细胞角蛋白7、8和10/13在不同级别宫颈病变中的表达及意义

潘嫱微，陈大可，潘嘉佳，张月辉，沙丽晓，杨洁，沈晓露，陈育梅，潘丹

子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤[1]，子宫颈上皮内瘤变（CIN）与子宫颈癌密切相关，大部分（60%）子宫颈低级别鳞状上皮内瘤变（LSIL）可自行消退，但子宫颈高级别鳞状上皮内瘤变（HSIL）具有癌变潜能，约20%可进展为浸润癌，被视为癌前病变[2]。细胞角蛋白（CK）是一种细胞中间丝蛋白，在细胞分化的不同阶段及不同类型的上皮细胞表达不同，目前已经发现的在人类上皮细胞中表达的就有54种亚型，但研究较多的1～20型[3]。CK的不同类型取决于其酸碱性，同时取决于其分子量和分布的上皮的类型不同。很多研究表明，在宫颈肿瘤的发生发展过程中CK的表达模式会发生改变[4-6]。本研究拟探讨CK7、CK8及CK10/13在不同级别宫颈病变中的表达及意义，报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料 收集2015年1月至2017年6月浙江省温州市人民医院收治的行宫颈电环行切除术、宫颈锥切术或全子宫切除术患者100例，其中术后病理证实为LSIL 50例（LSIL组），术后病理证实为HSIL 50例（HSIL组）；同期收治的行全子宫切除术或广泛子宫切除术+盆腔淋巴结清扫术患者50例，术后病理证实为宫颈鳞癌（SCC组）。3组患者均未合并其他内外科疾病，术前未进行放化疗；排除宫颈病变术后复发的患者。宫颈病变的诊断依据中国子宫颈癌筛查与异常管理相关问题专家共识[2]。

1.2方法 （1）标本收集与处理。将3组患者分别收集宫颈组织标本各50份。（2）免疫组化检测方法。将标本进行CK7、CK8及CK10/13检测：主要试剂为鼠抗人CK7、CK8和CK10/13单克隆抗体，严格采用免疫组化Envision两步法进行（抗体、Envision两步法试剂盒均为北京中杉公司生产）。所有组织标本经10%中性甲醛固定，常规脱水以后经石蜡包埋，连续切片5～6张，每张切片约厚2 m，取其中1张做HE染色，用于核实病理学诊断，剩余切片用于免疫组化染色。具体如下：常规脱蜡至水，切片浸于pH 6.0柠檬酸缓冲液中，微波抗原修复10 min，冷却至室温，充分水洗，PBS浸洗，加入CK7、CK8及CK10/13一抗4℃过夜；PBS浸洗；滴加 CK7、CK8及CK10/13二抗，37℃，15 min；DAB显色30s，苏木素复染。采用该公司提供的阳性切片为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。（3）结果判定：所做免疫组化切片由本院病理科专家阅片审核。CK7、CK8及CK10/13均定位于细胞质，分别将无阳性颗粒、灶状散在性、弥漫阳性及弥漫强阳性分别定义为―、+、2+、3+，将+～3+统一归入到阳性一列。

1.3统计方法 数据采用SPSS14.0统计软件处理，计数资料采用2检验＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

CK7、CK8及CK10/13在LSIL组、HSIL组及SCC组中的表达率差异均有统计学意义（均＜ 0.01），见表 1。LSIL组 CK7、CK8及 CK10/13表达率与HSIL组及SCC组差异均有统计学意义（2≥5.87，均＜ 0.05），HSIL组 CK7及CK8表达率与SCC组差异均有统计学意义（2=5.67、5.91，均＜ 0.05），HSIL组与SCC组CK10/13表达率差异无统计学意义（2=0.70＞ 0.05）。

3　讨论

CK是细胞骨架蛋白的主要成分，与上皮细胞的形态和功能息息相关[7]，而细胞的形态和功能发生变化时往往伴随着CK表达的改变。有研究发现，CK具有极高的保守性和组织分化特异性，与上皮细胞的增殖分化密切相关[8]，细胞的增殖和分化状态也会影响CK的表达，细胞发生恶变后CK的表达既可以发生变化也可以保持不变。癌组织和其来源的正常组织中的CK的表达方式有两种[9]：在正常组织中不表达的CK在癌组织中表达；在正常组织中表达的CK在癌组织中不表达或表达下调。

本研究结果显示，CK7、CK8和CK10/13在不同级别的宫颈疾病中的表达率均不同，随着宫颈疾病的进展，CK7和 CK8在组织中的表达率逐渐增加，CK10/13表达率逐渐下降，即表达缺失率显著增加。CK7是低分子量的CK，在炎症和肿瘤中均扮演者重要的角色[10]。目前对于 CK7的研究主要集中在腺癌和转移性腺癌，Chu等[4]研究了435例上皮来源的肿瘤，发现CK7在大部分腺癌中表达，然而大部分的鳞癌 CK7表达阴性，比如仅21%食管癌中表达CK7，头颈部位的鳞癌中仅28%表达，肺鳞癌中均未见表达，但发育不良的宫颈上皮和鳞状细胞癌往往表达CK7，发现87%宫颈鳞癌中CK7表达阳性，远远高于其他组织来源的鳞癌（平均20%～30%）。Smedts等[5]研究发现正常的宫颈阴道部的鳞状细胞CK7表达缺失，异常的宫颈上皮和宫颈癌倾向于CK7表达阳性。本研究发现，CK7在LSIL组、HSIL组及SCC组中的表达率分别是20%、58%和80%，可见随着宫颈病变级别的升高，其表达率逐渐升高。这研究结果与Smedts等[5]研究结果相似，其研究认为CK7随着病变由CINⅠ到浸润癌的改变，其表达会逐渐增高，并由此认为宫颈病变表达CK7则有可能进展，不表达则有可能消退或持续存在但并不进展。

表1　CK7、CK8和CK10/13在不同宫颈病变中的表达情况 例（%）

CK8是高分子量的B型CK，能在储备细胞，宫颈腺上皮细胞及不成熟化生鳞状细胞中表达，在成熟的化生鳞状细胞中没有表达[11]。本研究发现，CK8在70%的宫颈浸润性癌组织中的表达，略高于Carrilho等[6]研究的57.1%，这种CK8在宫颈组织中表达的差异可能主要是因为检测方法的不同，抗体不同、抗原获得途径不同及来源材料保存质量的差异。Carrilho等[6]研究发现CK8在正常宫颈组织中表达缺失，在CINⅢ中的阳性表达率44.4%；本研究中CK8在HSIL中的表达率为46%。Smedts等[12]研究表明CK8在子宫颈恶性转化过程中表达，认为其如果在LSIL和HSIL病变中表达即有进行性进展的潜力。Ikeda等[13]研究发现CK8在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和 SCC中的表达率逐渐增加，分别是12.8%、22.6%、62.8%及71.4%，这与本研究结果相似，均发现随着宫颈病变的进展，CK8在上皮组织中的阳性表达率增加。由此可认为 CK8在宫颈组织中表达，病变即有可能进一步进展，其是宫颈恶性转化的一个特异性标志物。

CK10/13是鳞状上皮分层和分化的标记，是构成上皮细胞的一种成分，是黏膜非角化复层鳞状上皮终末分化的标志，它的表达常伴随上皮细胞的发生、分化和形态变化，具有明显的组织特异性[8]。因此研究CK10/13的表达在上皮疾病及鳞状细胞癌的发生和诊断上具有一定意义。Carrilho等[6]和Smedts等[14]研究认为CK10/l3表达缺失同宫颈病变级别相关，表达缺失的发生率 CINⅢ高于CINⅠ，CK10/13表达缺失可作为CINⅢ的标志物。Maddox等[15]研究发现，CK10在宫颈浸润癌中的表达率1%～24%，其认为CK10对于宫颈良恶性疾病的鉴别诊断有很高的特异度和敏感性，这结果与本研究的相似。本研究发现CK10/13在不同宫颈疾病中的表达率有明显差别，随着宫颈病变的进展，CK10/13表达率逐渐下降，特别是LSIL与 HSIL或 SCC差异均有统计学意义（均＜0.05），然而CK10/13在HSIL和SCC的表达率差异无统计学意义（＞ 0.05）。Nair等[16]和 Smedts等[14]研究发现，随着宫颈病变级别的升高，CK13表达降低。本研究结果与上述研究结果一致认为CK10/13的表达缺失可以作为宫颈疾病恶性进展的标志物。

综上所述，CK7、CK8的表达和CK10/13的表达缺失可作为宫颈疾病进一步进展的标志物。

参考文献：

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