齐墩果酸含量测定结果

4　空白干扰试验

精密吸取空白溶剂10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果：溶剂在与齐墩果酸相对应的保留时间处无色谱峰，表明溶剂对齐墩果酸的含量测定无干扰。对照品、样品和空白溶剂色谱峰及对照品、样品3D图谱，见图1～2。

5　讨论

5.1含量测定本次实验通过对6种不同来源的尖叶假龙胆中齐墩果酸的含量进行测定，结果6种药材含齐墩果酸都较高，且差别不特别明显(5.02～7.07mg/g)，均是很好的蒙药材来源。

5.2样品测定试验供试品分别浸泡2h、4h与过夜，超声处理20min、30min、40min，结果浸泡2h，超声30min即可达到良好提取。

5.3检测波长的选择通过紫外分光光度计测定齐墩果酸的吸收光谱，并参照文献报道[5-7]，确定测定波长为210nm。

5.4系统适用性试验理论塔板数>8000，拖尾因子为0.96。检测过程中系统较稳定。若长时间连续测定(超过48h)，柱压会持续升高，若大批量测定建议间隔一定时间彻底冲洗色谱柱。

5.5本方法操作简便易行，灵敏度高，准确性好，专属性强，能有效控制尖叶假龙胆中齐墩果酸含量，为齐墩果酸的含量测定提供参考。