奶牛大肠杆菌性乳腺炎耐药性试验

郭海涛,牟瑞营,王 哲

(1.吉林大学动物医学学院,吉林 长春 130062;2.山东省临朐县畜牧局,山东 临朐 262600)

奶牛乳腺炎在全世界均为高发疾病,患病奶牛的乳产量和乳品质会严重下降,严重者可导致败血症的发生,不仅给奶牛养殖业带来巨大的经济损失,还会危害人类的健康。引起奶牛发生乳腺炎的病因复杂,病原菌感染是导致该病发生的最主要原因,其中大肠杆菌是导致奶牛乳腺炎发生重要常见的病原菌之一。目前,对于奶牛乳腺炎的防治还是以抗生素为主,不合理的使用抗生素会导致耐药菌株的出现,以及药物残留等副作用,使该病的防治更加困难,也是近年来临床上奶牛乳腺炎的发病率居高不下的主要原因。笔者所在山东省临朐县是奶牛养殖大县,奶牛乳腺炎的防病率近年来均无下降趋势,本试验主要的目的为分离培养临朐县奶牛养殖场患有临床型乳腺炎奶牛乳内的大肠杆菌,并且对其耐药性进行检测,旨在为奶牛乳腺炎防治药物选择上提供参考。

1 试验与材料

1.1 试验动物 选自山东潍坊临朐县5个规模化奶牛场。

1.2 试剂 药敏试纸、水解酪蛋白琼脂(杭州微生物试剂有限公司);细菌微量生化鉴定管、营养肉汤、血琼脂培养基、伊红—美蓝培养基、高盐甘露醇、麦康凯琼脂、绵羊鲜血琼脂、血清琼脂(青岛海博生物技术有限公司)。

1.3 临床型乳腺炎诊断方法 检查局部是否有红肿热痛特征,乳汁的颜色是否异常,是否有硬块、凝块、絮状物,甚至化脓或出现水样乳汁。

1.4 采样方法 提前将灭菌的离心管准备好,标注日期、奶牛区号、奶牛耳标号。用温水清洗奶牛乳房后,用干净的纸巾擦干,再用消过毒的毛巾进行擦拭,用镊子夹取酒精棉球按螺旋方式由乳头开始擦拭乳房周围,在弃去前3次奶后,将患牛奶样挤入备好的离心管中,封好,冷冻保存。

1.5 主要致病菌分离鉴定 将患牛奶样放置室温,自然融化后,振荡混匀。用200 μL移液枪吸取奶样滴在含有培养基的平皿上,用接种环均匀涂抹在各个培养基上,随后将涂好的培养基放置到37℃恒温箱中温育24～48 h,观察并记录细菌生长形态、大小等。

1.5.1 金黄色葡萄球菌的分离鉴定 在高盐甘露醇琼脂中呈现黄色或红色小菌落,在血琼脂平皿中形成光滑、隆起、颜色金黄色、中等大小面积的菌落,有溶血现象。镜检呈典型的葡萄球状,可在肉汤中生长,并能分解甘露醇,凝固酶实验呈阳性[1]。

1.5.2 大肠杆菌的分离鉴定 可在普通平皿、伊红—美蓝平皿、鲜血平皿上生长,形成较大的菌落。肉汤培养中,下层会出现明显的沉淀,上层出现菌环,肉汤变浑浊。为革兰阴性菌,镜检细菌形态呈现短杆状[2]。

1.5.3 链球菌的分离鉴定 鲜血平皿生长出半透明、圆形隆起、露滴状菌落,呈α、β或γ溶血,镜检为短链、长链状排列。肉汤培养中,形成浑浊的菌液[3]。

1.5.4 棒状杆菌的分离培养与鉴定 伊红—美蓝培养基上形成体积较小的菌落,普通琼脂上生长不良,染色为革兰氏阳性菌,镜检细菌形态呈现棍棒状态[4]。

1.5.5 沙门菌的分离培养与鉴定 麦康凯琼脂培养基上呈现边缘整齐、半透明状、扁平的菌落。染色镜检为革兰阴性菌。

1.6 药敏试验 利用K-B纸片琼脂扩散法进行检测。最后用游标卡尺测量,记录抑菌圈直径,具体判定标准见表1。

表1 药敏试验评判标准

2 结果

2.1 主要致病菌分离鉴定结果 经过对患牛乳样进行分离鉴定,本县牛场大肠杆菌是奶牛乳腺炎的主要病原菌,占所有感染菌的52.6%,其次是链球菌,占23.1%。结果见表2。

表2 病原菌检出率

2.2 药敏试验检测结果 对本县牛场乳腺炎的主要致病菌大肠杆菌进行药敏试验,结果见表3,头孢噻呋对大肠杆菌高度敏感,其余多数药物均有抑菌作用。

表3 药敏试验判定结果

3 讨论

3.1 乳腺炎是母畜乳腺的炎症,多发生在乳用家畜,特别是奶牛乳腺炎更为常见,其特点是乳中体细胞特别是白细胞增多,以及乳腺组织发生病理变化。本病不仅影响产奶量,造成重大的经济损失,而且影响鲜乳的品质,危害人类的健康。导致乳腺炎的病因有很多种,包括乳房受到摩擦、挤压、碰撞等机械因素;体内某些脏器疾病产生的内毒素,饲料、饮水或药物中的毒素也可能导致乳腺炎的发生;此外也与遗传因素有关,但是引起奶牛乳腺炎发生的最常见的因素为病原微生物感染。病原微生物种类繁多,有细菌、真菌、霉形体等,其中大肠杆菌是一种导致该病发生的常见病原菌。

3.2 本试验中在临朐县5个不同的牛场采集了60份临床型乳腺炎的样本,对其致病菌进行分离培养鉴定,结果导致奶牛乳腺炎的主要致病菌为大肠杆菌和链球菌,通过药敏实验结果表明,分离培养的大肠杆菌对多种抗生素均具有不同程度的耐药性,对头孢噻呋敏感,提示该地区奶牛乳腺炎可以考虑应用头孢噻呋治疗。

参考文献:

[1] 柳旭伟,葛文霞,杨力伟,等.奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其药敏试验[J].上海畜牧兽医通讯,2014(2):50-51.

[2] 许有盼.奶牛乳房炎源大肠杆菌的分离鉴定[J].中兽医学杂志,2017(6):45.

[3] 梁瑞琴,刘强.奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定[J].畜牧与饲料科学,2009,30(2):64～65.

[4] 肖林晋,孙延鸣.犊牛棒状杆菌的分离鉴定[J].畜牧与兽医,2014,44(9):79～81.