1.四川省宜宾卫生学校,四川 宜宾 644000;2.西南医科大学药学院,四川 泸州 646000
马齿苋来源于马齿苋科植物马齿苋PortulacaoleraceaL.的干燥地上部分。在《本草经集注》、《新修本草》等古籍中均有记载,又称为五行草、马齿菜、长命草等。我国南北各地均有分布,生于菜园、农田、路旁等,盛产于四川,在我国作为传统中药已经有数千年的历史。其味酸性寒,归肝、大肠经,具有清热解毒、凉血止血、止痢的功效,用于热毒血痢、脓肿、湿疹、丹毒、毒蛇咬伤、便血、痔血、妇女崩漏下血[1]。马齿苋含有有机酸、黄酮、多糖等药用成分,还富含氨基酸、维生素C、维生素B1及维生素B2等,具有较高的药用及食用价值[2-3]。其被我国卫计委列入101种药食同源名单,属药食两用植物,在各地被广泛用作菜肴。为保障该药食两用植物的安全性,笔者实验采用GC-ECD对其中的六六六(BHC)和滴滴涕(DDT)共8种有机氯农药残留量进行了检测[4-6],了解该类农药在马齿苋中的残留水平,现报道如下。
1.1 仪器 Agilent 7820A 气相色谱仪系统(安捷伦科技有限公司),ECD检测器;湖南湘仪TD3(800B)自动平衡离心机(湖南湘仪公司);KQ-50B 型超声清洁器(昆山舒美);Sartorius BT 25S电子天平(德国赛多利斯)。
1.2 材料 二氯甲烷和石油醚(60~90℃)为色谱纯,氯化钠和无水硫酸钠为分析纯。8种有机农药标准品:α-BHC(GBW(E)081427)、β-BHC(GBW(E)081428)、γ-BHC(GBW(E)081429)、δ-BHC(GBW(E)081430)、PP'-DDE(GBW(E)081683)、OP'-DDT(GBW(E)081635)、PP'-DDD(GBW(E)081632)、PP'-DDT(GBW(E)081662),由国家标准物质研究中心提供。
3批马齿苋样品购自宜宾市不同地,经西南医科大学侯杰荣主管中药师鉴定为马齿苋科植物马齿苋。
2.1 GC色谱条件 弹性石英毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.25 μm)OV-1701,63Ni-ECD 电子捕获检测器。进样口和检测器温度分别为230℃、 300℃,进样方式为不分流进样,进样量1μL。程序升温:初始温度150℃,8℃/min升至230℃,保持15 min。理论塔板数按α-BHC峰计算不低于1×106,相邻2 个色谱峰均得到较好的分离,峰型对称性良好。
2.2 对照品储备液的制备 精密称取各对照品适量,用石油醚制成每毫升约含0.25 mg的溶液,摇匀即得对照品储备液,精密量取上述溶液50μL,置25 mL 量瓶中,用石油醚制成每毫升含250 ng的混合储备液;再精密量取该混合储备液1 mL置10 mL 量瓶中,用石油醚制成每毫升含25 ng 的混合对照品溶液,摇匀即得。
2.3 供试品溶液的制备 取适量于60℃干燥3 h的样品,粉碎成细粉,取3 g,精密称定后置于200 mL 具塞锥形瓶中,加入20 mL水浸泡,过夜。精密加入50 mL丙酮,称定质量,超声处理35 min,放冷,再称定质量,加丙酮补充减少质量,加入氯化钠6 g,精密加二氯甲烷25 mL,称定质量,超声处理20 min,放冷,再称定质量,用二氯甲烷补充减少质量,静置分层,将有机相快速转入装有一定量无水硫酸钠的具塞锥形瓶中,放置4 h。精密量取40 mL,在38 ℃水浴上减压浓缩到近干,加入少量石油醚如前反复操作除净二氯甲烷及丙酮,用石油醚溶解并转移至10 mL具塞刻度离心管中,加石油醚精密稀释至5 mL,小心加入硫酸1 mL,振摇1 min,离心(3000 r/min)10 min,吸取上清液备用。
3.1 溶剂空白试验 以提取溶剂石油醚作为空白样品直接进气相色谱仪,考察石油醚溶剂的干扰。结果见图1。
3.2 标准曲线及线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液1、2、5、10、15、20 μL,按相应色谱条件进样,以峰面积计算,得相应农药的回归方程。结果见表1。
表1 线性关系
3.3 精密度试验 取同一混合对照品溶液,按2.1色谱条件连续进样6次,得到各组分各次的峰面积,计算相对标准偏差,RSD在1.25%~2.92%,表明进样精密度良好。
3.4 稳定性试验 取同一份供试品,按照拟定方法进行供试品的制备,分别于 0、6、12、24 h 间隔进样4次,测定各对照品的峰面积积分值,α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC的RSD值分别为2.8%、1.7%、2.6%、4.1%, PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT的RSD值分别为3.3%、3.1%、1.5%、2.7%。结果表明样品在 24 h 内稳定。
3.5 重复性试验 取马齿苋样品 6 份,按照拟定的方法进行供试品的制备和检测,测定结果α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC、 PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT的RSD值分别为2.4%、1.1%、2.9%、3.4%、1.5%、2.2%、2.7%、3.6%,表明该方法重复性良好。
3.6 加样回收率试验 精密称定含量已知的马齿苋样品 6份,每份约1.5g,分别加入样品含量80%、100%、120%的各成分对照品,照2.3方法制备供试液,计算各组分回收率及RSD值,结果见表2。
表2 回收率试验结果(n=6)
3.7 样品测定 精密吸取供试品溶液平行进样2次,取均值,按外标法以峰面积计算马齿苋中8种有机氯农药的残留量,测定结果见表3。
表3 3批马齿苋样品测定结果 (μg·kg-1)
在中药材生产中,存在肥料施用不科学、滥用农药等问题,导致药材质量不稳定或者下降。大量使用的化肥、农药,对我国的生态环境造成巨大破坏。中药材在种植过程中,不可避免地会有农药残留。中药材成为化学农业的“受害者”。农药残留是中药材不可回避的问题,也是药品安全性的重要指标之一,《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》规定:含总BHC(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC )不得超过0.1mg·kg-1;含总滴滴涕(PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT)不得超过0.1mg·kg-1。实验的结果表明,马齿苋药材中BHC和DDT测定结果均低于限量。本实验采用的是对卤代烃有特殊选择性的ECD检测器,灵敏度高,选择性好,所建立的检测方法准确、可行, 可用于马齿苋中8种有机氯农药的含量检测。
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