参景固本方对D -半乳糖致亚急性衰老模型小鼠的抗氧化作用

周丽雅，李 欣，柴晶美，杨阿龙

（长春中医药大学，长春 130117）

衰老是随年龄增加而导致机体各组织脏器出现退行性改变的一系列过程[1]。由于人口老龄化的日渐增长，关于抗衰老研究已成为医学领域研究的热门课题，因此，寻找有效的抗衰老措施使人类保持健康，延缓衰老具有重要意义。参景固本方以人参、红景天、山楂等中药组成，人参大补元气，补脾益肺，生津，安神益智；红景天健脾益气，清肺止咳，活血化瘀；山楂散瘀行气，消食化积[2]。纵观全方，补中寓清，可用于增强机体免疫力，抗氧化，更适用于亚健康人群扶正固本，达到延缓衰老的目的。本研究采用D -半乳糖诱导致亚急性衰老模型小鼠，观察其学习记忆能力、胸腺指数、脾脏指数及脑组织中相关指标，进一步分析参景固本方抗氧化，延缓衰老的作用机制，为其临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 SPF级昆明种小鼠70只，雌雄各半，体质量18～22 g（许可证号SCXK[辽]2015－0001）。参景固本汤组成：人参、红景天、山楂（由安徽易元堂中药饮片有限公司提供）。按照常规煎煮药材方法制成1 g生药材/mL的药液，4 ℃冷藏备用。D -半乳糖（源叶生物）；金匮肾气丸（北京同仁堂），维生素E（天之海药业），MOD、SOD、GSH-Px 试剂盒( 南京建成生物制品研究所)

1.2 方法

1.2.1 分组、造模与给药 将70只小鼠随机分为7组，分别为正常对照组，模型组，参景固本方低（4 g/kg）、中（8 g/kg）、高剂量组（16 g/kg），金匮肾气丸组（1.5 g/kg）及维生素E组（40 mg/kg），每组10只，雌雄各半，自由饮食饮水。适应性喂养2 d后进行实验，实验前记录小鼠初始体质量。正常对照组和模型组灌胃等量生理盐水，参景固本方组灌胃给药，1 次/d；同时除正常对照组外全部小鼠按125 mg/kg剂量颈背部皮下注射D -半乳糖[3]，正常对照组以等体积生理盐水注射，灌胃与注射同时进行，连续42 d。

1.2.2 水迷宫实验 利用WMT-200小鼠水迷路实验箱测定小鼠在水迷宫中进入盲区的错误次数和到达站台所需时间。实验前将小鼠放置在台上适应 15 s，然后将小鼠随机从不同区域放入水迷宫内，小鼠游上台 3 s后记录所用时间，最长时间不超过 2 min（若2 min 内未能上台，帮助小鼠游上台适应片刻，再将小鼠放回笼）。如此将小鼠置入游泳池，实验用时3 d，每天每只小鼠训练3次，共训练9 次。计算每组小鼠成功寻台时间和错误次数的平均值，以评价其空间学习记忆能力[4-5]。

1.2.3 小鼠各脏器指标的测定 末次给药后称量各小鼠体质量。小鼠麻醉后，完整剥离胸腺与脾脏，用生理盐水冲洗2次后滤纸吸干水分，进行称重。计算增重率、胸腺指数及脾脏指数。

1.2.4 脑组织中MDA、SOD和T-AOC值的测定 颈椎脱臼处死后迅速取脑组织，用冰冷的生理盐水冲洗后，取部分脑组织低温环境下匀浆取上清液备用。按照试剂盒说明书的操作步骤，测定MDA、SOD及T-AOC值。

1.3 统计学方法 数据采用统计学软件SPSS 19.0进行分析，结果以均数±标准差（）表示，组间比较进行t检验，多组均数间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 行为学观察 连续给药5周后正常对照组小鼠精神状态良好，食欲较好，毛色亮白，皮肤有弹性，行动敏捷；与正常对照组比较，模型组则进食量减少，毛色比较干枯，毛发稀疏易脱落，喜静恶动，反应迟钝；参景固本方组小鼠在饮食行动，毛发方面均比模型组较好。

2.2 对小鼠学习记忆能力的影响 见表1。

表1 水迷宫实验结果（ ，n = 10）

表1 水迷宫实验结果（ ，n = 10）

注：与正常对照组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△△P＜0.01；与维生素E组比较，▲P＜0.05

组 别 寻台时间/s 错误次数正常对照组 25.59±18.76 2.60±2.04模型组 54.94±22.31## 2.94±0.99低剂量组 30.68±18.57△△ 2.41±1.06中剂量组 26.05±13.41△△ 2.13±1.14高剂量组 23.07±16.21△△ 1.50±0.85△△▲金匮组 29.76±15.01△△ 1.50±1.08△△▲维生素E组 30.25±18.64△△ 2.50±1.09

2.3 小鼠各脏器指标比较 见表2。

2.4 对脑组织中MDA、SOD及T-AOC值的影响 见表3。

表2 各组小鼠增重率、胸腺指数及脾脏指数比较（，n = 10）

表2 各组小鼠增重率、胸腺指数及脾脏指数比较（，n = 10）

注：与正常对照组比较，# P＜0.05；与模型组比较，△ P＜0.05，△△ P＜0.01；与金匮组比较，▲ P＜0.05，▲▲ P＜0.01；与维生素E组比较，☆☆ P＜0.01

组 别 增重率 胸腺指数 脾脏指数正常对照组 0.77±0.16 1.50±0.65 4.33±1.14模型组 0.64±0.11# 1.12±0.22# 3.34±0.27#低剂量组 0.63±0.18△▲▲ 1.15±0.25▲ 4.18±0.64▲中剂量组 0.66±0.13△▲▲ 1.40±0.49 4.56±1.41△高剂量组 0.51±0.10△△▲▲☆☆ 1.78±0.19△△ 4.60±0.47△△金匮组 0.74±0.08 1.69±0.55△△ 5.13±1.17△△维生素E组 0.86±0.14△△ 1.32±0.22 4.45±0.52△

表3 各组小鼠脑中MDA含量、SOD、T-AOC活性比较（，n = 10）

表3 各组小鼠脑中MDA含量、SOD、T-AOC活性比较（，n = 10）

注：与正常对照组比较，# P＜0.05，## P＜0.01；与模型组比较，△ P＜0.05，△△ P＜0.01

组 别 MDA SOD T-AOC

3 小结

本实验研究结果发现，在连续42 d的药物注射后D -半乳糖致亚急性衰老模型的小鼠会出现记忆障碍，到达站台所需时间明显延长，出错次数增多，增重率、胸腺指数及脾脏指数明显低于正常对照组，同时脑组织中MDA含量显著增加，SOD、T-AOC活性明显减低。实验结果表明，经参景固本方治疗后，结果显示寻台时间明显缩短，错误次数减少，提示对记忆减退有一定改善作用。胸腺指数和脾脏指数的增加表明参景固本方对衰老小鼠的胸腺，脾脏的萎缩有一定的延缓作用[6-12]。用参景固本方干预后可提高脑组织中SOD活性及T-AOC含量，进而减少MDA含量，结果提示，参景固本方可通过提高抗氧化酶的活力来减少脂质过氧化物的生成，从而提升机体抗氧化、抗衰老的作用[13-16]。

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