不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法对菌阴肺结核的诊断价值

段绯

贵阳市花溪区疾病预防控制中心检验科，贵州贵阳 550025

肺结核是一种临床常见的肺部慢性传染性疾病，因结核分枝杆菌感染引起，病程漫长，累及全身多个脏器[1]。菌阴肺结核是指经过1次结核菌培养与3次痰涂片检查结果为阴性的肺结核患者，传染性较低。多数患者对菌阴肺结核知识不了解，如果不及时采取有效的诊治措施就会延误病情，转为阳性，不利于患者的愈后[2]。目前临床缺乏菌阴肺结核的特异性诊断方法，该文就该辖区2016年10月—2017年10月收治的60例住院菌阴肺结核患者给予不同支气管冲洗液检测的诊断价值进行探讨，旨在为临床提供借鉴经验，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

观察对象为该辖区收治的60例住院菌阴肺结核患者，其中男患34例，女患26例；年龄22～75岁，平均（41.2±6.9）岁；病程 1 个月～3 年，平均（1.3±0.5）年；体质量 48～79 kg，平均（63.4±5.7）kg。

纳入标准：①所有患者均符合中华医学会关于肺结核的诊断标准，经支气管镜检查确诊；②痰涂片找抗酸杆菌检测3次及以上均为阴性，结核菌培养一次为阴性；①获得医学伦理会批准，均签署《知情同意书》。排除标准：①活动性肺结核患者者；②孕妇、哺乳期妇女；③患者有血痰、无力、消瘦等症状。

1.2 检测方法

支气管镜检查：采用QIF-BP66P型便携式纤维支气管镜进行检查，局部麻醉后将支气管镜从鼻腔插入支气管，观察肺及支气管黏膜有无异常症状。有明显病变患者将5～10 mL生理盐水对整个肺脏进行彻底冲洗，吸引器吸尽所有冲洗液并装于标本瓶中，检测2～3次。无明显病变患者可将支气管镜插入可疑部位，对病段或亚段支气管开口处用生理盐水冲洗。

支气管冲洗液涂片：将支气管镜采集的冲洗液标本进行实验室检测，严格按照《结核病诊断实验室检验规程》进行操作。通过萋-尼氏染色抗酸染色法检测抗酸杆菌，阳性：超过3条抗酸杆菌/300视野。

结核菌培养：采用BACTEC MGIT 960型全自动分枝杆菌快速培养仪器进行标本分离、培养。

噬菌体生物扩增法：采用武汉康珠生物技术有限公司提供的结核分枝杆菌检测试剂盒进行检测，阳性：①多个噬菌体斑融合成透明状；②噬菌斑数量超过20个；二者满足其中一个即为阳性。

荧光定量PCR法：采用KAPA定量荧光PCR法检测冲洗液结核分枝杆菌的基因数量，阳性：结核分枝杆菌基因数量超过1×103拷贝/mL。

1.3 统计方法

采用SPSS 18.00统计学软件处理数据，用（%）表示计数资料，组间对比用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阳性检测结果

结核菌培养检测阳性率为56.67%，支气管冲洗液涂片检测阳性率为30.00%，噬菌体生物扩增法检测阳性率为15.00%，荧光定量PCR法检测阳性率为33.33%，见表 1。

表1 不同支气管冲洗液阳性检测结果

2.2 不同检测方法阳性率比较

结核菌培养检测的阳性率明显优于其他方法（P＜0.05）；噬菌体生物扩增法检测的阳性率明显低于其他方法（P＜0.05），见表 2。

表2 不同支气管冲洗液阳性检测结果[n（%）]

3 讨论

我国是肺结核高发国家，其中菌阴肺结核患者超过200万，约占所有肺结核患者的50%左右[3]。病灶局限、化疗、含有L型结核菌、免疫功能障碍等因素使痰涂片结果为阳性，菌阴肺结核的传染性较阳性肺结核低，所以，早期明确结核分枝杆菌性质对治疗方案的选择具有指导意义。

支气管镜检查是临床诊断肺结核的有效方法，可以直观观察病灶情况。利用活检钳、毛刷刺激肺泡、支气管，生理盐水冲洗可以疏通支气管，增加排痰量，采集冲洗液标本进行细菌学检查。同时，将生理盐水注入肺实质、远端气道，病灶接触范围广，刺激咳嗽，有利于排除结核杆菌，吸引器能够搜集大量冲洗液，提高检出率[4-5]。抗酸染色涂片是细菌学检查的基本方法，通过石炭酸复红初染、盐酸酒精处理、碱性美兰复染后结核分枝杆菌为红色，对结核分枝杆菌敏感性强。分枝杆菌细胞壁中的肽聚糖外周包裹着大量脂质，难以着色，且与燃料结合后酸性脱色剂难以脱色[6-7]。所以，通过抗酸染色可以判断患者体内是否存在结核分枝杆菌，操作简单。该文中60例患者检出阳性率为56.67%，检出率高，是临床诊断肺结核的金标准[8]。但是结核菌培养抗酸染色耗时约为20 d甚至更长，检查费用昂贵，存在明显的不足。荧光定量PCR法利用荧光标记的寡核苷酸探针或荧光染料，对结核菌的某个特定核酸序列的DNA拷贝数量进行快速体外扩增至百万倍，通过DNA探针、PCR杂交技术观察荧光变化情况，记录NDA模板定量[9]。具有敏感度高、检测时间短，在早期诊断中有着明显优势。但是该方法对仪器设备、技术、人员要求高，假阳性结果较多，如表1中阳性率仅为33.33%。噬菌体生物扩增法利用结核分枝杆菌噬菌体对活性结核分枝杆菌的感染作用大量繁殖，裂解菌体后释放子代噬菌体，快速感染指示细胞，裂解后产生噬菌斑[10]。而其他不能感染的噬菌体加入杀毒剂后会失去活性，通过噬菌斑数量可以判断是否存在结核分枝杆菌。该法对技术、检验设备要求低，24 h即可检出。该文中阳性检出率仅为15.00%，可能与标本采集不当、活性菌量少、感染时间、噬菌体浓度等因素有关，还需扩大试验样本，提高准确率[11]。

综上所述，结核菌培养对菌阴肺结核诊断敏感性高，是临床诊断肺结核的金标准。支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法阳性率也较高，而噬菌体生物扩增法阳性检出率相对较低，应结合临床实际情况选择最佳诊断方式，尽早确诊，及时诊治。

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