枸杞多糖免疫增效剂对高龄蛋鸡抗体水平和细胞因子分泌的影响

王建东，马吉锋，侯鹏霞，于 洋，梁小军

(宁夏农林科学院动物科学研究所，宁夏银川 750002)

高龄蛋鸡由于法氏囊和胸腺等主要免疫器官退化，机能逐渐衰退[1-2]，导致机体免疫力下降。枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharides,LBP)是中药枸杞的主要免疫活性成分，无论是对正常动物还是对免疫功能低下动物，LBP均能有效提高其细胞免疫和体液免疫功能[3]。枸杞多糖主要作用于T细胞、细胞毒性T细胞(cytotoxic T cell，CTL)、自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)及腹腔巨噬细胞，增强机体的细胞免疫功能和免疫监视系统的功能，其主要作用是诱生免疫球蛋白和细胞因子[4]。本文主要是探索自制枸杞多糖免疫增效剂在提高高龄蛋鸡免疫机能方面的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 免疫增效剂 自制蛋鸡枸杞多糖免疫增效剂，剂型为单一成分散剂，枸杞多糖用量为每日0.2 g/只，其他成分为扩容剂。

1.1.2 试验用动物 选择体况、品种相同的高龄蛋鸡20只，每天饲喂同样的全价粉状饲料120 g，自制免疫增效剂用少许的粉状饲料扩容。一次拌好7 d的量放置阴凉处，每天定时定量饲喂含有自制蛋鸡枸杞多糖免疫增效剂的饲料，试验周期为7 d。分别在试验第0、7、14天各采血1次，将0 d作为对照组，14 d、7 d和0 d进行对照。

1.1.3 主要试剂 蛋鸡免疫球蛋白G(IgG) (批号：20160820)、免疫球蛋白M(IgM) (批号：20160820)、免疫球蛋白A(IgA)(批号：20160820)、白细胞介素2(IL-2)(批号：20160822)、白细胞介素13(IL-13)(批号：20160822)、白细胞介素9(IL-9)(批号：20160812)、白细胞介素17(IL-17)(批号：20160825)、γ干扰素(IFN-γ)(批号：20160820)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)(批号：20160814)等9项指标的定量检测卡，R&D公司产品。

1.1.4 主要仪器 酶标仪(SM-3)，北京天石天力公司产品；自动洗板机(ST360W)，上海科华公司产品；电热恒温器(HH-W21-600)，天津泰斯特有限公司产品；离心机(TDL80-2B)，上海安亭科学仪器有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 试验鸡处理方法 试验鸡未进行分组，采用0、7、14 d进行组内比较。

1.2.2 血样采集 各组翅下静脉采血0.5 mL，室温放置1 h，将血液凝固与管壁剥离，使血清充分析出，然后于2 000 r/min离心10 min，收集血清。

1.2.3 采血时间 每天饲喂同样的饲料，同时每天定时定量饲喂自制蛋鸡枸杞多糖免疫增效剂，试验周期7 d。分别在试验0、7、14 d各采血1次。

1.2.4 外周血液各种免疫因子含量的检测 采用鸡免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和细胞因子IL-2、IL-13、IL-9、IL-17、IFN-γ、TNF-β酶联免疫分析(ELISA)试剂盒，其含量测定严格按照ELISA试剂盒说明书步骤操作。

1.2.5 统计分析 结果应用Excel和Spss13.0进行统计，单因素方差分析进行数据间差异性分析。

2 结果

检测结果见表1和表2。通过检测免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和细胞因子IL-2、IL-13、IL-9、IL-17、IFN-γ、TNF-β等9个指标，从其产生的消长规律全面了解枸杞多糖免疫增效剂对提高高龄蛋鸡机体免疫水平效果。

从表1可以看出，高龄蛋鸡连续饲喂枸杞多糖免疫增效剂7 d，血清IgA、IgM、 IgG含量都升高，第14天时IgA、IgM、 IgG含量继续升高，且第7、14天含量极显著高于0 d (P<0.01)。结果表明，饲喂枸杞多糖免疫增效剂7 d后，机体免疫球蛋白的水平均大幅高于0 d。

表1 枸杞多糖免疫增效剂对高龄蛋鸡免疫球蛋白含量的影响

注：同列角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

Note：Values with same letters mean no significant difference in the same column(P>0.05),and with different small letters mean significant difference(P<0.05),and with different capital letters mean extremely significant difference(P<0.01).

表2 枸杞多糖免疫增效剂对蛋鸡细胞因子含量的影响

注：同列角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

Note：Values with same letters mean no significant difference in the same column(P>0.05),and with different small letters mean significant difference(P<0.05),and with different capital letters mean extremely significant difference(P<0.01).

从表2可以看出,饲喂枸杞多糖免疫增效剂7 d时，IL-2、IL-13、IL-17、IL-19含量都升高,到第14天时含量开始下降,低于第7天、高于0 d。统计分析饲喂7 d时，均极显著高于0 d(P<0.01)；饲喂枸杞多糖免疫增效剂14 d时，IL-17含量极显著高于0 d(P<0.01),IL-2、IL-13、IL-19含量与0 d差异不显著(P>0.05),但均高于0 d。

TNF-β、INF-γ饲喂枸杞多糖免疫增效剂7 d时，含量都升高,到第14天时含量开始下降,低于第7天、高于0 d。统计分析饲喂7 d时，TNF-β在饲喂7 d、14 d TNF-β含量极显著高于0 d(P<0.01) ，表明饲喂枸杞多糖免疫增效剂7 d后，机体肿瘤坏死因子的水平均大幅高于饲喂前。INF-γ在饲喂枸杞多糖免疫增效剂7 d时，含量极显著高于0 d(P<0.01), 饲喂枸杞多糖免疫增效剂14 d，INF-γ含量与0 d差异不显著(P>0.05)，但含量高于0 d。表明饲喂枸杞多糖免疫增效剂7 d后，机体γ干扰素的水平均高于饲喂前。由此可以看出，饲喂7 d后，高龄蛋鸡机体各种免疫因子均高于饲喂前。

3 讨论

3.1 中草药对蛋鸡及高龄蛋鸡免疫力影响

免疫器官是动物实现免疫的重要场所，高龄蛋鸡免疫器官开始退化。在此期间，有研究表明,添加一定量的多糖或者维生素都能提高部分免疫指数，张玉等[5]研究表明，葡萄原花青素能提高产蛋后期蛋鸡生产性能和抗氧化能力，李晓丽等[6]研究表明，甘草提取物对产蛋后期蛋鸡生产性能及蛋品质都有所提高，王建东等[7]研究表明，中草药中的有机酸能调节胃肠道pH，防止有害菌的繁殖,能提高酶的活性，加快鸡体内蛋白质和能量转化，提高蛋鸡的生产性能。

3.2 枸杞多糖对高龄蛋鸡体液免疫功能的影响

产蛋后期蛋鸡外周血中免疫球蛋白含量的高低能反映该时期的免疫力，免疫球蛋白可以间接反映动物机体的体液免疫功能。本试验通过检测外周血中IgG、IgA、IgM含量的变化，从而反映该时期蛋鸡机体免疫状态[8]。有研究表明，中草药配方能有效提高产蛋后期蛋鸡免疫力，促进肠道有益微生物的增殖，试验组IgG、IgM、T淋巴细胞转化率和IL-2均显著升高[9]。连续饲喂7 d枸杞多糖免疫增效剂，IgA、IgM、 IgG含量呈上升的趋势，且第7、14天含量极显著高于0 d (P<0.01)。表明饲喂7 d后，机体免疫球蛋白的水平均大幅高于饲喂前，说明饲喂7 d，即可提高鸡机体免疫力。蛋鸡在产蛋后期阶段免疫下降，表现为免疫球蛋白的减少，这些变化可能是导致产蛋后期蛋鸡发病率较高的原因之一。本试验结果说明在产蛋后期蛋鸡饲喂枸杞多糖，均可提高蛋鸡外周血中免疫球蛋白含量。

3.3 枸杞多糖对高龄蛋鸡细胞免疫功能的影响

细胞因子可分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等，可以间接反映动物细胞免疫功能，产蛋后期蛋鸡外周血中细胞因子含量的高低能反映该时期的免疫力。通过本试验检测外周血中IL-2、IL-13、IL-9、IL-17、IFN-γ、TNF-β含量的变化，从而反映该时期蛋鸡机体免疫状态，在饲喂7 d时，IL-2、IL-13、IL-17、IL-19含量均极显著高于0 d(P<0.01)，饲喂14 d时，IL-17含量极显著高于0 d(P<0.01),IL-2、IL-13、IL-19含量与0 d差异不显著(P>0.05),但均高于0 d。说明饲喂7 d即可提高鸡细胞免疫力。

TNF-β在饲喂7 d和14 d时，含量极显著高于0 d(P<0.01) ，表明饲喂7 d后，机体肿瘤坏死因子的水平均大幅高于饲喂前。INF-γ在饲喂7 d时含量极显著高于0 d(P<0.01), 饲喂14 d，INF-γ含量与0 d差异不显著(P>0.05)，但含量高于0 d。表明饲喂7 d后，机体INF-γ的水平均大幅高于饲喂前，说明饲喂7 d，即可提高鸡机体免疫力。枸杞多

糖能在体内或体外通过提高细胞因子的分泌量或其基因表达或增强细胞因子的作用而发挥免疫调节功能。据报道，通过一定量的枸杞多糖能使淋巴细胞INF-γ mRNA的表达水平明显升高；枸杞多糖能促进淋巴细胞产生IL-2和TNF-α，并呈现浓度依赖性[10]。

参考文献:

[1] 王 棚.牛蛙皮肤抗菌肽Catesbeianin-1在PichiaPink中表达条件的优化及其粗提物对产蛋后期鸡的影响[D].吉林长春:吉林大学,2016.

[2] 裴跃明,邵 强,吴桂龙,等.枯草芽孢杆菌制剂对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、免疫及肠道菌群的影响[J].中国畜牧杂志,2016,52(7):61-65，70.

[3] Kevin K P,Joseph W L,Jackie N C,et al.Protective effect ofLyciumbarbarumpolysaccharides on dextromethorphan-induced mood impairment and neurogenesis suppression[J].Brain Res Bull,2017,134(9):10-17.

[4] 刘英娟,杜金梁,贾 睿,等．枸杞多糖对四氯化碳致建鲤急性肝损伤的保护作用[J]．浙江农业学报，2015，27(1):37-43．

[5] 张 玉,武书庚,王 晶,等．葡萄原花青素对产蛋后期蛋鸡生产性能和抗氧化能力的影响[J]．动物营养学报,2016，28(4):1129-1136.

[6] 李晓丽,何万领,张 才,等．甘草提取物对产蛋后期蛋鸡生产性能及蛋品质的影响[J].中国兽医学报,2015,35(8):1361-1364.

[7] 王建东，马吉锋，李艳艳，等.枸杞多糖对动物免疫系统的影响[J].黑龙江畜牧兽医,2014(15):66-68.

[8] 孙晓雨,崔子寅,张明亮，等.枸杞多糖和茯苓多糖对免疫抑制小鼠免疫增强及对肠道黏膜的免疫调节作用[J].中国兽医学报,2015(35):450-453.

[9] 曹满湖，莫迎春，龙虹锦，等.中草药剂型对产蛋后期蛋鸡免疫力的影响[J].湖南饲料,2016(3)：35-38.

[10] Zhu X,Hu S,Zhu L,et al.Effects ofLyciumbarbarumpolysaccharides on oxidative stress in hyperlipidemic mice following chronic composite psychological stress intervention[J].Mol Med Rep,2015,11(5):3445-3450.