温和灸肾俞穴对衰老大鼠血清MDA及肝肾功能的影响

马金丹，黄 艳，顾沐恩，方臻臻，马 喆，赵 琛，殷之光*

（1.上海中医药大学，上海 201203；2.上海市针灸经络研究所，上海 200030）

世界卫生组织（WHO）明确强调：健康寿命比寿命更重要，最终目的是提高人口的健康寿命[1-3]。本课题组以往开展了有关针灸延缓衰老的临床研究，结果显示，艾灸可明显改善老年人衰老相关症状，增强老年人外周血单个核细胞Bcl-2、PKC 表达[4]，并从衰老相关基因筛选、衰老信号传导通路调控等方面研究艾灸抗衰老的调控机制[5]。但衰老的发生发展是机体功能状态的时空渐变，随时间的渐进性，衰老的进程由密变疏逐步弱化而衰退[6]。因此，现阶段关于抗衰老的研究热点已从方法与手段过渡到时序方案。本研究基于自然衰老大鼠模型，通过检测大鼠血清MDA含量变化，观察不同时序艾灸肾俞穴延缓衰老效应，并探索长期艾灸肾俞穴的安全性，为进一步阐明衰老的发病机制及不同时机艾灸延缓衰老的作用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 动物 选用12月龄，体质量（600±20）g，雄性清洁级SD大鼠40只（上海中医药大学动物实验中心）；温度22～27 ℃，相对湿度为50%～70%。所有大鼠自由饮水进食，进行适应性饲养，1周后如无不良反应，饮食饮水正常，则可纳入正式实验。

1.2 试剂与仪器 特制细艾条（南阳汉医艾绒有限责任公司）。TBA试剂盒（南京建成生物研究所）；ELISA试剂盒（上海源叶生物有限公司）。

1.3 分组与治疗

1.3.1 分组 40只大鼠随机分为4组，分别为24月龄对照组、艾灸1组、艾灸2组、18月龄对照组，每组10只。

1.3.2 治疗 18月龄对照组（n = 10）：饲养至18月龄，不进行治疗。24月龄对照组（n = 10）：饲养至24月龄，不进行治疗。艾灸1组（n = 10）：从大鼠12月龄开始艾灸肾俞穴（穴位定位参照李忠仁主编《实验针灸学》，中国中医药出版社，2003），采用直径5 mm小艾条点燃后在距离穴位2 cm处施灸，两侧肾俞交替操作，1次/d，20 min/次，直至18月龄，再饲养至24月龄。艾灸2组（n = 10）：从大鼠18月龄开始艾灸肾俞穴，采用直径5 mm小艾条点燃后在距离穴位2 cm处施灸，两侧肾俞交替操作，1次/d，20 min/次，直至24月龄。

1.4 标本采集 18月龄对照组大鼠于饲养至18月龄时处死取材，其余4组均在24月龄时处死取材。实验结束后，大鼠24 h禁食、不禁水。2%戊巴比妥钠50 mg/kg行腹腔注射，待大鼠麻醉后，取腹主动脉血4～5 mL，离心制备血清待检。

1.5 指标检测 采用TBA方法检测各组大鼠血清MDA含量变化。采用ELISA方法检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）以及血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量变化。

1.6 统计学方法 采用SPSS 13.0 统计软件进行数据分析。计量资料数据服从正态分布，采用均数±标准差（）表示；不服从正态分布，则以中位数（四分位间距）M（Q）表示。数据方差齐时，采用单因素方差分析，两两比较采用最小显著差法（LSD）；方差不齐时采用Games-Howell比较组间差异。数据不符合正态分布，组间比较采用Kruskal-Wallis H 检验，两两比较则采用Mann-Whitney U检验。检验水准为α = 0.05。

2 结果

2.1 最终纳入实验各组大鼠数量 18月龄对照组大鼠没有出现死亡情况，24月龄对照组大鼠死亡2只、艾灸1组大鼠死亡2只，艾灸2组死亡2只，故最终纳入实验的为18月龄对照组（n = 10）、24月龄对照组（n = 8）、艾灸1组（n = 8）、艾灸2组（n = 8）。2.2 大鼠血清MDA含量的比较 见表1。

表1 大鼠血清MDA含量比较（） nmol/mL

表1 大鼠血清MDA含量比较（） nmol/mL

注：与18月龄对照组比较，## P＜0.01；与24月龄对照组比较，△△ P＜0.01

组 别 n MDA 18月龄对照组 10 2.09±0.85 24月龄对照组 8 4.36±0.55##艾灸1组 8 2.46±0.77△△艾灸2组 8 2.12±0.67△△

2.3 各组大鼠血清AST、ALT水平比较 见表2。

表2 各组大鼠血清ALT、AST水平比较 U/L

2.4 各组大鼠血清CRE、BUN水平比较 见表3。

表3 各组大鼠血清CRE、BUN水平比较（x±s）

3 讨论

肾俞穴出自《灵枢·背腧》，别名少阴俞，与肾相应，属足太阳膀胱经。肾俞穴是肾中精气输注的部位，中医认为，通过刺激肾俞穴能够益精补肾、培补肾元，又可以缓解腰肌劳损[7-8]。现代医学研究[9-10]认为，刺激肾俞穴可以通过抗氧化、提高免疫力、改善神经内分泌等途径达到延缓衰老的目的。

抗衰老治疗已经广泛并运用在人体衰老的进程中，研究[11-12]认为，对于不同时间艾灸干预的对衰老的干预效应不同，针灸在不同时间窗的介入对机体产生的生物学效应存在差异。本研究中，艾灸1组从大鼠12月龄开始艾灸，灸至18月龄，灸时半年，即从大鼠壮年期开始灸至初老期；艾灸2组从大鼠18月龄灸至24月龄，灸时也为半年，即从大鼠初老期灸至衰老期，比较艾灸介入时间的不同。结果显示，衰老大鼠血清MDA水平升高，而2组艾灸组对MDA的影响效应相当，可以推测，对于氧化应激所致衰老，艾灸1组与艾灸2组的时间对其影响并无明显差别。而对BUN的调节，艾灸2组的调节作用更明显，这也可能与艾灸1组介入时间较早，其效应未能持续至24月龄有关。

MDA的水平高低可以直接反应出机体氧自由基水平，以及过氧化反应的强度和速率，是反映因过氧化导致机体组织和细胞损伤程度的重要指标[13]。因此MDA作为氧化应激系统的重要指标被广泛研究[14]。本实验结果显示，衰老大鼠血清MDA水平随着组织的衰老而逐渐升高，艾灸肾俞穴可以通过降低自然衰老大鼠肾血清MDA水平，产生抗衰老作用。本研究结果显示，各组大鼠血清MDA的表达：与18月龄对照组比较，24月龄对照组大鼠血清MDA含量明显升高，与24月龄对照组比较，艾灸1组、艾灸2组血清MDA水平均有明显降低（P＜0.01），但不同介入时间比较，艾灸1组与艾灸2组并无统计学意义。

本研究结果表明，与18月龄对照组比较，24月龄对照组大鼠血清ALT、BUN含量明显升高，而艾灸后艾灸1组、艾灸2组血清ALT及AST表达与24月龄对照组比较无差异，艾灸2组大鼠血清BUN水平降低。提示了本研究所采用的艾灸疗程与剂量，对自然衰老大鼠肝功能无损害，并且对其肾功能有一定的改善作用。这也与祖国医学理论中的“治未病”概念相符合[15]。

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